用测试片法快速检测金黄色葡萄球菌

孙霞 陈娟丽

金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌，由于其形状为球型，在显微镜下排列成葡萄串状而得名，该菌广泛存在于空气、水、尘埃及人和动物的排泄物中。因而，食品及食品原料受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌能产生多种致病性物质，如肠毒素及凝固酶等。金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒是一个全球性公共卫生问题，据美国疾病预防控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠埃希菌，居第2位，占细菌性食物中毒的33％，加拿大的发生率更高，占细菌性食物中毒的45％。我国每年发生的此类中毒事件也非常多，最容易感染金黄色葡萄球菌的食物包括肉类、禽类、蛋类、水产类、奶及其制品等，因此大多数食品及食品原料，均须按国家规定要求进行金黄色葡萄球菌的检测。

目前，我国对金黄色葡萄球菌最常用的检测方法是常规培养法，经过分离培养、形态特征观察及一系列生理生化鉴定，包括血浆凝固酶试验和毒素检测试验等，到最终的检测报告至少需要3～5天，费时费力，且容易导致送检货物积压而造成较大的经济损失。因此，对金黄色葡萄球菌的检测迫切需要更快速、更简易、更准确的方法，快速测试片法因其自身具有的轻便、快速、简易的优势而成为未来微生物检测中较有前景的重要手段之一。广州绿洲生化科技股份有限公司生产的金黄色葡萄球菌测试片(见图1)，是以法国进口的金黄色葡萄球菌显色培养基为主要原料，运用微生物测试片专有技术，具有显色培养基灵敏、特异和高选择性，及纸片法方便、经济与快捷的优点，可以满足食品中金黄色葡萄球菌快速检测需要的一次性快速测试片。

验证试验

金黄色葡萄球菌测试片特异性试验

将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪大肠菌、阪崎肠杆菌、副溶血弧菌、蜡样芽胞杆菌、大肠杆菌0157、肠炎沙门氏菌、阴沟肠杆菌、粪链球菌及铜绿假单胞菌标准菌株纯化复壮后，挑取单个菌落接种到营养琼脂斜面，培养过夜后用生理盐水洗脱，制成适宜浓度的菌悬液。分别吸取以上菌悬液1mL，滴加到金黄色葡萄球菌测试片上，每个菌株接种两片作为重复，经(36±1)℃培养24h后，观察记录细菌生长情况。只有金黄色葡萄球菌呈现典型的紫红色菌斑，其余大部分非目的菌在测试片上不生长，少部分如大肠杆菌显示为蓝色菌斑，均明显区别于目的菌，说明测试片具有良好的特异性。金黄色葡萄球菌测试片灵敏度试验

挑取纯培养的金黄色葡萄球菌单个菌落，用无菌生理盐水先制成麦氏度0.05MCF的菌悬液，再稀释成适宜梯度后接种测试片，每个稀释度均分别接种测试片两张；同时以营养琼脂平板计数法测定菌液的确切菌落数目，并进行比较(结果见表1)。

从表1可以看出，金黄色葡萄球菌测试片对纯菌的检测灵敏度可达lcfu／mL，对菌落数目在0～9个范围内的菌液，测试片与平皿一样均能检测出来，测试片与倾注平板法相比，最小检出量可提高一个稀释梯度。同类产品对比试验

目前国内外市场上有好几种同类的产品，本实验选取国外某知名品牌产品进行对比试验。挑取纯培养金黄色葡萄球菌单菌落，用无菌生理盐水先制成0.05MCF的菌悬液，再稀释成适宜梯度的菌悬液，分别吸取lmL接种到金黄色葡萄球菌测试片(Ⅰ号)和国外某知名品牌产品(Ⅱ号)上，置于(36±1)℃培养24h，观察记录结果。多次试验结果综合记录在表2中。

从表2中可以看出，金黄色葡萄球菌测试片与国外某知名品牌产品相比，多次试验结果相符率均在90％以上，4次试验结果平均相符率达到94.3％，两个产品的检测效果是一致的，而绿洲产品不需要用确认片做确认试验，使用更加简便和快捷。

测试片法与国标方法的检测比较

从市场上随机购买各种样品，包括各种生熟肉制品、奶及奶制品、糕点等，首先经GB 4789.10 2010标准方法检测，证明为金黄色葡萄球菌呈阴性的样品为阴性样品。在阴性样品中人为加入适当浓度的金黄色葡萄球菌标准菌悬液，使样品含菌量在10～10²％fu／mL之间，为模拟阳性样品。用金黄色葡萄球菌测试片对阴性样品和模拟阳性样品各20份进行检测，同时用国标方法作对比试验，计算测试片法与国标方法的符合率。结果见表3和表4。

在接种的40个样品中，用国标方法检出结果金黄色葡萄球菌为阳性的样品有20份(全部为模拟阳性样品)，用测试片法检出结果金黄色葡萄球菌为阳性的样品有21份(包括20份模拟阳性样品和1份假阳性的阴性样品)，两者的阳性符合率为95.2％，阴性符合率达到100％，整体符合率达到97.5％，测试片的检出率要比国标方法提高了2.5％，有效防止了漏检现象的发生。结论

金黄色葡萄球菌测试片灵敏度高，特异性强，与国标方法相比较符合率高，能广泛适用于各类食品及食品原料中金黄色葡萄球菌的检验，作为一种快速方法，特别有利于大通量样品初筛，可以作为国标方法的有利补充。同时采用快速测试片法检测样品还具有其他的一些优势：省去了配制培养基、分装灭菌等前处理和试验后清洗玻璃器皿等一系列繁杂的准备和整理工作，能大幅度减少工作量；携带方便，检测成本较低；操作简便迅速，对操作人员和检验设备及场所的要求也不高，可在基层检验机构或食品生产企业进行推广应用。因此，该方法具有广阔的市场应用前景。