薄层色谱扫描法测定板连冲剂中靛玉红与靛蓝的含量

史长生 许 立*

（1 武警河北总队医院医务处，河北 石家庄 050081；2 武警河北总队医院药剂科，河北 石家庄 050081）

板蓝根、连翘为临床常用中药，均具有清热解毒之功效，临产上常用于治疗病毒引起的流感、上感、风热等症。入秋以来，甲型H1N1流感疫情明显增多，市场上的抗病毒中药日趋紧张，为加强部队应对甲型H1N1流感及季节性流感的卫勤保障能力，我院组织有关专家及技术人员研发了板连冲剂复方中药制剂保障部队使用。板蓝根的有效成分：靛蓝、靛玉红、喹唑酮酸、棕榈酸、苯甲酸、水杨酸、22氨基苯甲酸、丁香酸、脯氨酸、精氨酸、腺苷、尿苷、尿嘌呤、鸟嘌呤和次黄嘌呤[1-3]。《中国药典》中并未明确对板蓝根质量控制中的含量测定方法和指标，而本试验采用了TLC法对复方板蓝根颗粒进行定性鉴别，以便更好地控制药品的内在质量，保证临床用药的有效性。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品、试剂与仪器：靛玉红标准品（中国药品生物制品检定所，批号110717200204）；靛蓝标准品（中国药品生物制品检定所，批号110716200610）；板连冲剂（武警河北总队医院制剂室研发，规格10g/袋）；硅胶HPTLC板（青岛海洋化工有限公司）；石油醚、乙酸乙酯、氯仿均为色谱纯。CS-930型薄层扫描仪（日本岛津）；DHG-9243BS型电热恒温鼓风干燥箱；AR64CN型电子天平（奥豪斯仪器(上海)有限公司）；微量进样器（山东滕海分析仪器有限公司）。

1.1.2 色谱条件：薄层层析板：硅胶HPTLC板；展开剂：石油醚-乙酸乙酯-氯仿（1∶1∶8）。

1.2 方法

1.2.1 硅胶HPTLC板于105℃活化1h，冷却后置干燥器中备用。

1.2.2 标准溶液的制备

靛玉红标准溶液的制备：精密称取靛玉红标准品10mg，置于100mL容量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀。配成每毫升含0.1mg靛玉红的标准溶液。避光保存。

靛蓝标准溶液的制备：精密称取靛蓝标准品50mg，置于250mL容量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀。配成每毫升含0.2mg靛蓝的标准溶液。避光保存。

1.2.3 供试品溶液的制备

将板连冲剂研磨，过筛，烘干。精密称取5g，用氯仿100mL索式回流提取，过滤，滤液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10mL。

1.2.4 标准曲线的绘制

精密吸取上述靛玉红、靛蓝对照品溶液1μL、2μL、3μL、4μL、5μL，分别点于同一硅胶HPTLC板上，依法展开[4]，并进行全程扫描测定各斑点的面积。以斑点面积积分值为纵坐标Y，以点样量为横坐标X，绘制标准曲线。

1.2.5 稳定性实验

精密吸取对照品溶液5μL点于硅胶HPTLC板上，依上述条件层析展开，显色，每间隔0.5h测定一次峰面积积分值，计算RSD。

1.2.6 精密性实验

精密吸取对照品溶液3μL在同一块薄层板上点样6次，依法展开，计算各斑点的峰面积积分值RSD。

1.2.7 样品含量测定

分别精密吸取不同供试品溶液2μL，对照品溶液1μL和3μL，交叉点于同一硅胶HPTLC板上，按上述条件展开，显色，扫描测定各样品中靛玉红、靛蓝的含量，以外标二点法计算含量。

1.2.8 加样回收实验

取5份已知含量（0.496mg/g）的供试品粉末2g，精密加入靛玉红及靛蓝对照品，按供试品溶液制备，测定回收率。

1.2.9 统计学处理

2 结 果

2.1 标准曲线

2.1.1 以靛玉红对照品浓度c对峰面积A进行线性回归分析，得一不过原点的线，因此使用外标两点法进行含量测定。靛玉红在点样量0.1～0.5μg范围内呈良好的线性关系，得回归方程为：Y=9991X+1017.9，r =0.9999，见图1。

图1 靛玉红对照品标准曲线图

2.1.2 同2.1.1方法得靛蓝标准曲线，回归方程为：Y=19955X+2080.5，r =0.9998，见图2。

2.2 稳定性及精密性实验

稳定性实验结果的RSD为1.18%（n=5），精密性实验结果的RSD为2.18%。

图2 靛蓝对照品标准曲线图

加样回收率试验结果测定板连冲剂中靛玉红与靛蓝含量的RSD分别为2.74%、3.54%和4.53%、2.96%，见表1。

表1 回收率测定结果表

2.3 板连冲剂中靛玉红与靛蓝的含量，见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨 论

近些年来季节性流感的感染情况愈发严重，年初以来据卫生部公布的数据已经有10万多人次感染甲型H1N1流感，死亡300多例。随着国内外对板蓝根抗病毒作用的进一步研究，传统中药板蓝根在预防与治疗病毒性流感方面的作用更加显著，从而导致了这一类药物在市场上的紧俏[5-6]。目前关于板蓝根的质量控制标准尚无确切定论，本实验参考了近些年来的研究，通过检测板连冲剂中的靛玉红以及靛蓝的含量来对制剂进行治疗控制，通过查阅相关文献资料本实验结果显示板连冲剂中的板蓝根有效成分含量较高[6,7]，因此下一步将按照申请新药的标准继续完善制剂的质量，以期尽早形成量产。

[1]王瑞,杨海英,杨琪伟,等.板蓝根的质量标准研究[J].中草药,2010,3(3):478-480.

[2]崔卓,王颖,康廷国.板蓝根有效成分质量研究[J].辽宁中医杂志,2004,8(8):692-693.

[3]马方,陈秀英.薄层层析法检测板蓝根所含靛玉红、靛蓝的方法研究[J].河南中医学院学报,2008,23(135):39-41.

[4]国家药典委员会.中国药典·一部[M].北京:化学工业出版社,2005:附录Ⅵ B.

[5]陈庆.板蓝根药理作用与临床应用[J].中国药事,2009,23(6):607-608.

[6]丁越,张彤,陶建生.板蓝根药材中有效成分的含量测定研究[J].中成药,2008,30(11):1697-1701.

[7]马莉,孙琴,李友,等.HPLC法测定板蓝根药材及制剂中靛蓝和靛玉红含量[J].药物分析杂志,2010,30(9):1642-1645.