玉屏风散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂对免疫抑制小鼠免疫功能影响的比较

樊凯芳，赵建平，冯振宇

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.山西中医学院中西医结合医院，山西 太原030013）

汤剂作为传统中药剂型，虽具有吸收快、疗效好、能随症加减等优点，但亦有服用携带不便、质量标准不明等缺点。中药配方颗粒是以符合炮制规范的优质药材为原料，采用现代高新技术提取、浓缩、制粒而成的产品系列，具有可直接冲服、使用及携带方便等优点，在临床使用逐渐增多。玉屏风散出自于朱丹溪《丹溪心法》，由黄芪、防风、白术组成，具有益气固表、祛风止汗、扶正固本功效，广泛应用于临床各科。现代药理学研究亦证实，玉屏风散具有调节、增强机体免疫功能的作用，包括特异性免疫、非特异性免疫等。为给中药配方颗粒替代中药饮片提供依据，本研究通过实验，将玉屏风散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂对免疫抑制小鼠免疫功能的影响进行了比较。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 昆明种小白鼠，6 w～8 w，体重（20±2）g，雌雄各半。由中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所提供。生产许可证号：scxk20090017。

1.1.2 实验药物 玉屏风散由黄芪、白术、防风组成，中药饮片、配方颗粒（由同批次相应饮片制备而成），均由广州一方制药有限公司提供；传统饮片汤剂（黄芪 30 g，白术 30 g，防风 15 g，共计 75 g/d）按传统煎煮法做成水煎液，并浓缩至含生药0.25 g/mL，0.5 g/mL，1 g/mL 3种浓度。配方颗粒汤剂：取与饮片剂量相当的配方颗粒（黄芪颗粒6 g，白术颗粒9 g，防风颗粒3 g），加80℃～100℃的水配制成相应的浓度（同传统饮片组）。

1.1.3 实验仪器 JA5003型电子分析天平（上海精科天平厂）；UV-2550紫外分光光度计（日本岛津）；DDL-5冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）；B×60型显微镜（日本OLYMPUS公司）。

1.1.4 实验试剂 环磷酰胺（上海华联制药有限公司）；血红蛋白稀释液（都氏液，迈克科技）；生理盐水（山东齐都药业有限公司，批号：1D07091609）；姬姆萨染液（上海江莱生物科技有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 分组 72只实验动物按随机数字表分为6组，分别为正常对照组、环磷酰胺组（模型组）、玉屏风散传统饮片汤剂低、高剂量组和配方颗粒汤剂低、高剂量组，每组12只。

1.2.2 给药及造模 动物常规饲养3 d后进行给药，药物剂量按人鼠体表面积折算等效比率剂量表［1］，计算出小鼠的等效剂量。传统饮片汤剂低、高剂量组分别为每天5 g/kg、10 g/kg，配方颗粒汤剂低、高剂量组同传统饮片汤剂组，正常对照组和模型组小鼠每天给予20 g/kg的生理盐水溶液。各组均为每日灌胃1次，连续10 d。给药前除正常对照组外，各组腹腔注射环磷酰胺80 mg/kg复制免疫抑制模型，正常对照组腹腔注射等量的生理盐水。

1.3 指标观察

1.3.1 对小鼠免疫器官的影响 各组于最后1次给药后2 h将小鼠脱颈椎处死，取胸腺、脾脏称重，并计算脾指数、胸腺指数。

1.3.2 对小鼠腹腔吞噬细胞吞噬功能的影响 在末次给药后小鼠腹腔注射5%可溶性淀粉2 mL，24 h后，每只小鼠取2%鸡血红细胞腹腔注射1 mL，间隔30 min后眼眶放血，颈椎脱臼处死，打开小鼠皮毛，腹腔注射Hank′s液0.5 mL，轻揉小鼠腹部1 min～2 min后，腹膜剪小口，无菌塑料吸管吸取腹腔液于载玻片上摊开，放湿盒内，置37℃培养箱中孵育30 min后取出，用生理盐水冲洗，自然晾干后，用Giemsa-wright染色，再用生理盐水淋洗，晾干后，油镜下观察，计数200个巨噬细胞中吞噬的鸡红细胞总数，计算巨噬细胞吞噬百分率，即吞噬鸡红细胞的巨噬细胞占记数巨噬细胞数的百分数。

1.3.3 对小鼠脾抗体生成细胞功能的影响 给药第5天各组动物腹腔注射5%绵羊红细胞（SRBC）0.2 mL，免疫5 d后取脾，采用分光光度计法［2］测定脾抗体生成细胞功能（PFC），以OD值表示。

1.3.4 对小鼠血清溶血素形成的影响 眼球取血，静置取血清，按1∶50稀释，依次加入5%SRBC 0.5 mL、10%补体1 mL，37℃孵育30 min后离心取上清，加都氏试剂，分光光度计于540 nm波长比色读取OD值。另取5%SRBC 0.25 mL，加入都氏试剂，比色读取OD值，即为实验中所用SRBC半数溶血时的OD值。血清溶血素含量以半数溶血值HC50表示，即样品OD值与实验中所用SRBC半数溶血时OD值的比值再乘稀释倍数。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0软件进行单因素方差分析，实验数据以（±s）表示，组间比较采用 t检验。以 P＜0.05为有统计学意义。

2 结 果

2.1 对小鼠免疫器官的影响

各组小鼠脾指数、胸腺指数的比较，结果见表1。

表1 各组小鼠脾指数、胸腺指数的比较 （±s）

表1 各组小鼠脾指数、胸腺指数的比较 （±s）

注：与模型组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01

组别 n 剂量（g/kg）脾指数（mg/10 g）胸腺指数（mg/10 g）正常对照组 12 - 40.5±2.32） 22.4±2.12）模型组 12 - 35.4±3.015.4±2.3玉屏风散饮片组 24537.1±2.417.6±3.11039.6±2.21） 21.5±2.51）玉屏风散颗粒组 24536.0±2.618.0±2.61038.4±3.51） 20.7±3.11）

由表1可见，与正常对照组比较，模型组小鼠脾指数、胸腺指数显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，玉屏风散饮片、颗粒高剂量组脾指数、胸腺指数均显著升高（P＜0.05），玉屏风散饮片、颗粒低剂量组脾指数、胸腺指数升高，但差异无统计学意义（P＞0.05）；玉屏风散饮片高剂量组和颗粒高剂量组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 对小鼠腹腔吞噬细胞吞噬功能的影响

结果见表2。

表2 对各组小鼠腹腔吞噬细胞吞噬功能的影响 （±s）

表2 对各组小鼠腹腔吞噬细胞吞噬功能的影响 （±s）

注：与模型组比较，1）P＜0.05

组别 n 剂量（g/kg）吞噬率（%）正常对照组 12 - 65.5±15.31）模型组 12 - 45.4±13.0玉屏风散饮片组 24550.1±10.41062.6±11.21）玉屏风散颗粒组 24551.2±13.61061.4±13.51）

由表2可见，与正常对照组比较，模型组小鼠吞噬率显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，玉屏风散饮片、颗粒高剂量组小鼠吞噬率均显著升高（P＜0.05），玉屏风散饮片、颗粒低剂量组吞噬率虽有升高趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）；玉屏风散饮片高剂量组和颗粒高剂量组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 对小鼠脾抗体生成细胞功能的影响

结果见表3。

表3 对各组小鼠脾抗体生成细胞功能的影响 （±s）

表3 对各组小鼠脾抗体生成细胞功能的影响 （±s）

注：与模型组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01

组别 n 剂量（g/kg）脾抗体生成细胞（OD）正常对照组 12 - 0.655±0.0832）模型组 12 - 0.345±0.032玉屏风散饮片组 2450.461±0.023100.597±0.0761）玉屏风散颗粒组 2450.485±0.036100.614±0.0651）

由表3可以看出，与正常对照组比较，模型组小鼠脾抗体生成细胞OD值显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，玉屏风散饮片、颗粒高剂量组小鼠脾抗体生成细胞OD值均显著升高（P＜0.05），玉屏风散饮片、颗粒低剂量组小鼠脾抗体生成细胞OD值升高，但差异无统计学意义（P＞0.05）；玉屏风散饮片高剂量组和颗粒高剂量组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.4 对小鼠血清溶血素的影响

结果见表4。

表4 对各组小鼠血清溶血素的影响 （±s）

表4 对各组小鼠血清溶血素的影响 （±s）

注：与模型组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01

组别 n 剂量（g/kg）血清HC50正常对照组 12 - 212.43±22.452）模型组 12 - 129.34±18.32玉屏风散饮片组 245145.47±17.2510201.59±20.761）玉屏风散颗粒组 245150.45±17.6310210.14±19.651）

由表4可以看出，与正常对照组比较，模型组小鼠血清溶血素HC50显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，玉屏风散饮片、颗粒高剂量组小鼠血清溶血素HC50均显著升高（P＜0.05），玉屏风散饮片、颗粒低剂量组小鼠血清溶血素HC50升高，但差异无统计学意义（P＞0.05）；玉屏风散饮片高剂量组和颗粒高剂量组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨 论

机体的免疫系统是由各种具有免疫功能的细胞、产生免疫细胞的器官以及由这些细胞分泌的各种因子组成的一个复杂系统。脾脏是体内最大的外周免疫器官，胸腺是重要的中枢免疫器官，二者的功能与机体免疫功能关系密切。巨噬细胞是体内执行非特异性免疫作用的效应细胞，同时在特异性免疫应答的各个阶段也起重要作用［3］。巨噬细胞的吞噬实验，是检测机体非特异性免疫功能是否正常的一个重要方法，而巨噬细胞吞噬百分率是反映机体非特异性免疫功能的指标之一。主要参与体液免疫的B细胞功能缺陷或减低，可表现为细胞不能增殖，不能产生特异性抗体，抗体生成细胞数减少等，故抗体形成细胞和血清溶血素是代表机体体液免疫功能的可靠指标。

玉屏风散为中医扶正固表的经典方剂，实验研究提示该方对免疫系统有着较为广泛的影响，在临床上广泛应用［4］。为给中药配方颗粒替代中药饮片提供依据，本研究通过实验观察玉屏风散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂对免疫抑制模型小鼠的免疫功能影响。实验结果表明，模型组较正常对照组小鼠脾脏系数、胸腺系数、腹腔吞噬细胞吞噬功能、脾抗体生成细胞功能、血清溶血素显著降低，说明用环磷酰胺制备免疫功能低下模型成功。玉屏风散传统饮片高剂量和配方颗粒高剂量均能增强免疫抑制小鼠脾脏和胸腺功能，提高其腹腔吞噬细胞吞噬功能，加强机体非特异性免疫作用，提高其脾抗体生成细胞功能，升高血清溶血素，促进体液免疫。玉屏风散传统饮片高剂量和配方颗粒高剂量组间比较差异无统计学意义，说明两种汤剂等剂量间增强免疫功能作用基本相当，为玉屏风散配方颗粒在临床上替代传统饮片，进一步推广其应用提供一定的实验依据。

［1］陈奇，王建华.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1993：33.

［2］徐淑云.药理实验方法学［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2002：1436.

［3］任健，张倩落，郑莉.人工虫草多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响［J］.第四军医大学学报，2007，28（21）：1967-1969.

［4］张俐敏.风药用于治疗慢性肾炎的研究［J］.山西中医学院学报，2006，7（2）：24-26.