2种盐酸氨溴索制剂的人体药动学研究

周雅萍（南昌大学第二附属医院药剂科，南昌 330006）

盐酸氨溴索（Ambroxol hydrochloride）是目前临床作用较强的祛痰药[1]。其作用机理为刺激支气管黏液腺，增加中性黏多糖的分泌，减少酸性黏多糖的合成并促进其代谢，并提高支气管黏膜上皮纤毛运动频率及运送能力，使痰易于排出[2～5]。为了迅速缓解临床症状，科研工作者将盐酸氨溴索普通片制成分散片。笔者参考国内、外文献，建立了测定人血浆中盐酸氨溴索浓度的高效液相色谱（HPLC）法，并将该法用于健康人口服给药的药动学研究，比较分散片与普通片在体内的作用特点及代谢规律，获得了比较满意的试验结果，现报道如下。

1 材料

1.1 仪器

Aglient 1200高效液相色谱系统，配备G1322A在线脱气机、G1311A四元梯度泵、G1329A自动进样仪、G1316A柱温箱、Aglient色谱工作站（美国安捷伦公司）；Thermolyne涡旋混合器（球兴科仪国际贸易（上海）有限公司）；H-15FR高速离心机（日本Kokusan（科库森）实验仪器厂生产）。

1.2 试药

盐酸氨溴索分散片（湖北鑫烨医药有限公司，批号:20100817）；盐酸氨溴索普通片（天津怀仁制药有限公司，批号:20100913）；盐酸氨溴索对照品（天津金侧分析科技有限公司，批号:10943-200910，纯度＞98%）；内标:盐酸西替利嗪对照品（上海瑞齐生物科技有限公司，纯度＞98%）；乙腈、甲醇均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，试验用水为超纯水。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱:美国迪马公司的C18钻石色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相:乙腈∶甲醇∶10 mmol·L－1磷酸盐缓冲液（pH 7.0）＝70∶27.5∶2.5；流速:1 mL·min－1；检测波长:242 nm。

2.2 试验溶液的制备

准确称取盐酸氨溴索对照品适量，用甲醇溶解制备成含盐酸氨溴索50 mg·L－1的对照品贮备液，于4℃冰箱中保存。临用时精密吸取适量，用流动相稀释至所需浓度即可。另准确称取盐酸西替利嗪对照品适量，用乙腈溶解制备成含盐酸西替利嗪50 μg·L－1的贮备液，于4 ℃冰箱中保存。

2.3 受试者选择

12名男性健康受试者，年龄23～37岁，体重62～68 kg；不嗜烟酒，身体健康。受试者对试验过程及可能发生的不良反应表示理解并签署知情同意书，并报医学伦理委员会审批通过。受试者在试验前进行体格检查，无心、肝、肾、消化道、代谢异常等病史，心电图、血压、肝、肾、肺功能等常规体检均正常。体检合格后，平均分成2组，每组6人。受试前2周及试验期间未用过任何其他药物并禁烟酒，清晨空腹用温开水吞服盐酸氨溴索分散片和盐酸氨溴索普通片。自给药后0.5、1、2、4、6、9、12、15、18、21、24 h时，取上肢静脉血3 mL，将血标本置肝素化的试管中抗凝，取血浆－40℃保存待测。整个试验在医护人员监护下进行，并对药物产生的不良反应及时记录和处理。

2.4 血浆样品预处理[6]

抗凝全血离心（3000 r·min－1）5 min，精密吸取上层血浆1 mL置5 mL离心管中，加入盐酸西替利嗪内标贮备液40 μL混匀，再加入2%枸橼酸水溶液（pH 5.5）1 mL，涡旋振荡30 s，再以叔丁基甲醚进行萃取2次，每次3 mL，涡旋振荡30 s，离心（12000 r·min－1）5 min，吸取上层萃取液置尖嘴试管中，40 ℃水浴中氮气吹干，进样前残渣用100 μL流动相溶解，进样量80 μL。

2.5 数据处理

药-时数据用DAS2.1软件处理，选择合适的房室数，以拟合优度值等选择权重并求算其药动学参数。

3 结果

3.1 专属性

将口服药物后的血浆按“2.4”项下方法操作后，取80 μL注入高效液相色谱仪，同法处理空白血浆和空白血浆加对照品和内标的血浆，所得色谱图见图1。盐酸氨溴索和盐酸西替利嗪（内标）峰形良好，分离完全，保留时间分别为7.1 min和12.5 min，且血浆中的杂质不干扰样品的测定，基线平稳，无杂质峰干扰，因此本法具有良好的专属性。

图1 高效液相色谱图A.空白血浆；B.空白血浆+盐酸氨溴索对照品＋内标；1.盐酸氨溴索；2.盐酸西替利嗪Fig 1 HPLC chromtogramsA.blank plasma；B.blank plasma+ambroxol hydrochloride control+internal standard；1.ambroxol hydrochloride；2.cetirizine hydrochloride

3.2 标准曲线的制备

精密吸取上述标准溶液适量，分别加入空白血浆1 mL中，配成血药浓度分别为5、10、40、80、150、400、800 μg·L－1的样品，样品均按“2.4”项下方法操作。取80 μL进样，记录色谱图、样品峰面积（As）与内标峰面积（Ai）之比。将标准曲线测定项下测得的Ai和As，以R＝As/Ai对浓度c进行线性回归，得工作标准曲线方程（n＝6）:R＝0.004137 c－0.7189（r＝0.9998），结果盐酸氨溴索的血药浓度在5～600 μg·L－1范围内呈良好的线性关系，最低检测浓度为5 μg·L－1（S/N≥3）。

3.3 精密度及回收率试验

采用空白血浆，添加适量的标准溶液，配置高、中、低（600、200、10 μg·L－1）3种浓度的加样标本，作为质控样品，每个浓度各6份，按“2.4”项下方法操作，测定盐酸氨溴索的浓度，以实测浓度与加入浓度之比乘以100%，计算回收率，并计算日内RSD。以同样的方法连续测定6 d，计算日间RSD，结果见表1。结果表明测得的日内及日间RSD均＜15%，回收率可达90%以上，可见本方法有较好的准确性和精密度，符合生物样本测定方法的要求。

表1 回收率及精密度试验结果（ ）Tab 1 Results of recovery and precision test（s ）

表1 回收率及精密度试验结果（ ）Tab 1 Results of recovery and precision test（s ）

回收率/%95.7±3.294.9±8.295.3±7.4血药浓度/μg·L-1 10200600日内测得值/μg·L-1 9.6±0.8189.5±10.7587.5±28.9日内RSD/%4.95.88.7日间测得值/μg·L-1 9.5±0.7186.7±11.8591.3±32.7日间RSD/%5.17.99.1

3.4 稳定性考察

取高、中、低（600、200、10 μg·L－1）3种浓度的质控血浆，按“2.4”项下步骤处理后置于室温下的自动进样器中，分别在0、10、18、24 h时测定，比较不同时间测定的浓度。结果盐酸氨溴索的浓度变化＜5%，表明血浆样品在24 h内稳定性良好，结果见表2。

表2 稳定性考察结果Tab 2 Results of stability test

3.5 多次冻融试验结果

配制高、中、低3种浓度的质控血浆样品适量，即时测定；另于－40℃冷冻-解冻，连续3次，测定并计算经3次冻融后盐酸氨溴索浓度的变化。结果盐酸氨溴索的浓度变化小于10%，表明血样经3次冻融后稳定性较好，结果见表2。

3.6 盐酸氨溴索在人体内的药动学考察

12例健康志愿者空腹单剂量口服盐酸氨溴索分散片和普通片后血浆中平均药-时曲线见图2。采用DAS2.1软件对盐酸氨溴索药-时曲线进行拟合。结果表明，盐酸氨溴索药-时曲线符合二室模型，所计算出的主要药动学参数见表3。本方法适用于测定人血浆中盐酸氨溴索的浓度。

图2 受试者单剂量口服盐酸氨溴索分散片与普通片90 mg后平均药-时曲线（， n＝6）Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of ambroxol hydrochloride in volunteers after oral administration of Ambroxol hydrochloride dispersible tablet and Ambroxol hydrochloride tablet 90 m（g ，n＝6）

4 讨论

本试验借鉴文献中HPLC法，以美国迪马公司的C18钻石色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈∶甲醇∶10 mmol·L－1磷酸盐缓冲液（pH 7.0）＝70∶27.5∶2.5，流速为1 mL·min－1，检测波长为242 nm进行定量检测。检测样品中盐酸氨溴索和内标盐酸西替利嗪均获得满意的分离效果，且峰形对称良好、保留时间短。血浆样品预处理采用碱化血浆、叔丁基甲醚反复萃取，既提高了分析方法的回收率，又使体内样品提取物色谱干扰减少，在强洗脱流动相条件下保证了血浆样品中微量盐酸氨溴索组分快速出峰，极大地提高了检测灵敏度。经回收率、精密度及标准曲线考察，表明此分析方法具有灵敏、准确、迅速的优点。

表3 受试者单剂量口服盐酸氨溴索分散片与普通片90 mg后的主要药动学参数（， n＝6）Tab 3 Main pharmacokinetic parameters of ambroxol hydrochloride in volunteers after oral administration of Ambroxol hydrochloride dispersible tablet and Ambroxol hydrochloride tablet 90 m（g ，n＝6）

表3 受试者单剂量口服盐酸氨溴索分散片与普通片90 mg后的主要药动学参数（， n＝6）Tab 3 Main pharmacokinetic parameters of ambroxol hydrochloride in volunteers after oral administration of Ambroxol hydrochloride dispersible tablet and Ambroxol hydrochloride tablet 90 m（g ，n＝6）

参数cmax/μg·L-1 tmax/h t1/2/h AUC0～∞/μg·h·L-1 AUC0～24 h/μg·h·L-1盐酸氨溴索分散片697.8±78.42.9±0.24.8±0.75795.6±184.74643.8±107.6盐酸氨溴索普通片564.3±63.94.7±0.65.8±0.94516.4±114.93717.5±87.6

[1]龚巧燕，唐 尧.静脉滴注盐酸氨溴索注射液致寒战1例[J].中国药房，2011，22（10）:923.

[2]梁辉鹏，莫介星.早期应用盐酸氨溴索防治新生儿呼吸窘迫综合征的效果观察[J].中国现代药物应用，2010，4（14）:6.

[3]许永猛，周秀花.盐酸氨溴索联合利巴韦林辅助治疗小儿肺炎疗效观察[J].齐齐哈尔医学院学报，2010，31（13）:2094.

[4]施晓飞.盐酸氨溴索联合氨茶碱治疗小儿支气管哮喘42例的疗效观察[J].吉林医学，2010，30（19）:2993.

[5]高 宏.盐酸氨溴索治疗呼吸系统疾病疗效观察[J].临床肺科杂志，2010，15（9）:1319.

[6]范国荣，胡晋红，林 梅，等.多剂量口服盐酸氨溴索缓释胶囊的人体药代动力学及相对生物利用度[J].中国药理学通报，2010，16（4）:467.