桂枝汤对高血脂心肌缺血大鼠脂代谢紊乱的调节作用

焦 宏，陈彦静、△，金春亭，鞠大宏，王 筠，王树强

(1.河北北方学院，河北 张家口 075000;2.中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700)

流行病学、实验动物学和临床研究均表明，高脂血症是动脉粥样硬化、心脑血管病的重要危险因素［1］。寻找有效的防治高脂血症药物已成为目前的迫切任务，中药在调节血脂、预防动脉硬化及心脑血管疾病方面具有未病先防和既病防变的优势［2］。“损其心者，调其营卫”是早在《难经》就提出的心系疾病的治法，近年来人们对其治疗心系病症越来越重视。桂枝汤是《伤寒论》的代表方之一，尽管历代医家以桂枝汤类方治疗心系病证取得了很大成就，现代实验研究也证明桂枝汤具有抗菌、抗病毒、抗过敏、镇痛、调节血压、降血糖、增加心肌血流量、改善胃肠消化传导等广泛的药理作用［3-5］，但桂枝汤是否通过改善消化功能、调理脾主运化功能进而达到祛除痰湿(调节脂代谢)的作用环节，实现防治心系病证(冠心病)的功效，值得深入研究。为此，本研究采用高脂血症大鼠心肌缺血(胸痹)模型，探讨桂枝汤对冠心病(胸痹)模型大鼠血脂代谢的调节作用，为冠心病(胸痹)的防治提供实验依据。

1 材料

1.1 材料、试剂

高脂饲料:由10%猪油、2%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2% 丙基硫氧嘧啶、0.1% 钙片和 87.2% 普通饲料配制成。桂枝、白芍、甘草、生姜、大枣及所有药材均购自北京同仁堂药店。按原方比例10∶10∶7∶10∶10配齐药物(生姜切片，大枣剖开)混合，水浴浓缩成10g/L、20g/L浓度。血脂测定试剂盒(TG、TC、HDL-C、LDL-C)购于北京中生生物工程高技术公司，总脂酶测试盒(脂蛋白脂酶 LPL和肝脂酶HL)购于南京建成生物工程研究所。

1.2 动物与分组

健康雄性 SD大鼠 60只，体重 250g～270g，由北京大学医学部实验动物科学部提供。随机分为5组，即对照组、模型组、辛伐他汀组、桂枝汤10g治疗组(简称桂枝汤低剂量组)、桂枝汤20g治疗组(简称桂枝汤高剂量组)，各组动物12只。

2 方法

2.1 动物模型建立

大鼠普通喂养1周后眶内采血检测血脂正常者用于实验。高脂饲料喂养12周，每天15g，期间按70万IU/kg的总剂量肌肉注射给予VD3，于第1周、第4周、第8周初分次给完，建立大鼠高血脂及 AS早期的模型。末次给药前72h，除空白组外，于灌胃给药30min后，各组动物腹腔注射垂体后叶素30u/kg，空白组给予等容量的生理盐水，连续3次，每间隔24h，诱发冠状动脉痉挛，通过心电图测定出现明显的 ST段压低，形成心肌缺血模型［6］。

2.2 给药方法

于实验第12周末大鼠禁食12h断尾取血，检查各组大鼠血清总胆固醇含量，高脂饲料喂养各组大鼠与空白对照组比较，均有明显差异之后，各治疗组分别开始灌胃给药。桂枝汤治疗组:于第13周起开始灌胃给药，每日1次。桂枝汤大、小剂量组给药剂量分别为 20g/kg·d、10g/kg·d(含生药量)，l0ml/kg灌胃给药，1次/d，连续6周。西药对照组:辛伐他汀 5.0mg/kg·d，为成人剂量的 20 倍，10ml/kg灌胃给药，1次/d，连续6周，正常组和模型组以相应量的生理盐水灌胃。

2.3 标本的制备及检测

实验结束，从腹主动脉采血5ml，3500rpm，离心10min，制备血清、血浆。

2.3.1 血脂各项指标的测定 按试剂盒说明测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度胆固醇(HDL)，根据公式 LDL-c=TC-(TG/5+HDL-C)计算低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-c)水平。

2.3.2 血清脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)活性测定 LPL和HL可分解甘油三酯并水解为甘油和游离脂肪酸，用铜试剂测定生成的游离脂肪酸的量，分别计算脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)活性。

2.3.3 血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量测定 取血清按照试剂盒要求测定吸光度值，计算相应酶活性。

2.3.4 肝脏组织苏丹红Ⅳ染色观察 大鼠取血后迅速取出肝脏，观察肝脏的外观并取肝脏右叶边缘1cm处一小块肝组织进行冰冻切片苏丹红IV染色，在光镜下观察肝组织变化。

2.4 统计学处理

实验结果以均数±标准差(珋x±s)表示，数据处理采用SPSS11.5统计软件。采用单因素方差分析，以P＜0.05为统计学有差异显著。

3 结果

3.1 各组大鼠血清中 TC、TG、LDL-C、HDL-C浓度的变化

表1显示，高脂喂养12周时，与对照组相比，模型组 TC、TG、LDL-C均显著增高(P ＜0.01)，HDL-C浓度显著降低(P＜0.01)。结果显示，高脂饲料喂养大鼠形成高脂血症动物模型。

表1 12周各组大鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C浓度的变化(mmol/L)

表2显示，高脂喂养18周后，模型组与对照组相比血清 TC、TG、LDL-C浓度明显升高(P＜0.01)，HDL-C浓度明显降低(P＜0.01);阳性对照辛伐他汀组和模型组相比，血清TC、TG、LDL-C浓度明显降低(P＜0.01)，HDL-C浓度升高(P＜0.05);与模型组比较，桂枝汤高、低剂量组均有显著降脂作用(P＜0.01)，且桂枝汤高剂量组降脂作用强于他汀组。

表2 各组大鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C浓度的变化(mmol/L)

3.2 各组大鼠血浆中LPL和HL的变化

表3显示，与对照组相比，模型组血浆中 LPL和HL含量明显降低(P＜0.01);阳性对照辛伐他汀组和桂枝汤高、低浓度组与模型组相比，血浆中LPL和HL含量明显升高(P＜0.01或0.05);且桂枝汤高浓度组作用强于阳性对照组。

表3 各组大鼠血浆LPL、HL、SOD和MDA的变化(n=8)

3.3 各组大鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD) 活性及丙二醛(MDA)含量测定

表3显示，与对照组相比，模型组血浆 SOD含量明显降低(P＜0.01)，MDA明显升高(P＜0.05);与模型组相比，各治疗组血浆SOD含量明显升高(P＜0.01)，MDA明显降低(P＜0.05)，且桂枝汤高浓度组作用强于阳性对照组。

3.4 各组大鼠肝脏的病理学变化

病理学检查:肉眼观察大鼠肝脏大体变化，正常组大鼠肝脏外观呈红褐色，表面光滑，边缘锐利，质软有弹性;模型组大鼠肝脏肿大易碎、包膜稍紧张，外观呈黄红和灰红相间，表面和切面油腻，治疗组外观色泽接近于正常组。

图1显示，冰冻切片镜下观察可见肝细胞核蓝染，脂滴呈橘红色。正常对照组肝细胞形态排列正常，肝小叶规则，细胞质分布均匀，可见少量脂滴分布。模型组多数肝小叶结构轮廓基本消失，肝细胞形态不规则，胞浆内充满大量橘红色脂滴，大脂滴和中等大小脂滴较多，呈重度脂肪肝病变。各药物治疗组整个肝小叶脂肪滴明显减少，脂肪病变程度明显改善。

图1 肝脏组织病理组织学观察结果(苏丹红Ⅳ染色×400)A.对照组 B.模型组C.辛伐他汀组D.桂枝汤高剂量组

4 讨论

高脂血症是指血液中一种或多种脂质成分含量的异常增高。研究显示，血脂异常代谢导致对动脉血管壁的损伤，是形成动脉粥样硬化的重要促进因素，也是高血压、冠心病和脑血管意外的重要危险因素［7、8］。因此，保持正常的血脂水平是预防心脑血管疾病发生的重要措施之一。本实验结果表明，与模型组比较，桂枝汤高、低剂量组血清 TG、TC、LDLC含量有不同程度的降低，尤其是桂枝汤药高剂量组作用较显著，同时可以升高HDL-C含量。桂枝汤治疗组HDL的升高，意味着胆固醇逆向转运作用的增强，影响HDL代谢的同时也起着降脂作用。

LPL 和 HL 是多种脂蛋白代谢的关键酶［9、10］，LPL表达或活性增高可以降低血清中TG、LDL和极低密度脂蛋白(VLDL)的水平，从而防止高脂血症的发生。LPL可催化乳靡微粒(CM)和VLDL中的甘油三酯水解，HL进一步催化水解CM和VLDL残骸颗粒中的甘油三酯［11］。本研究结果显示，桂枝汤可增加血清LPL、HL的活性，提示桂枝汤可通过影响脂蛋白代谢酶途径调节高脂大鼠血脂代谢。

肝脏是脂肪代谢的重要器官，高脂性饲养引起大鼠脂质代谢紊乱时会出现血脂升高以及肝脏的脂质堆积［12］。本实验发现，桂枝汤能够减轻高脂大鼠肝脏脂肪变性，其原因可能和桂枝汤降低高脂大鼠血清TC、TG、LDL-C水平，减少 TC和TG在肝脏中蓄积有关。此外，脂肪肝的形成还与肝脏内氧化应激和脂质过氧化反应损伤引起的“二次打击”有关。从实验结果分析我们认为，桂枝汤减轻高脂大鼠肝脏脂肪变性与降低肝脏血液中 MDA含量、提高SOD活性，与肝组织抗氧化损伤有关。

综上，我们认为桂枝汤具有明显的调节脂代谢的作用，其机制可能通过健脾和胃、补益中气、调节营卫，恢复虚弱之脾气，以尽其分清泌浊之职守，使滞留营中膏脂减少，同时和提高大鼠总抗氧化能力有关，对动脉粥样硬化及冠心病的防治具有重要意义，其作用机制值得进一步的研究。

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