注射用脂溶性维生素（I）细菌内毒素检查法研究

潘卫松，肖 瑛，周永标，张讷敏

（1.广州市药品检验所，广东 广州 510610；2.暨南大学 药学院，广东 广州 510632；3.暨南大学 中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室，广东 广州 510632）

注射用脂溶性维生素（I）是由维生素A棕榈酸酯、维生素D2、E、K1等多种维生素成分制成的无菌冻干粉针，临床上用于各种内、外科手术、严重传染性疾病、昏迷等症的肠外维生素补充剂，是各种外科手术后必用的药物。我所承担了其国家评价性抽检的任务。其现行标准共有3个，分别为国家食品药品监督管理局标准（试行）YBH09722008，国家食品药品监督管理局标准（试行）YBH05222009，国家食品药品监督管理局标准YBH38402005，其中，前两个标准都是使用细菌内毒素检查法对热原进行控制，限度均为10EU／瓶，最后一个标准则采用了家兔热原检查法对热原进行控制。我们按2010年版《中国药典》（二部）“细菌内毒素检查法”对实施国家食品药品监督管理局标准YBH38402005的本品种进行了干扰试验，以考察对其进行细菌内毒素检查的可行性，并提出将其限度提高到5EU／瓶。现将结果报道如下。

1 仪器与试药

SUB14恒温水浴（英国GRANT公司）；MSI旋涡混合器（广州IKA公司）。

细菌内毒素工作标准品（规格：每支160EU，批号：150601－201174；）及细菌内毒素检查用水（BET水，规格：每支50mL，批号：1105060）均购自中国药品生物制品检定所；鲎试剂（TAL）A（湛江安度斯生物有限公司，规格：每支0.1mL，批号：1105101，灵敏度：0.25EU·mL－1）；TAL B（厦门市鲎试剂实验厂有限公司，规格：每支0.1mL，批号：110603，灵敏度：0.25EU·mL－1；TAL C（湛江安度斯生物有限公司，规格：每支0.1mL，批号：1103242，灵敏度：0.06EU·mL－1）；TAL D（厦门市鲎试剂实验厂有限公司，规格：每支0.1mL，批号：100915，灵敏度：0.06EU·mL－1；注射用脂溶性维生素（I）（规格：复方制剂，批号：110102（II）206，110201（II）57，101201（II）52，10100704，10050694，101202（II）174，110101（II）41，10100787，110201（II）150，10100731，10030389，110401（II）83，110202（II）33，110203（II）89，110201（II）73）。

2 方法与结果

2.1 细菌内毒素限值的确定

根据药品使用说明书和规格，注射用脂溶性维生素（I）细菌内毒素限值拟定为5EU／瓶。

2.2 鲎试剂灵敏度复核试验

按照2010年版《中国药典》（二部）附录细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度（λ）复核。结果见表1。

表1 鲎试剂灵敏度复核试验结果

由表1可见，2批鲎试剂经用细菌内毒素工作标准品检查，λc均在0.5λ～2.0λ之间，结果均符合规定。

2.3 预干扰试验

注射用脂溶性维生素（I）有效稀释浓度（MVC）的计算：根据公式MVC＝λ／L，其中L为注射用脂溶性维生素（I）的细菌内毒素限值5EU／瓶，每瓶先加入2mL BET检查用水，溶解充分后，其限度可认为2.5EU／mL，λ为鲎试剂标示灵敏度，目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.25～0.03EU／mL，则注射用脂溶性维生素（I）的对应有效稀释倍数为：

C0.25＝2.5／0.25＝10倍；C0.125＝2.5／0.125＝20倍；C0.06＝2.5／0.06＝40倍；C0.03＝2.5／0.03＝80倍

预干扰试验：

将上述系列浓度溶液记为NPC。同时在上述NPC液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的试验液中均含有2λ浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。取两个不同厂家的鲎试剂，分别与上述PPC和NPC进行反应，每一浓度重复两管，并设阳性和阴性对照。

由预干扰试验结果可以初步了解：两个厂家的鲎试剂对注射用脂溶性维生素（I）的细菌内毒素的试验结果在进行40倍稀释后均无干扰。

2.4 正式干扰试验

为了最终确认注射用脂溶性维生素（I）是否存在干扰因素的影响，笔者进行了正式干扰试验。

正式干扰试验：

取脂溶性维生素（I），先每瓶用2mlBET水溶解，再以BET水溶解，使其最终干扰试验稀释倍数为40倍，按2010年版《中国药典》二部附录中的“细菌内毒素检查供试品干扰试验项”进行试验，结果见表2。

由表2可知，注射用脂溶性维生素（I）在进行40倍稀释后Es／Et均在0.5～2.0范围之内，确认在40倍及以上稀释倍数时无干扰影响。

2.5 样品细菌内毒素检查

按2010年版《中国药典》细菌内毒素检查法，使用2批不同厂家的鲎试剂分别对样品进行细菌内毒素检查，并同时设立样品的自身阳性对照品，结果见表3。

3 讨论

由干扰预试验结果可以初步发现注射用脂溶性维生素（I）在40倍以上稀释倍数对两个厂家生产的鲎试剂均无干扰作用。正式干扰试验样品进行40倍稀释且用两个厂家的鲎试剂结果Es／Et均在0.5～2.0范围之内，确认在40倍以上稀释倍数时无干扰影响。

限值定为5EU／瓶。注射用脂溶性维生素（I）可适用细菌内毒素检查法，鲎试剂灵敏度应使用0.06EU／mL。

表2 样品（40倍稀释）干扰试验结果

表3 样品细菌内毒素检查结果

续表3

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［S］.2010.北京：中国医药科技出版社，2010：附录99.

［2］潘卫松，肖瑛.透明质酸钠注射液细菌内毒素检查法的研究［J］.中国医药导报，2009，20（6）：45－7.

［3］潘卫松，肖瑛，潘建明.荧光素钠注射液细菌内毒素检查法的研究［J］.中国药房，2009，20（13）：1010－12.

［4］江红，潘卫松，肖 瑛.对口岸药品检验所进口药品留样时间的思考［J］.中国药事，2011，25（6）：582－3.