抗酸杆菌冷染色法的临床应用分析与研究

赵斌 贾继芳

抗酸杆菌冷染色法的临床应用分析与研究

赵斌 贾继芳

目的 探讨抗酸杆菌冷染色法对结核病临床诊断的应用价值。方法 用直接涂片热染法和冷染法对2008年1月～2011年12月送检的肺结核病患者或可疑患者的痰标本、支气管刷片、尿液、胸腔积液、腹腔积液、关节腔积液、脑脊液等1680份标本做同步检测。结果 1680份送检标本中热染法和冷染法的阳性率分别为9.46%（159/1680）和9.28%（156/1680）。热染法的失败率为0.48%（8/1680），冷染法为0%。结论 直接涂片冷染法直观、简便、价廉，是诊断临床结核病的重要手段。

结核病；抗酸杆菌；冷染色法；临床；诊断

我国作为世界上结核病疫情最严重的国家之一，快速准确地诊断是控制结核病的重要手段。临床结核分枝杆菌检查方法主要有；细菌培养、抗体检测、聚合酶连反应、抗酸染色等多种。在结核病的防治工作中，细菌学检查占有重要的地位，目前标本直接涂片找抗酸杆菌是发现传染源的主要手段，此方法操作简便、快速、高效而被广泛应用于临床，我们就本院1680份标本分别用石炭酸复红热染法与冷染法进行比较分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 资料来源于本院2008年1月～2011年12月送检的肺结核病患者或可疑患者的痰标本、支气管刷片、尿液、胸腔积液、腹腔积液、关节腔积液、脑脊液等，共计1680份。

1.2 实验方法 加热染色法试剂完全按照《全国临床检验操作规程》配制。冷染色法试剂选用《临床微生物学检验》金永染色法试剂配方并加以改进。

染色液：石炭酸复红工作液新法配制：⑴配制5%石碳酸水溶液：40～50℃水浴加热石碳酸使其溶化，取液态石碳酸4.5mL溶于80mL预加热的蒸馏水中，再加蒸馏水至90mL。⑵向上述石炭酸溶液中加入无水乙醇10mL，在将其溶液加热至50℃左右。⑶向上述预加热的石碳酸乙醇溶液中加8g碱性复红，充分振荡使其完全溶解。

脱色复染合剂：美蓝5g，加入95%乙醇160mL，溶解后加入蒸馏水250mL，混匀，边摇边加入硫酸9mL，加入硫酸不宜太快，以确保安全。

1.3 仪器 奥林巴斯显微镜（OLYMPUS CX-41）。

1.4 标本处理

1.4.1 痰标本从送检盒中用棉签挑取干酪样，脓样等可疑部分痰标本进行涂片。支气管刷片标本直接涂片。其他标本经离心（3000r）取管底沉淀直接涂片。

1.4.2 以上标本涂片自然风干，滴加1%稀盐酸或5%冰醋酸溶液固定。

1.5 方法 直接涂片加热染色法：涂片自然干燥后固定，染色方法完全参照全国临床检验操作规程》。

直接涂片冷染色法：涂片自然干燥后滴加1%稀盐酸或5%冰醋酸溶液固定，之后加石碳酸复红冷染15min水洗，依据室温适当可延长冷染时间，脱色和碱性美蓝复染合为一步染5min，干后镜检。

1.6 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件进行数据处理，计数资料采用χ2检验分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

1680 份标本中加热染色法阴性1521份，阳性159份，阳性率9.46%，失败8份，失败率0.48%；冷染色法阴性1524份，阳性156份，阳性率9.28%，失败0份，失败率0%；两种方法的阳性率在统计学上无显著性差异（P＞0.05）。阴性率则有显著性差异。直接涂片热染法的操作步骤比直接涂片冷染法复杂，而且有假阳性，还有因操作失误而导致玻片断裂，实验失败。

3 讨论

结核病是人体感染结核杆菌而发生的一种非常常见的传染病，也是传染病中的头号杀手，病死率为各种传染病之首，是全球关注的重大公共卫生问题之一，也是我国规定的乙类法定报告传染病。随着人们生活水平的提高、医疗技术的发展、采取群防群治、卡介苗的接种、使结核病的发病率和病死率大为降低。但近年来，结核病似乎死灰复燃，发病率有所回升。在临床作为确诊结核病诊断的方法之一就是标本直接涂片染色镜检找抗酸杆菌，这也是确诊肺结核最简单最有效的手段之一，同时也是诊断肺结核的重要指标[2]。直接涂片我们依然采用的是传统的热染色法，所说的热染色法就是石碳酸复红加热法，直接涂片自然干燥后，加染液石碳酸复红铺满整个玻片，在酒精灯上加热5min，边加热边继续滴加染液，防止染液干燥，之后用盐酸酒精脱色，碱性美蓝复染，干燥后在显微镜下找抗酸杆菌[3]。采用此方法中，加热的石碳酸复红能够加快抗酸杆菌的着色能力，有利于镜下观察，但加热过程中染液外溢，产生大量的气溶胶，污染环境，不利于工作人员的健康。在加热过程中时间不好把握，容易造成染液干燥，甚至玻片断裂，需用的染液量相对比较大，染液干燥容易使染液碴子残留在玻片上而影响镜检，也导致了假阳性率有所增加。而采用的冷染法，石碳酸复红的配制采用了新的配制方法，试剂配制时预加热可促使碱性复红更充分的溶解，减少染料渣残留于玻片上，加大碱性复红的浓度，能使抗酸杆菌在不加热的条件下更好更快地着色，改变了固定方法，取消了石碳酸复红加热的步骤，用延长初染时间使抗酸杆菌更好的着色，依环境温度的高低适当延长初染时间[4]，染液用量相对于加热法有所减少，降低了试验成本，将盐酸酒精脱色和碱性美蓝复染两步合作一步，使脱色能更彻底，背景比较干净，提高镜检率。

本研究通过比较这两种方法，结果两种方法的阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。由于冷染法将三步染色法简化为两步法，免去了加热的步骤减少了环境污染，节约成本，操作方法相对简便，节省了工作人员的时间，提高工作效率，染色后背景干净、提高镜检率，值得推广。

[1] 彭志文.聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的临床应用价值[J].检验医学与临床,2010,7(14):1490-1491.

[2] 徐秀琴，张惠琴，徐秀霞，肺结核患者痰标本质量对抗酸杆菌的影响及护理对策[J].临床肺科杂志，2010,15(2)：300.

[3] 中华人民共和国医政司.全国临床检验操作规程[M].3版.南京：东南大学出版社，2006：726-727.

[4] 王仙、吴翠、袁例.温度对结核杆菌抗酸染色检出率的影响[J].中华现代内科学杂志，2006,3(3):269-270.

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.25.076

744000 甘肃省平凉市第二人民医院（赵斌 贾继芳）