蜈蚣草孢子萌发的最适培养基研究

李江浩 王玢琪

摘要：通过在不同培养基上进行培养，观察统计了蜈蚣草孢子的萌发情况，包括萌发率、萌发时间，寻找出了蜈蚣草孢子组织培养的最佳孢子萌发培养基。

关键词：蜈蚣草；培养基；孢子萌发

蜈蚣草是凤尾蕨科凤尾蕨属的多年生草本植物，别名蜈蚣蕨、长叶甘草蕨、舒筋草、牛肋巴；蜈蚣草植株高30～200cm，根状茎短，密被线状披针形黄棕色鳞片；叶簇生，叶柄长10～30cm，直立，叶柄、叶轴及羽轴均被线形鳞片；叶矩圆形至披针形，长10～100cm，宽5～30cm，羽状复叶；叶片无柄，线形，长4～20cm，宽0. 5～1cm，中部羽叶最长，先端渐尖， 先端边缘有锐锯齿，基部截形，心形，稍呈耳状, 下部各羽叶渐缩短，叶亚革质， 两面无毛，脉单一或一次叉分，孢子囊群线形，囊群盖狭线形，膜质，黄褐色；生于山坡、路边的钙质土或石灰岩壁缝中，蜈蚣草株型分散，不直立，喜温暖、湿润、阴暗的环境，忌涝，要求荫蔽、空气湿润、土壤透水良好。

蜈蚣草的繁殖一般有成熟孢子繁殖、分株法繁殖和组织培养繁殖3种方法。由于前2种技术繁殖效率不高，所以现在的研究多集中在利用组织培养的方法，通过孢子萌发来获得大量组培苗。

1实验材料及方法

1.1实验材料

蜈蚣草成熟的孢子（采自湖北宜昌）。

1.2 培养基配方

（1）MS培养基，（2）将原来MS 培养基中pH值调为7.0，另外在培养基中加入CaCO3粉末。

1.3 操作步骤

1.3.1培养基的配置。按照培养基配方分别配置MS和MS（改）培养基，将各种液体试剂按照用量规格加入1000ml大烧杯中，轻轻摇匀后，用pH试纸进行溶液酸碱度测定，在烧杯中加入盐酸或氢氧化钠将pH调到培养基所要求的范围之内；之后称取相应分量的琼脂加入烧杯中，在加入适量蒸馏水，放置于微波炉中加热知道琼脂全部溶解，溶液为透明的为止。

1.3.2分装培养基。将煮好的培养基冷却至50℃左右时分装到各个培养盒中，每盒大约装盒子的2/5，然后等待培养基冷却凝固。

1.3.3播孢。待培养基凝固后，将蜈蚣草孢子均匀地撒在培养基表面，盖上盖子，保持空气的流通。

1.3.4培养。将撒上孢子的培养基放置于25℃的恒温箱中，日光灯作为光源，光照强度为2000～3000Lx，光照时间16h/d。

1.3.5 观察记录。培养期间每天到实验室进行观察，记录孢子萌发的时间，萌发情况，原叶体形成时间及形成情况等。

1.3.6数据分析。将观察到的试验结果，数据进行分析整理，找出最适合蜈蚣草孢子萌发的培养基。

2 结果与分析

从播孢后的第2天开始记录，我们发现培养基中的萌发情况大概为：

13d 后各培养基先后出现绿色小点，孢子开始萌发，17d 后出现绒毛状丝状体，23d 后孢子发育成绿色，逐渐形成叶片状原叶体且体积不断增大，40d 后绿色块状周边形成绿色紧密球，球状体在培养基上迅速增殖并在较短时间内形成疏松的群体块；随着小球状体的继续增殖而不断变大，60d 后逐渐形成芽，并开始分化出小叶片，即孢子体。

通过实验观察可以得到以下2组图表(图1、2)。

考虑到蜈蚣草的生长环境是偏碱性的，所以此次研究不仅继续利用传统MS培养基进行培养对照，还对MS培养基进行改动，主要是提高培养基的pH值，以接近蜈蚣草真实的生活环境。在培养基中加入CaCO3粉末，也是增强碱性环境。实验结果表明，改良的MS培养基更适合蜈蚣草孢子萌发，有利于蜈蚣草的快繁研究。

3研究展望

据国际上的报道，在正常土壤中普通植物的含砷量一般不超过3mg/kg，我国谷类作物的含砷背景值为0.07～0.08mg/kg，豆类为0.02～0.56mg/kg，蔬菜类为0.001～0.039mg/kg，木本植物小于0.78kg/mg。蜈蚣草的最大含砷量约相当于普通植物体中大量元素磷的含量, 比普通植物的含砷量高数万倍、甚至数十万倍。

参考文献

1周向军.砷超富集植物蜈蚣草的离体培养及植株再生[J].资源开发与市场,2010（8）

2韩德伟，关丽霞，王振龙.铁线蕨孢子组织培养与快速繁殖研究[J]. 安徽农业科学,2010 （29）

（责任编辑王蔓）