巨噬细胞与乙型肝炎相关性肝病肝移植后乙型肝炎复发的联系

黄元亮

巨噬细胞属于人体一种重要的免疫细胞，同时作为一种多功能细胞，是人体内的“清道夫”，能够去除体内坏死的细胞等物质，具有抗感染、抗肿瘤、免疫应答以及免疫调节等生物学效应［1］。我国乙肝患者数量巨大，因次由乙肝所引起严重肝硬化、肝癌等疾病患者较多。现代临床公认，肝移植作为唯一有效的治疗手段对治疗终末期肝病有明显的效果。但乙肝终末期患者肝病肝移植手术后，在未做任何预防性措施下乙型肝炎的复发率可达到80%［2］。我院通过对近年来肝移植后乙型肝炎复发患者的研究，分析噬细胞与乙型肝炎相关性肝病肝移植后乙型肝炎复发的联系，取得了预期效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2010年1月至2012年1月在我院接受治疗的巨噬细胞与乙型肝炎相关性肝病肝移植术后乙肝复发患者14例作为观察组，其中男8例，女6例，年龄为34～67岁，平均50.2岁;另将同一时期肝移植后未出现乙肝复发的患者11例作为对照组，男性患者6例，女性患者5例，年龄为31～64岁，平均年龄为48.7岁。两组患者均符合参照全国传染病与寄生虫学术会议制订的诊断标准，且排除其他肝炎疾病(甲、丙、丁、戊型肝炎病毒混合以及重叠感染)［3］。患者均知情且签署知情同意书。两组患者在年龄、体重、病程等一般情况方面无明显差异，具有可比性(P＞0.05)。

1.2 方法 ①无菌操作抽取两组患者外周静脉血，进行巨噬细胞的分离以及培养，采用Ficoll密度梯度离心法将两组患者静脉血标本进行分离，取外周血中单个核淋巴细胞，用预温的完全培养基(10%小牛血清如RPMI1640培养基)进行诱导培养，每隔2 d半量换液，连续培养7 d，获得贴壁细胞。②运用流式细胞仪机进行检测，记录贴壁细胞表面CD14的表达水平。③HBV-cccDNA的实验室检测严格按照检测试剂盒内说明书进行操作，采用荧光定量PCR法，测定并记录培养所得到的巨噬细胞乙肝病毒HBV-cccDNA的载量。

1.3 结果评定 ①采用流式细胞技术，实验室检测细胞表面特征性标志抗体CD14，以比较两组贴壁细胞的分子表达情况。②采用荧光定量PCR法，检测并记录培养所得的巨噬细HBV-cccDNA。

1.4 统计学方法 数据均采用SPSS 16.0统计软件分析，计量资料以均数±标准差()表示，采用t检验;计数资料采用c2检验，以P＜0.05表示有统计学有显著性差异。

2 结果与分析

2.1 经过实验分析比较，观察组和对照组巨噬细胞表面CD14分子的表达情况如表1所示。观察组患者的巨噬细胞表面CD14分子表达率为56.17±(6.72)%，差于对照组患者的分子表达率62.20±(6.11)%，且两组相比较具有显著性差异(P＜0.05)。

表1 观察组和对照组巨噬细胞表面CD14分子表达率(%)

表1 观察组和对照组巨噬细胞表面CD14分子表达率(%)

注:与对照组相比较，▲P＜0.05

CD14观察组 14 56.17±(6.72)%组别 例数▲对照组 11 62.20±(6.11)%

2.2 经过实验分析比较，观察组和对照组标本HBV-cccDNA阳性率情况如表2所示。观察组14例患者中，阳性例数为9例，阳性比率为64.29%;对照组11例患者中，阳性例数仅为1例，阳性比率为9.09%，且两组相比较具有显著性差异(P＜0.05)。

表2 观察组和对照组标本HBV-cccDNA阳性率比较(例%)

3 讨论

乙型病毒性肝炎(HBV)是由乙型肝炎病毒引发的疾病，能够引起肝脏的病变，HBV起病比较缓，以亚临床型及慢性型较常见［4］。乙肝具有传染性，主要传播途径是通血液、母婴以及性接触。目前预防以及控制HBV的根本措施是乙肝疫苗。HBV在整个世界范围之内呈现广泛流行的趋势，目前HBV主要在我国以及其他部分亚洲国家中广泛流行。我国是HBV大国，我国人口中大约1/10为乙肝病毒的携带者，是世界上乙肝病毒携带者最多的国家，而且大多数没有症状，仅有1/3的病毒携带者出现肝脏损害［5］。慢性HBV患者约1/3～1/2的患者最终可能发展为严重肝硬化、肝癌等终末期肝脏疾病，需行肝移植手术，所以我国的肝移植潜在需求量非常大。乙肝病毒具有非常强烈的嗜肝特性，能够损伤肝脏细胞，破坏肝细胞的正常功能［6］。近年来随着医学技术及核酸分子杂交术的发展进步，研究表明乙肝病毒也能够感染肝脏外组织或者细胞，并且在其中进行复制。国外专家学者报道证明，乙肝病毒能够感染外周血单个核淋巴细胞系统，破坏人体的免疫细胞，对人体的免疫系统造成影响。

目前研究认为，清除了病毒细胞核内的cccDNA，才能够彻底清除乙肝病毒患者的携带状态。在肝移植术后，患者移植肝再次被乙肝病毒感染，其病毒一定来源于患者体内。过去医学界认为，乙肝病毒只能够影响感染肝脏，但现在国内外研究报道肝移植后肝再感染乙肝病毒可能来自肝外的组织或者细胞，如脾、淋巴等组织或细胞［7］。本次实验研究中，观察组14例患者中，阳性例数为9例，阳性比率为64.29%;对照组11例患者中，阳性例数仅为1例，阳性比率为9.09%(P＜0.05)，可见乙肝复发患者HBV-cccDNA阳性率显著高于未复发患者。

综上所述，在没有外源性感染等情况下，巨噬细胞内的HBV-cccDNA可能是乙型肝炎相关性肝病肝移植后患者乙肝复发的主要来源，临床值得进一步思考和研究。

［1］ 陈映，吴忠均.巨噬细胞与乙型肝炎相关性肝病肝移植后乙型肝炎复发的联系.中国组织工程研究与临床康复，2011，15(18):2495-2496.

［2］ 刘佃香.慢性乙型肝炎及乙肝肝硬化患者与血小板功能相关性分析.医学信息，2008，21(5):747-748.

［3］ 师长宏，江鹰，赵勇，毛峰峰，张彩琴，白冰，张海.结核分枝杆菌Hsp16.3蛋白影响小鼠巨噬细胞自噬形成的实验研究.细胞与分子免疫学杂志，2011，27(12):1301-1303.

［4］ 刘学俭.乙肝病毒感染中医证型与免疫功能的相关性研究.贵阳中医学院学报，2008，30(1):6-7.

［5］ 何瑶，黄文生，杨荣萍，陈瑜君，任明.不同亚群肝脏巨噬细胞在猪血清诱导大鼠免疫性肝损伤中作用.中国病理生理杂志，2010，26(7):1341-1347.

［6］ 党惠兵.肝细胞生长因子联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子治疗骨髓增生异常综合征.中国实用医刊，2008，35(14):92-93.

［7］ 高晓卡，李永宏，王宝华.几种细胞生长因子与重型肝炎.临床肝胆病杂志，2008，24(1):62-65.