金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药辅助基因femB的克隆和原核表达

2012-04-29 00:44邹明祥武文君李军邬国军张宁洁刘文恩范学工
生命科学研究 2012年3期
关键词:甲氧原核西林

邹明祥 武文君 李军 邬国军 张宁洁 刘文恩 范学工

摘要:金黄色葡萄球菌femB基因与甲氧西林高水平耐药密切相关,可能成为开发抗MRSA药物的新靶位以金葡菌基因组DNA为模板,PCR扩增femB全长基因,所得片段与pGM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5a,阳性克隆以PCR、双酶切及测序鉴定,将鉴定正确的目的片段定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,转化至大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达GST/FemB融合蛋白;采用SDS-PAGE及Westrn blot对融合蛋白进行鉴定,结果显示,重组质粒在宿主菌中获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为75 kD,该融合蛋白可与抗GST-tag抗体特异结合;表明femB基因的原核表达系统构建成功,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

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