山西省蔬菜灰霉病菌对嘧霉胺的抗性监测

余正军，刘慧平

（山西农业大学 农学院，山西 太谷030801）

灰霉病是由灰葡萄孢菌［Botrytis cinerea Pers］引起的一种重要病害［1，2］，主要危害黄瓜、番茄、茄子、葡萄等作物。目前该病害仍以化学防治为主［3，4］，但因灰霉病菌具有繁殖速率高、遗传变异大和适合度高等特性，长期连续大量用药使得该病菌对一些常用的内吸性杀菌剂产生了严重的抗药性［5］。目前主要以苯胺基嘧啶类杀菌剂（如嘧霉胺）防治灰霉病害［6］。嘧霉胺在山西省内虽然没有长期大量连续使用，但据南京农业大学贾晓华等人的研究证明，江苏省淮阴地区抗性频率已经达到了43.64%［7，8］；由于在山西省内还没有关于灰霉病菌对嘧霉胺抗药性的监测报道，作者于2010～2011年通过对采自山西省4个地区（晋南、晋中、晋东南、晋北）的灰霉病菌进行了嘧霉胺抗性监测，了解了灰霉病菌在山西省主要蔬菜种植区对嘧霉胺的抗性频率和抗性水平，以期对生产上的合理用药有指导作用。

1 材料与方法

1.1 调查地区的划分

由于每个地区的总体抗药性水平各不相同，因此将山西省划分为4个地区进行调查：晋南地区（临汾和运城）、晋中地区（太谷、太原、榆次）、晋北地区（忻州和大同）、晋东南地区（长治和晋城）；再在每个地区分四个不同区域，然后进行广泛的采样。

1.2 菌株的采集

2010年8月～11月，在山西省晋南、晋中、晋北、晋东南4个地区保护地番茄、黄瓜上进行随机采样，将采集的病果在实验室进行分离。分离时，将病果放在75%的酒精中，2min后挑取一小块病组织转接到PDA平板中进行培养，2d后用显微镜镜检是否为灰霉病菌［9］，后转接进行纯化保存。

1.3 供试杀菌剂

96.1%嘧霉胺原药，由山东双星农药厂提供。

1.4 含药培养基的制备

96.1%嘧霉胺原药用丙酮配成500mg·L－1的母液，然后把母液放在4℃的冰箱中贮藏。使用时以无菌水进行稀释，以10%药液量加入融化的PDA培养基中（冷却至45～50℃）充分摇匀，制成含最终所需药量的PDA平板，用以进行敏感性的测定。

1.5 灰霉菌株对嘧霉胺的敏感性测定

采用菌丝生长速率法进行敏感性测定，将分离好的菌株进行活化培养，3d后，自菌落边缘打取生长活力一致、直径为0.5cm菌块。设定5个浓度梯度：0.25mg·L－1，0.50mg·L－1，1.00mg·L－1，5.00mg·L－1和10.00mg·L－1；每个处理重复3次，将母液（500mg·L－1）用无菌水稀释到一定的比率加入到培养基中，待培养基冷却后，将打取好的菌块接种到含药平板上，4d后采用十字交叉法测定菌落直径，由菌落直径的平均值（cm）计算药剂对菌丝生长的抑制率。根据所得的抑制率，用DPS软件处理后得出EC50值。抗性水平依据纪明山文中所报道的敏感基线值（0.0911mg·L－1）进行判别，抗性倍数小于5，属于敏感菌株（S），在5～10之间为低抗菌株（LR），在10～40之间为中抗菌株（MR），大于40为高抗菌株（HR）［10］。

2 结果与分析

2.1 抗性频率及抗性水平测定结果

由表1可知，对山西省各个地区所采集的病果成功分离到169个灰霉菌株，其中晋南地区19个，晋中地区75个，晋东南地区24个，晋北地区51个。晋中、晋南、晋东南和晋北地区的灰霉菌对嘧霉胺的抗性频率分别为60.0%、89.5%、25.0%和41.1%；晋南地区主要以高抗菌株为主，占57.9%；晋中地区主要以抗性菌株为主；而晋东南和晋北地区则主要以敏感菌株为主，分别占群体的75.0%和58.9%。

表1 山西省各地区灰霉菌对嘧霉胺的抗性频率Table 1 Resistance frequencies of B.cinerea to pyrimethanil in various regions in Shanxi Province

2.2 嘧霉胺抗性菌株在山西各地区的分布（图1）

由图1可以看出，在晋北，晋中和晋东南地区灰霉病菌对嘧霉胺的敏感菌株所占比例较高；而晋南地区最少，主要以高抗为主，表明晋南地区已经产生了较高水平的抗性，继续使用嘧霉胺已对其基本无效；在晋中地区主要以中抗菌株为主，表明在晋中地区已经产生了中等抗性水平，应注意合理或者轮换用药；而在晋北和晋东南地区抗性水平还比较低。

图1 嘧霉胺抗性频率的地区分布／%Fig.1 Region distribution of resistance frequencies to pyrimethanil／%

3 结论与讨论

所测山西省内四个地区中，已经发现有较高抗性水平的蔬菜灰霉病菌株，这可能是由于不合理用药引起的，因此在这些地区，应注意采取综合防治，改变目前主要依靠化学手段防治的单一方法，走综合治理的道路。就蔬菜灰霉病菌而言，应以调节生态环境和生物防治为主，以化学防治为辅的综合防治策略，以预防抗性的发生发展。同时由于受到菌种采集地的单一性及其采集数量的影响，这并不能代表山西省内蔬菜灰霉病菌抗药性的全部情况，因为该菌传播范围广，繁殖能力强，因此山西省内的情况有待进一步全面跟踪监测。

［1］李宝笃，沈崇尧.植物病原真菌对杀菌剂的抗性及对策［J］.植物病理学报，1994，24（3）：193－196.

［2］戴富明，周世明，陆金萍，等.上海郊区保护地主要蔬菜灰霉病菌抗药性的初步研究［J］.上海农业学报，1996，12（4）：73－76.

［3］A B Orth，M Rzhetskaya，E J Pell，et al.A serine（threonine）protein kinase confers fungicide resistance in the phytopathogenic fungus ustilago maydis［J］.Applied and environmental microbiology，1995，61（12）：2341－2345.

［4］Baij J，Zhu Q，Brain P，et al.Resistance risk assessment of cereal eyespot，Tapesia yallundae and Tapesia acuformis，to the anilinopyrimidine fungicide，cyprodinil［J］.European journal of plant pathology，2000，106（9）：895－905.

［5］胡伟群，陈杰.灰霉病的化学防治进展［J］.现代农药，2002（4）：8－11.

［6］杜会光，李春.棚室番茄灰霉病的发生与防治［J］.安徽农学通报，2005，11（2）：55－55.

［7］贾晓华.番茄灰霉病菌和油菜菌核病菌对嘧霉胺的敏感性基线及番茄灰霉病菌抗药性研究［D］.南京农业大学，2004：38－46.

［8］纪明山，程根武，张益先，等.灰霉病菌对多菌灵和乙霉威抗性研究［J］.沈阳农业大学学报，1998，29（3）：213－216.

［9］高玉亮，李葵花.病原真菌单孢子显微镜下分离技巧［J］.植物保护，1999（6）：48.

［10］纪明山，祁之秋，王英姿，等.番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性［J］.植物保护学报，2003，30（4）：396－400.