血必净注射液预防大鼠术后肠黏连的实验研究

邢 军， 程 静， 马玉燕， 司民一

(莱芜市人民医院，山东莱芜271100)

严重术后肠黏连可引起慢性腹痛、肠道功能运动障碍或反复间断发作性的机械性肠梗阻，女性可引起不孕症。有研究表明一些活血益气的中药对其有一定的预防治疗作用［1］，血必净注射液主要成分提取自红花、赤芍、丹参、当归之中，包括红花黄色素A、川芎嗪、丹参素、阿魏酸钠、芍药苷、原儿茶酚等，现临床上主要用于因感染诱发的全身炎症反应综合症和因感染、创伤、烧伤等引起的多器官功能障碍综合征［2-3］。本实验研究血必净预防术后肠黏连的作用，并通过测定实验动物腹腔灌洗液IL-6、TNF-α水平和其盲肠组织中羟脯氨酸含有量探讨其预防肠黏连的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 Mettler AE240电子分析天平 (瑞士梅特勒公司);UV-2401PC型紫外-可见分光光度仪 (日本岛津公司);RM2135型组织切片机 (德国leica公司)。血必净注射液 (天津红日制药有限公司，批号09101501);羟脯氨酸试剂盒 (南京建成生物工程研究所);IL-6和TNF-α试剂盒 (美国Sigma公司)。SD大鼠50只，雌雄兼半，体质量 (220±20)g，由山东大学动物实验中心提供。

1.2 方法 参照文献［4］，取SD大鼠50只，用3%戊巴比妥钠 (30 mg/kg)经耳静脉注射麻醉，用安尔碘进行皮肤消毒，用手术刀剖开下腹部正中约2 cm，提出盲肠干燥2 min，再用手术刀片轻刮整条盲肠浆膜面及对应的腹壁双侧各8遍，放回盲肠，关闭腹腔。建立大鼠肠黏连模型。

将以上模型大鼠随机均分为5组，即模型组、地塞米松组及血必净高、中、低剂量组。术后分别尾静脉注射氯化钠注射液 (1 mL/kg)、地塞米松注射液 (5 mg/kg)、血必净高剂量 (5 mg/kg)、血必净中剂量 (2.5 mg/kg)、血必净低剂量 (1.25 mg/kg)，连续给药7 d。于术后第7天测定腹腔灌洗液IL-6和TNF-α水平。第8天开腹检查，评定黏连程度，取盲肠组织测羟脯氨酸含有量。

1.3 统计学处理 各实验组黏连结果分别和模型组比较进行Ridit分析;IL-6、TNF-α水平和羟脯氨酸含有量以±s表示，各实验组数据和模型组比较进行t检验。

2 指标与结果

2.1 黏连分级标准 参考Nair［5］分级标准，将黏连程度分为5级，分级标准见表1。

表1 黏连分级标准

结果显示血必净注射液高剂量 (P＜0.01)、中剂量(P＜0.05)、低剂量 (P＜0.05)黏连程度均低于模型组，说明高、中、低剂量血必净注射液均可预防大鼠术后肠黏连。见表2。

表2 大鼠腹腔黏连分级情况

2.2 腹腔灌洗液IL-6和TNF-α水平检测和盲肠组织羟脯氨酸测定 按 Nagelschmidt等［6］报道，将3 mL PBS(磷酸盐缓冲液，0.15 mol/L)注入大鼠腹腔，轻微震荡腹腔2min后用注射器自腹腔将灌洗液抽出，采用夹心ELISA检测方法测定IL-6和TNF-α水平。

精密称取50mg盲肠组织，放入试管中，按试剂盒说明书处理后在550 nm波长处测定各管吸光度，计算组织中羟脯氨酸含有量。

结果与模型组相比，血必净高、中剂量组腹腔灌洗液TNF-α、IL-6水平和血必净高、中、低剂量组盲肠组织羟脯氨酸含有量明显降低 (P＜0.05)，见表3。

表3 大鼠腹腔灌洗液TNF-α、IL-6水平和盲肠组织羟脯氨酸含有量(±s，n=10)

表3 大鼠腹腔灌洗液TNF-α、IL-6水平和盲肠组织羟脯氨酸含有量(±s，n=10)

注:与模型对照组比较，#P＜0.05。

组别 动物数/只 羟脯氨酸/(mg·g－1) IL-6/(ng·mL－1) TNF-α/(pg·L－1)10 2.61±0.20 4.24±0.64 138.67±13.52地塞米松组(5 mg/kg) 10 1.88±0.16# 2.81±0.52# 105.46±13.55#血必净高剂量组(5 mg/kg) 10 1.71±0.12# 2.74±0.81# 102.55±10.18#血必净中剂量组(2.5 mg/kg) 10 1.97±0.14# 3.31±0.82# 124.75±13.67#血必净低剂量组(1.25 mg/kg) 10 2.25±0.17#模型组(生理盐水1 mL/kg)4.17±0.95 132.52±12.34

3 讨论

术后肠黏连的发生机制目前还不十分明确，现在认为主要是由于浆膜在手术时受到损伤或异物刺激，引起机体局部缺血或炎症反应，导致腹膜、肠管、网膜等损伤部位组织液渗出。渗出的组织液中纤维蛋白和纤维蛋白原沉积，便会形成黏连。在这个过程中由浸润的炎性细胞释放细胞因子的失衡极其瀑布式效应，是导致腹膜黏连形成的触发机制［7］。研究发现，术后早期羟脯氨酸含有量能反应黏连程度［8］;腹腔液和全身TNF-α的水平高与术后黏连程度显著相关，IL-6可促进黏连形成，在刺激术后肠黏连的形成中有较大作用［9］;杨小进等通过实验发现创伤黏连型大鼠1周内有明显的炎症反应，模型大鼠血清中TNF-α表达水平有明显提高［10］;陈弹等发现TNF-α对内皮细胞株分泌的纤溶酶原激活抑制因子有显著升高作用，说明降低TNF-α的表达水平可提高纤溶系统的活性［11］。

肠黏连的预防可通过改善局部血运、抑制炎性渗出、促进纤维蛋白的溶解与吸收、抑制成纤维细胞生长及促进胃肠蠕动等诸多环节而实现。血必净注射液是在血府逐瘀汤基础上研制而成的静脉制剂，其药理作用主要为:调节炎症反应、抗氧化应激、改善凝血功能、调节免疫功能、内皮细胞保护及改善循环等。作用机理与影响细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α水平，提高超氧化物歧化酶活性和降低丙二醛含有量，改善凝血反应和纤溶抑制的形成等有关［12］。本实验中血必净注射液对术后肠黏连大鼠腹腔灌洗液TNF-α和IL-6水平的影响与文献中对血清TNF-α和IL-6水平影响一致。本实验结果提示血必净注射液对术后黏肠连的预防作用可能与降低术后大鼠腹腔组织中TNF-α和IL-6水平有关。

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