开口箭醇提物抗慢性咽炎活性研究

邬昊洋 周 园 李诺飞 贺海波 邹 坤

（1.三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室，湖北宜昌 443002；2.宜昌市妇幼保健院，湖北宜昌 443000；3.三峡大学 中医临床医学院，湖北宜昌 443000）

慢性咽炎主要为咽黏膜慢性炎症，其病变主要在咽部粘膜层，粘膜慢性充血，粘膜及粘膜下层结缔组织增生，粘液腺肥大，粘液分泌增多，其主要临床表现为咽部不适感，如干燥、发痒、灼热，以及异物感等.慢性咽炎病变部位特殊，病因复杂，缠绵难愈，给患者的工作和生活带来很大影响［1］.西医大多采用抗生素类药物治疗或辅以地塞米松等激素类制剂，但疗效不佳，易反复发作；中医药对慢性咽炎治疗具有毒副作用小、作用缓和持久的特点.很多学者、医家从中医整体观念出发，辨证论治，取得了比较好的疗效［2］.开口箭（Tupistra chinensis Bak.）为百合科铃兰族开口箭属植物，具有清热解毒、祛风除湿、散瘀止痛的功效，主治咽喉肿痛，白喉，风湿痹痛，跌打损伤，胃痛，痈肿疮毒，毒蛇、狂犬咬伤等［3］.开口箭在民间作为清咽利喉药已有悠久历史，在前期的临床和实验研究证实开口箭对急、慢性咽炎有较好的疗效［3－4］.为进一步探讨其作用机制，进行了开口箭醇提物对慢性咽炎大鼠血清IL－1β及TNF－α等指标影响的实验研究.

1 材料与方法

1.1 动物

Wistar大鼠（SPF级）：48只，体重（200±20）g，由湖北省疾病控制中心实验动物中心提供，合格证：SCXK（鄂）2008－0005.

1.2 药品及试剂

开口箭醇提物：由天然产物研究与利用湖北省重点实验室提供；西瓜霜含片：桂林三金制药有限公司生产；氨水（浓度25%～27%）：洛阳市化学试剂厂；IL－1β和TNF－α：北京东亚免疫技术研究所.

1.3 方法

1）慢性咽炎动物模型的建立.实验采用Wistar大鼠作为研究对象，用喉头喷雾器将25%的氨水向其咽部喷雾，每日2次，上、下午各1次，每次喷3下（约0.5 mL），连喷40d.氨水是碱性刺激物质，高浓度局部喷雾能刺激咽部粘膜，使之充血肿胀，形成慢性炎症.

2）动物的分组及给药.将48只Wistar大鼠随机分为6组：正常组、模型组、西瓜霜组、开口箭醇提物剂低、中、高剂量组.后5组动物按上法造模40d后，于第40～47d分别用喉头喷雾器给大鼠咽部喷蒸馏水、西瓜霜含片液（1.14g／kg）、开口箭醇提物低剂量组（0.16g／kg）、开口箭醇提物中剂量组（0.24g／kg）、开口箭醇提物高剂量组（0.32g／kg）.

3）检测方法.实验第47d各组动物给药结束后，股静脉取血，3 000rpm／min离心15min，取血清检测IL－1β和TNF－α含量.然后立即取咽部粘膜及粘膜下组织进行病理形态学观察.具体方法如下：组织固定48h后取出，切为2mm厚度，按常规脱水、透明、石蜡包埋、切片、HE染色，于光学显微镜下观察、摄片.

2 结 果

2.1 一般状态

从造模第2d开始，大部分大鼠逐渐出现搔抓口部、频饮水而量多、口腔分泌物增多、纳食减少、自发活动减少、咽部充血呈鲜红色、肿胀等症状与体征；第3～7d症状较明显，半月后大鼠明显适应，症状稍减退；正常对照组则未出现上述情况；开口箭醇提物高剂量组、西瓜霜组治疗7d后，上述症状、体征基本恢复正常，中、低剂量组恢复稍差；模型对照组的上述症状、体征则仍然存在.

2.2 血常规指标变化

与正常组相比，模型组白细胞和粒细胞数目显著升高（P＜0.01）；开口箭醇提物可使其数目降低，与模型组比较具有显著性差异（P＜0.01），其改善作用随剂量的增加而增强，而且开口箭醇提物高剂量组效果优于西瓜霜组（见表1）.

表1 开口箭醇提物对慢性咽炎大鼠血常规的影响，n＝8）

表1 开口箭醇提物对慢性咽炎大鼠血常规的影响，n＝8）

与正常组比较：＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与模型组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01.

组别 剂量／（g·kg－1）白细胞数／（109·L－1）粒细胞数／（109·L－1－－ 5.73±0.5 0.4±0.1模型组 －－ 11.40±0.9＃＃2.6±0.2＃＃开口箭醇提物低剂量组 0.16 9.35±0.3＊＊ 0.6±0.1＊＊开口箭醇提物中剂量组 0.24 5.63±0.6＊＊ 0.5±0.1＊＊开口箭醇提物高剂量组 0.32 7.49±0.5＊＊ 0.5±0.1＊＊西瓜霜组 1.40 5.90±0.5＊＊ 0.9±0.1正常组）＊＊

2.3 开口箭醇提物对慢性咽炎大鼠血清IL－1β和TNF－α含量的影响

与正常相比，模型组血清中IL－1β和TNF－α含量显著升高（P＜0.05 ＆P＜0.01）；开口箭醇提物可使血清中IL－1β和TNF－α含量降低，与模型组比较具有显著性差异（P＜0.05 ＆P＜0.01），其改善作用随剂量的增加而增强，而且开口箭醇提物高剂量组效果优于西瓜霜组（见表2）.

表2 开口箭醇提物对慢性咽炎大鼠血清IL－1β和TNF－α含量的影响（，n＝8）

表2 开口箭醇提物对慢性咽炎大鼠血清IL－1β和TNF－α含量的影响（，n＝8）

与正常组比较：＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与模型组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01.

组别 剂量／（g·kg－1）IL－1β／（pg·mL－1）TNF－α／（pg·mL－1）正常组 －－ 6.66±0.12 22.44±0.27模型组 －－ 9.87±0.30＃＃ 27.88±1.87＃开口箭醇提物低剂量组 0.16 8.22±0.15 22.78±0.67＊开口箭醇提物中剂量组 0.24 8.46±1.11 26.54±1.95＊＊开口箭醇提物高剂量组 0.32 7.71±0.61＊＊ 23.97±0.13＊＊西瓜霜组 1.40 7.90±0.56＊＊ 25.34±0.16＊＊

2.4 开口箭醇提物对慢性咽炎大鼠咽部组织形态学的影响

HE染色结果显示：正常组可见黏膜上皮层多为未角化复层扁平上皮；固有层多为致密结缔组织，内有少量血管，未见有血管扩张，水肿，炎性细胞浸润及纤维组织增生；黏膜下层、肌肉层结构正常，均未见明显炎性改变.模型组：大部分动物咽部黏膜上皮层可见明显增生；固有层内见血管扩张及大量炎性细胞浸润，纤维组织增生；黏膜下层可见腺体肥大、增生、萎缩等，其周围见血管数量增多、血管扩张、炎性细胞密集性浸润及纤维组织增生；与模型组比较，开口箭醇提物和西瓜霜治疗后大部分大鼠咽部未见角化复层扁平上皮；固有层内充血轻，未见明显纤维增生，部分动物结缔组织紧密接近正常组；黏膜下层混合腺未见明显肥大、增生、萎缩等（如图1所示）.

图1 开口箭醇提物对慢性咽炎大鼠咽部组织形态学的影响

3 讨 论

氨水是碱性刺激物质，局部喷雾能刺激咽部黏膜，使之充血肿胀，形成急性炎症，反复刺激，形成慢性炎症.在实验中，选用 Wistar大鼠为研究对象，造模后，白细胞和粒细胞数目显著升高；炎性细胞因子IL－1β和TNF－α含量显著升高；病理切片结果显示：模型动物咽部黏膜上皮层可见明显增生、炎性细胞浸润，纤维组织增生及腺体肥大、增生、萎缩等.上述病理特征的变化基本符合临床上慢性咽炎诊断标准［5－6］.医书记载：开口箭以根状茎入药，具有清热解毒、祛风除湿、散瘀止痛的功效［7］，现代药理实验研究表明其具有较强的抗肿瘤、抗炎［3］、抑菌、醒酒等活性.本实验研究发现：在用开口箭醇提物治疗后，开口箭醇提物在改善大鼠一般状态，降低白细胞和粒细胞数目及IL－1β、TNF－α含量，改善病理组织形态学方面显示出较好的疗效和优势.本实验证实开口箭醇提物在改善咽部炎性症状，改变咽部病理组织形态方面，具有独特优势.其治疗咽炎的主要机制是：减少炎性细胞因子生成，对抗过量细胞因子，减缓对炎性细胞的趋化与激活，从而达到对抗咽部炎症.

［1］ 唐大轩，葛 麟，王 莉，等.甘桔冰梅片防治咽炎作用研究［J］.中药药理与临床，2010，26（5）：137－139.

［2］ 徐兰兰，邹 坤，汪錾植，等.开口箭提取物治疗急性咽炎的实验研究［J］.江苏中医药，2008，40（8）：78－79.

［3］ 中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则［M］.北京：人民卫生出版社，1993：308.

［4］ 林 慧，梅全喜.中药制剂治疗急性咽炎的研究进展［J］.时珍国医国药，2007，10（4）：2448.

［5］ 廖华军，马 赟，彭国平.胜红蓟治疗慢性咽炎有效部位的筛选［J］.中华中医药学刊，2010，28（1）：185.

［6］ 贾 敏，袁 琨.慢性咽炎患者咽部细菌调查分析［J］.中华医院感染学杂志，2010，20（13）：1883.

［7］ 王 停，荆 鲁，鲁献斌，等.玉枢含片对急性咽炎大鼠血清白介素－6及肿瘤坏死因子等指标的影响［J］.北京中医药大学学报，2002，25（4）：31－33.