紫外分光光度法测定五种果蔬中维生素C的含量

马宏飞，卢生有，韩秋菊，李 薇

(辽宁石油化工大学环境与生物工程学院，辽宁 抚顺 113001)

维生素C又称抗坏血酸，是一种水溶性维生素。能预防牙龈出血及萎缩、提高人体免疫力，对坏血病、动脉硬化、贫血等有一定疗效[1]。

维生素C的测定方法主要有紫外分光光度法、红外光谱法、2,6-二氯靛酚滴定法、高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸收法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛细管电泳法、流动注射化学发光法[2～12]等。其中原子吸收法、高效液相色谱法和荧光光度法仪器相对昂贵；碘量法和电位滴定法操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响；紫外分光光度法是根据维生素C对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243.4 nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度之差，通过标准曲线方程，即可计算样品中维生素C的含量。

作者在此采用紫外分光光度法测定5种常见果蔬中维生素C的含量，结果令人满意。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

青椒、橙子、黄瓜、苹果、西红柿，市售。

抗坏血酸、HCl、NaOH均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

UV1102型紫外可见分光光度计，上海天美科学仪器有限公司；TB-214型电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司。

1.2 方法

1.2.1 标准溶液的配制

准确称取0.050 g抗坏血酸，加10 mL 10%HCl溶解，用蒸馏水定容至500 mL，混匀，即得100 μg·mL-1维生素C标准溶液。

1.2.2 吸收曲线的绘制

移取10 mL维生素C标准溶液于50 mL比色管中，稀释至刻度，混匀。用1 cm石英比色皿，以蒸馏水为参比，在200～300 nm波长范围内用紫外可见分光光度计自动扫描。绘制吸光度与波长关系曲线，以最大吸收波长作为测定波长。

1.2.3 标准曲线的绘制

分别准确移取100 μg·mL-1维生素C标准溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于50 mL容量瓶中，定容至刻度。以水为参比，在最大吸收波长处测定吸光度，以维生素C浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2.4 果蔬样品的处理

将青椒、西红柿、黄瓜洗净晾干，橙子和苹果取肉，分别称取10.00 g于研钵中，各加入1% HCl 10 mL，匀浆，转移到50 mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀。移至离心管中离心10 min，取上清液即为待测果蔬提取液。

1.2.5 果蔬样品吸光度的测定

1.2.5.1 待测果蔬提取液

取1.0 mL待测果蔬提取液，放入盛有2 mL 10% HCl的50 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为空白，在最大吸收波长处测定其吸光度。

1.2.5.2 碱处理果蔬提取液

依次吸取1.0 mL待测果蔬提取液、10 mL蒸馏水和4 mL 1 mol·L-1NaOH溶液放入50 mL容量瓶中，摇匀；静置20 min后加入4 mL 10% HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白，在最大吸收波长处测定其吸光度。

1.2.5.3 吸光度确定

待测果蔬提取液与碱处理果蔬提取液的吸光度之差即为果蔬样品吸光度。

1.2.6 维生素C含量的计算

测得果蔬样品的吸光度后，依据标准曲线方程，即可计算出果蔬中维生素C的含量[mg·(100g)-1]。

式中：c为依标准曲线方程计算得到的维生素C浓度，μg·mL-1；V1为测吸光度时吸取样品溶液的体积，mL；V总为吸取样品定容总体积，mL；V待测总为待测样品总体积，mL；W总为果蔬质量，g；100为100 g果蔬。

2 结果与讨论

2.1 吸收曲线(图1)

图1 维生素C溶液的吸收曲线

由图1可知，在波长200～300 nm范围内，维生素C有一最大吸收峰，最大吸收波长为243.4 nm。故本实验选择243.4 nm作为测定波长。

2.2 标准曲线(图2)

图2 维生素C溶液的标准曲线

由图2可知，在1.0～12.0 μg·mL-1浓度范围内，维生素C浓度与吸光度符合朗伯-比尔定律，呈良好的线性关系。所得线性回归方程为A=0.0528c-0.0568，相关系数R2=0.9996。

2.3 静置时间的选择

由于维生素C在碱性介质中不稳定、易分解，从而影响吸光度的测定。实验发现，果蔬提取液加碱后的静置时间与提取量有关。以青椒为例(最大取样量1.0 mL)，加入碱液后，考察室温下静置时间与吸光度之间的关系，结果见图3。

图3 碱处理青椒提取液静置时间与吸光度关系

由图3可知，在室温静置15～40 min，吸光度最小且稳定。故选择静置时间为20 min。

2.4 维生素C的含量测定(图4)

图4 果蔬中维生素C的含量

由图4可知，果蔬中维生素C的含量[mg·(100 g)-1]分别为：青椒117.1、橙子69.3、黄瓜20.5、苹果14.9、西红柿18.4。5种果蔬中维生素C的含量大小依次为青椒>橙子>黄瓜>西红柿>苹果。

3 结论

利用维生素C在紫外光区有明显的吸收和对碱不稳定的特性，建立了果蔬中维生素C含量的测定方法。在1.0～12.0 μg·mL-1浓度范围内，维生素C浓度与紫外吸光度呈良好的线性关系，回归方程为：A=0.0528c-0.0568，相关系数R2=0.9996。5种常见果蔬中维生素C的含量[mg·(100 g)-1]分别为：青椒117.1、橙子69.3、黄瓜20.5、苹果14.9、西红柿18.4。该方法简单易行、灵敏度高、结果准确，可快速测定果蔬中维生素C的含量，结果令人满意。

参考文献：

[1] 曾翔云.维生素C的十大功效[J].健康指南：中老年，2012,(2)：34-35.

[2] 陈玉锋，庄志萍.紫外分光光度法测定橙汁中维生素C的含量[J].安徽农业科学，2011，39(1)：236-237，240.

[3] 金鸣，王勇.近红外光谱法快速检测维C银翘片中维生素C的含量[J].海峡药学，2011，23(12)：67-69.

[4] 黄连玉，陈崇莉，罗宝芳,等.桂西地区7种常见水果维生素C含量的测定[J].右江民族医学院学报，2012，34(1)：14-15.

[5] 桂玲，巴根那.HPLC法测定蒙药野凤仙花中维生素C的含量[J].中国民族医药杂志，2011，17(8)：60-61.

[6] 刘绍俊，牛英，刘冰浩，等.钼蓝比色法测定沙田柚果肉中还原型维生素C含量的研究[J].北方园艺，2011,(1)：8-12.

[7] 莫超群，张六龄，蒋召涛，等.间接原子吸收法测定饮料蔬果中维生素C[J].化学研究与应用，2011，23(8)：1099-1102.

[8] 郭婕，刘中华，赵锦慧.碘量法测定茶叶与红枣中维生素C的含量[J].生物学教学，2011，36(2):53-54.

[9] 谢志方.氢氧化钠两点电位滴定法测定维生素C含量[J].广州化工，2011,39(15)：125-127.

[10] 李志英，薛志伟，张海容.用荧光光度法测定饮料中的Vc含量[J].商丘师范学院学报，2007，23(9)：60-62.

[11] 肖竦.毛细管电泳测定柿子中维生素C的含量[J].广州化学，2011，36(2)：36-40.

[12] 王建国，汪敬武，易绣光.流动注射化学发光法测定饮料中维生素C的含量[J].江西农业学报，2009，21(5)：99-100.