山西省番茄早疫病菌对腈菌唑的抗药性监测

史晓晶，韩巨才

（1.忻州师范学院 生物系，山西 忻州034000；2.山西农业大学 农学院，山西 太谷030801）

番茄早疫病又称轮纹病，由茄链格孢菌（Alternaria solani Sorauer）侵染所致，各地普遍发生，是番茄的重要病害之一。该病还能为害马铃薯、茄子、辣椒等［1］。为有效防治该病，我国科研工作者在番茄早疫病的防治方面已做了大量的研究。在室内，百菌清和百菌清三氟衍生物对番茄早疫病菌都有较好的抑制效果，但后者的效果明显优于前者［2］。在田间，50%异菌脲 WP、代森锰锌、杀毒矾、百菌清、腐霉利、53.8%可杀得2000DF、苯醚甲环唑10%水分散粒剂对番茄早疫病有较好的防治效果［3～7］。经过调查得知，山西省内也有一些菜农选用腈菌唑这类麦角甾醇生物合成抑制剂（SBIs）来防治番茄早疫病。

SBIs是一类防治农作物真菌病害的内吸性杀菌剂，可抑制病原菌细胞膜上麦角甾醇的生物合成。麦角甾醇是真菌细胞膜的重要组分，通过与磷脂结合而稳定膜结构，具有调节膜流动性的功能，在确保膜结构的完整性、与膜结合的酶的活性，细胞活力及物质运输等方面起着重要作用［8］。同时其含量和组分的改变可影响真菌的繁殖。在SBIs被广泛应用8年后一些靶标菌便产生了抗药性［9］。早期研究认为真菌对SBIs的抗药性是由多基因控制的，且其适应性差，在自然界很难形成抗性群体，故认为病菌对SBIs产生抗药性的风险很小［10］。但经几十年的研究发现病菌对SBIs的抗药性并没有人们预期的那样乐观，有关病菌对SBIs产生抗药性的报道逐渐增加。

到目前为止国内外关于番茄早疫病的研究主要在生物学特性、病菌生理分化现象、病害流行规律和化学防治等方面，在抗药性方面集中在一些老药剂上，还未见对腈菌唑抗药性方面的报道［11］。故本文针对山西省各地区番茄早疫病菌进行了抗腈菌唑监测，了解抗药性水平及抗性分布情况，以便合理用药；同时进行风险评估，为及早研究和采取延缓或克服抗药性治理策略奠定基础。

1 供试材料与方法

1.1 供试菌株

从山西省晋中地区祁县、晋南地区运城、晋东南地区长治、晋北地区大同和晋西北地区五寨5个地区，随机取样采集番茄早疫病病叶，于实验室中分离。

1.2 供试杀菌剂

96.5%腈菌唑原药，山东双星农药厂。

1.3 培养基

PDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL；

含药培养基：取10.37mg腈菌唑溶于10mL丙酮溶液，配成10 000mg·L－1母液，使用时再配成所需浓度。一般以1mL药液加入9mL培养基为宜，此比例不会影响培养基凝固（药剂浓度被稀释10倍）。培养基冷却至50℃左右时加入药剂，混匀后制成含药培养基。

1.4 菌种的采集与命名

番茄早疫病菌采自山西各地罹病的叶片。将所采样品分别装入小袋隔离，避免不同菌株间相互污染。菌株以“采样地点（市或县）的大写拼音头（声母）＋序号”命名。

1.5 菌种的分离

在病健交界处切块，依次用75%乙醇浸2～3s、15%次氯酸漂洗3min、无菌水洗涤3次后，接于PDA平板上，25℃培养至产生孢子或菌丝为止，挑取孢子或菌丝，移到新PDA平板上。

1.6 番茄早疫病菌对腈菌唑敏感性的测定及敏感基线的建立

将腈菌唑母液用无菌水配制成100mg·L－1、50mg·L－1、25mg·L－1、12.5mg·L－1和6.25 mg·L－15种浓度，各取1mL分别与9mLPDA培养基混配，制成10mg·L－1、5mg·L－1、2.5 mg·L－1、1.25mg·L－1和0.625mg·L－1的含药培养基。待培养基冷却后接入菌碟，菌面向下，每皿一块，25℃培养5d，用十字交叉法测量菌落直径。试验重复3次。依据下式计算不同浓度对菌丝生长的抑制率：

以上数据均采用DPS软件处理，求出毒力回归方程和EC50值（mg·L－1）。

1.7 抗性菌株抗性水平和抗性频率测定

将各地菌株的EC50与敏感基线比较，统计抗性水平，计算抗性频率。抗性系数＝抗性菌株EC50／敏感菌株EC50，结果小于5为敏感菌株，5～20为低抗菌株，20～100为中抗菌株，大于100为高抗菌株。

2 结果与分析

2.1 番茄早疫病菌对腈菌唑敏感基线的建立

在山西省5个调查地区共采集并分离到114个菌株，其中祁县29个，运城28个，长治24个，大同18个，五寨15个，且全部可以使番茄叶片发病。

番茄早疫病菌寄主范围虽然广泛，但却主要侵染蔬菜，尚未找到野生菌株，也未见该病菌对腈菌唑敏感基线的报道。山西省五寨县地处偏远，从未用过腈菌唑，可将该地菌株作为相对敏感菌株，测得EC50值定为相对敏感基线（表1）为0.52mg·L－1，最低抑制浓度为5.0mg·L－1。

2.2 番茄早疫病菌对腈菌唑敏感性测定结果

由表2可见，大同、长治、祁县分别有3株、9株、16株呈低抗水平；运城敏感菌株仅有6株，同时还出现了3株中抗菌株。结果表明：山西省大部分地区番茄早疫病菌对腈菌唑产生了不同程度的抗性，主要集中在低抗水平。

表1 五寨早疫病菌对腈菌唑敏感性的测定Table 1 Sensitivity to Myclobutanil of A.solani isolates in Wuzai

表2 山西省各地区番茄早疫病菌对腈菌唑抗性监测Table 2 The resistance monitoring of A.solani isolates to Myclobutanil in five areas of Shanxi

从抗性频率的总体上看（图1，表2），山西省番茄早疫病菌的抗药分布在各地区有所不同。运城（晋南地区）的总体抗性频率最高，达78.57%，其中低抗菌株占相当大的比例，为67.86%，中抗菌株为10.71%；祁县（晋中地区）的低抗比例也较高，为55.17%；而大同（晋北地区）和长治（晋东南地区）的抗性菌株的比例均在50%以下。结果表明：腈菌唑的低抗菌株在群体中占相当大的比例，已处于发展阶段，应采取有效措施加以控制。

图1 山西省番茄早疫病菌对腈菌唑的抗性频率Fig.1 Resistant frequency of A.solani isolates to Myclobutanil

3 结论与讨论

本试验测定了114株番茄早疫病菌对腈菌唑的敏感性，检测到了敏感、低抗和中抗菌株。这些抗性菌株主要集中在晋南和晋中地区且都未形成规模，同时在这两地也检测到了敏感菌株，因此，可判断山西省番茄早疫病菌还没有对腈菌唑产生严重的抗药性，但在适当条件下会产生较大的影响，应引起重视，应对晋南和晋中地区早疫菌对腈菌唑的抗药性情况进一步跟踪监测，以确定其发展动态，从而判断是否有产生严重抗药性的危险，进而及早采取有效措施防止其抗药性的发展，延长腈菌唑的使用寿命。

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［2］杨丽娟，李俊峰，徐蓉，等.百菌清及其三氟衍生物对番茄早疫病菌的室内抑菌活性比较［J］.农药学报，2004，43（11）：518－519.

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［6］师宝君，惠抗弟，秦虎强，等.53.8%可杀得2000DF防治番茄早疫病菌药效试验［J］.农药，2001，40（9）：34－35.

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［10］Fuch A，Drandarevski C A.The likelihood of development of resistance to systemic fungicides which inhibit ergosterol biosynthesis［J］.Neth J Plant Pathol，1976，82：85－87.

［11］许修宏，刘亚光，郭亚芬，等.番茄叶霉病药剂防治研究［J］.东北农业大学学报，1999（1）：36－40.