顶空气相色谱法测定醋酸地塞米松原料药中残留溶剂的含量

陈丽萍，丁邦东，谭志刚，吴 健

(1.扬州工业职业技术学院，扬州 225127； 2.江苏联环药业集团，扬州 225009)

醋酸地塞米松(Dexamethasoni Aeetas)是一种能影响物质代谢、升高血糖的肾上腺皮质激素药。在产品生产过程中，需要用到甲醇、丙酮、醋酸乙酯、吡啶4种有机溶剂，这些溶剂会对人体健康造成危害，在生产过程中完全去除比较困难，但必须确保产品中的这些溶剂残留量是人体可以接受的，《中国药典》和 ICH对各类溶剂残留量有严格的规定[1，2]。

本实验首次建立了毛细管柱气相色谱法，测定测定工艺中用到的4种溶剂，并进行了方法学研究。结果显示，该方法准确，灵敏度高，可用于醋酸地塞米松中残留溶剂的检测。

1 仪器与试剂

6890N气相色谱仪(Agilent公司)，7694E顶空进样器(Agilent公司)，N2000工作站(浙江大学)。甲醇、丙酮、醋酸乙酯、吡啶(色谱纯)，均购买于国药试剂集团。醋酸地塞米松(江苏联环药业集团提供，批号201002001、201002002、201002003)，水为双蒸馏水。

2 方法与结果

2.1色谱条件与系统适应性 DB-624毛细管色谱柱(SN US4652334H)(30 m×0.53 mm×3.0 μm)；程序升温，初始温度为50 ℃，保持2 min后，以 10 ℃/min的速率升温至 160 ℃，保持 5 min；载气 N2，流速3.5 ml/min。7694 E顶空瓶进样器， 进样体积1 μl，进样口温度为 180 ℃，分流比为5∶1；顶空瓶温度 70 ℃，定量环温度 80 ℃，传输管线温度 110 ℃/瓶，加热时间45 min，瓶压 9.23×104Pa，顶空瓶体积 10 ml，加入被测液体 1 ml，加盖密封。 火焰离子化检测器(FID)， 温度 250 ℃，氢气流速40 ml/min，空气流速 400 ml/min，尾吹 30 ml/min。

2.2溶液配制

2．2．1对照储备溶液的配制 精密吸取甲醇127 μl(相当于100 mg)、丙酮127 μl(相当于100 mg)、醋酸乙酯111 μl(相当于100 mg)、吡啶102 μl(相当于100 mg)分别置于4个事先装有少量二甲亚砜(DMSO)的100 ml量瓶中，用DMSO稀释到刻度，配制成4个相应的二甲亚砜溶液。

2．2．2对照液的配制 分别吸取上述对照储备溶液5 ml到4个50 ml的量瓶中，用DMSO稀释到刻度，摇匀，配制成含各残留溶剂浓度均为100 μg/ml的4种溶液A(甲醇)、B(丙酮)、C(醋酸乙酯)和 D(吡啶)溶液。

2.3专属性试验 精密量取上述各对照溶液，用DMSO逐步稀释，按上述色谱条件进样测定，出样顺序：甲醇A(RT=1.920)，丙酮B(RT=2.740)，醋酸乙酯C(RT=4.248)，吡啶D(RT=6.993)，DMSO(RT=10.023)。取上述对照液按1∶1混合进样。5个成分之间分离度均>3.0，且理论塔板数均大于10 000，对称性好，见图1。

2.4检测限试验 分别精密量取专属性项下A甲醇溶液2.0 ml ，B丙酮溶液4.0 ml ， C醋酸乙酯溶液2.0 ml ，D吡啶溶液2.0 ml，置100 ml量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀，测定一次，再吸取A甲醇溶液0.75 ml，B丙酮溶液4.0 ml，C醋酸乙酯溶液1.0 ml，D吡啶溶液0.5 ml到100 ml量瓶中，用DMSO稀释至刻度，在信噪比大于3的条件下测得甲醇、丙酮、醋酸乙酯、吡啶的最低检测浓度分别为0.75、2.0、1.0和0.5 μg/ml。

2.5线性关系测定 精密吸取甲醇380 μl(相当于300 mg)、丙酮634 μl(相当于500 mg)、醋酸乙酯556 μl(相当于500 mg)、吡啶20.4 μl(相当于20 mg)，置同一个事先装有少量二甲亚砜的200 ml量瓶中，用DMSO稀释至刻度，配成含甲醇1 500 μg/ml、丙酮2 500 μg/ml、醋酸乙酯2 500 μg/ml、吡啶100 μg/ml的标准储备液，分别精密吸取标准储备液1、2、5、10、15和20 ml到6个100 ml量瓶中，用DMSO稀释至刻度，配成1#～6#的6个标准溶液。取上述6个标准溶液分别进样，线性关系见表1。

1.甲醇 2.丙酮 3.醋酸乙酯 4.吡啶 5.DMSO图1 专属性试验

表1 线性关系考查结果

从上述结果可以看出：甲醇在浓度15～300 μg/ml之间，丙酮、醋酸乙酯在浓度25～500 μg/ml之间,吡啶在浓度1.0～20 μg/ml之间，线性关系良好，相关系数均大于0.999。

2．6回收率试验 精密称取供试品(批号201002001)9份，每份500 mg，分别置9个10 ml量瓶中，每份分别精密加入线性项下的2#、4#、6#标准溶液溶解(各3份)，再加DMSO稀释到刻度，摇匀。同时做空白实验，空白检测溶液中测出丙酮A=12 746, 醋酸乙酯A=16 318，未测出甲醇，吡啶，再将上述9份样品分别进样，并用各自相对应的线性方程计算回收率，结果甲醇、丙酮、醋酸乙酯和吡啶的平均回收率及RSD分别为100.2%和2.0%、100.1%和3.1%、100.7%和1.9%及98.8%2.0%。见表2。

2.7精密度测定 精密吸取标准储备液10 ml到100 ml量瓶中，用DMSO稀释至刻度，配成含甲醇150 μg/ml、丙酮250 μg/ml、乙酸乙酯250 μg/ml、吡啶10 μg/ml对照品溶液。精密量取对照液5份，每份2 ml 置20 ml顶空瓶中，同法测定，以峰面积计算，结果对照品溶液中甲醇、丙酮、醋酸乙酯、吡啶峰面积的RSD分别为2.1%、3.2%、1.8%和2.4%。

表2 回收率试验结果

2.8样品测定 取供试品(批号201002001、201002002、201002003) 3批，每个批号精密称取500 mg到10 ml量瓶中，用DMSO溶解并稀释至刻度。标准溶液峰面积取精密度项下标准溶液各溶剂峰面积，供试品残留按外标法计算。结果见表3。

表3 样品测定结果 ng/ml

说明：符号“ -”表示未检出。

3 讨论

本文首次采用顶空气相色谱法对醋酸地塞米松原料药的4种残留溶剂进行检测。方法验证证明：该方法色谱条件分离良好，灵敏度高，在考查的浓度范围内线性关系良好(r>0.999 9)，回收率符合规定，符合《中国药典》2010版附录Ⅷ P中有机溶剂残留量测定的要求，可以作为醋酸地塞米松原料药中残留溶剂的质量控制方法。

1 中国药典.二部.2005：附录54

2 周海钧．药品注册的国际技术要求(质量部分)．北京：人民卫生出版社 ，2001：82