B7－1和B7－2协同刺激通道在复发性生殖器疱疹患者中的表达

赵晓岚 龚业清 李仰琪 李嘉彦

复发性生殖器疱疹(recurrent genital herpes，RGH)是生殖器部位皮肤粘膜感染单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)引起的性传播疾病。该病的易复发性与患者细胞免疫功能紊乱有关［1］，为阐明RGH患者免疫异常的机制，我们采用流式细胞数检测RGH患者外周血淋巴细胞CD80/86及CD4+/CD8+T淋巴细胞中B7－CD28/CTLA－4(CD152)的表达，探讨T淋巴细胞活化协同刺激通路在RGH发病机制中的作用。

材料与方法

1.临床资料

50例RGH患者均符合RGH的诊断标准，设为患者组。年龄22～66岁，平均(37.76±12.20)岁;所有患者均未接受免疫抑制剂治疗，且排除自身免疫性及其他感染性疾病。正常对照组20例为健康体检者，与患者组年龄，性别差异无统计学意义。

2.试剂及仪器

荧光标记单克隆抗体CD80－FITC、CD86－PE、CD4－FITC、CD8－FITC、CD28－PE、CD152－PE，同型对照鼠抗人IgG1－FITC、IgG1－PE双色标记抗体均购自美国eBioscience公司，流式细胞仪为美国BD公司出品。

3.方法

(1)标本：分别抽取50例RGH患者和20例健康体检者外周血2ml，15%EDTA抗凝，6h内送检。

(2)直接免疫荧光标记：取抗凝全血100μL，加人荧光抗体(CD4－FITC/CD28－PE;CD8－FITC/CD28－PE;CD4－FITC/CD152－PE;CD8－FITC/CD152－PE;CD8y0－FITC/CD86－PE)各20μL。每份血标本设同型对照，对照管中加人抗凝血100μL，加人荧光抗体IgG1－FITC、IgG1－PE20Ul.室温避光孵育30min，溶血，上机检测。

(3)流式细胞仪检测：经Fs/ss设定淋巴细胞群为A门，依次上机检测标本，每份标本测定10000个以上淋巴细胞。

4.统计学处理

统计学方法：本数据采用SPSS11.0统计软件包进行分析，患病组与对照组间比较采用SNK－q方差分析法进行检验。

结 果

1.外周血淋巴细胞CD80、CD86阳性表达

RGH患者组与对照组比较，CD80、CD86的阳性表达较对照组明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞CD28/CD152的阳性表达

对照组CD8+/CD28阳性表达显著高于患者组，差异有统计学意义(P＜0.05)，患者组的CD4+/CD152、CD8+/CD152的阳性表达显著高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 RGH患者外周血淋巴细胞CD80/86及CD4+/CD8+T淋巴细胞CD28/CD152的阳性表达(±s)%

表1 RGH患者外周血淋巴细胞CD80/86及CD4+/CD8+T淋巴细胞CD28/CD152的阳性表达(±s)%

分组 例数 CD80 CD86 CD4+/CD28 CD8+/CD28 CD4+/CD152 CD8+/CD152对照组 20 3.26±0.11 3.92±0.20 27.89±9.39 13.36±3.0 8 0.34±0.47 0.98±1.52患者组 50 1.01±0.22 1.98±0.83 28.02±5.66 9.78±4.70 7.31±0.77 4.95±1.29

讨 论

诱导T淋巴细胞活化、增殖、分化为效应细胞需要两种信号刺激(即双信号作用)。第一信号来自抗原与T细胞受体的结合，第二信号是由抗原呈递细胞(APC)上的协同刺激分子与T淋巴细胞表面的相应受体结合而产生，T淋巴细胞识别抗原后才能充分活化表现效应功能。APC表面最具代表的协同刺激分子为B7家族，B7家族基本成员：B7－1(CD80)、B7－2(CD86)结合到T淋巴细胞表面的CD28或CD152，产生协同刺激效应发挥相应的生物学功能［2］。当CD80、CD86与CD28结合，可有效地刺激T淋巴细胞活化、增殖和分泌许多细胞因子，尤其是白介素－2上调［3］。当CD80、CD86与CD152结合，可抑制T淋巴细胞增殖，提高抗原特异性凋亡，并抑制TH1、TH2细胞因子产生，起负调节作用［2，4］。

近几年有文献报道，在自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮，银屑病，变态反应性脊髓炎等)、肿瘤、炎症等疾病和器官移植排斥等方面的研究发现，B7－CD28/CTLA－4共刺激途径都起着重要作用，但却较少有文献报道这种共刺激途径在RGH的发病机制中的作用。本研究发现，RGH患者组与对照组比较，CD80、CD86的阳性表达较对照组明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。提示HSV的感染及相关治疗诱导活化淋巴细胞，刺激活化了淋巴细胞表面CD80和CD86，使CD80、CD86的阳性表达增加。研究中对照组CD8+/CD28阳性表达显著高于患者组，差异有统计学意义(P＜0.05)。表明CD80、CD86与CD28结合增多，有效地刺激T淋巴细胞活化、增殖和分泌效应的细胞因子，抗病毒能力逐渐增强。与国内吴健等检测30例RGH患者外周血CD8+/CD28阳性表达显著高于对照组的结果一致［4］。但本研究增加了CD8+/CD152的检测，两个共刺激分子对维持机体内环境的稳定，免疫调节等方面发挥了重要的作用。患者组的CD4+/CD152、CD8+/CD152的阳性表达显著高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。表明负性刺激分子CD152在患者组阳性表达比对照组增多，提示CD152与CD80、CD86有高度亲和力，并在体内抑制CD80、CD86依赖的免疫反应，抑制T淋巴细胞增殖，提高抗原特异性的凋亡，并抑制Thl和Th2细胞因子的产生，导致了疾病的复发［5，6］。国内毕超等检测了GH患者CD4+、CD8+的表达［7］，本研究增加了第二信号的检测，对RGH的发病机制有了更深入的探讨。

本文研究提示RGH患者存在明显细胞免疫功能失调及免疫抑制现象。因此，在治疗RGH患者时，除了抗病毒治疗外，还应增强机体免疫功能，特别是细胞免疫功能，如提高B7－CD28的表达或封闭B7－CTLA－4的相互作用增强T淋巴细胞反应，针对这些环节的调节深入探索可能为防治RGH提供新思路。

1 范妙玲，刘炼庆，李科伦.复发性生殖器疱疹细胞免疫与治疗的相关性研究［J］.国际医学卫生导报，2011，9(17)：1051－1052.

2 Alegre ML，Frauwirth KA，Thompson CB.T－cell regulation by CD28 and CTLA－4［J］.Nat Rev Immunol，2001，1(3)：220－228.

3 Harandi AM，Svennerholmb B，Holmgren I，et al.Interleukin－12(IL－12)and IL－18 are important in innate defense against genital herpes simplex virustype2 interferon－mediated Cunn protective immunity［J］.Jvirol，2007，75(14)：6705－6709.

4 吴健，贾国泉，吴瑞斌.复发性生殖器疱疹患者外周血T淋巴细胞和共刺激分子的检测［J］.中国皮肤性病学杂志，2010，24(12)：1113－1114.

5 李萍，邵路平.复发性生殖器疱疹患者血清细胞因子的表达及机体细胞免疫功能的研究［J］.内蒙古中医药，2010，(15)：106－107.

6 幸彩梅，李振华，吴意.生殖器疱疹患者HSVⅡ抗原CD8+细胞毒性T细胞检测［J］.中国热带医学.2009，9(6)：1032－1033.

7 毕超，曹文苓，黄平.生殖器疱疹初发患者外周血淋巴细胞检测结果分析［J］.中国微生态学杂志，2008，20(1)：69－70.