HPLC 法测定肝喜乐片中齐墩果酸的含量及含量均匀度

林伟兰 江 溱

广西古方药业有限公司，广西 南宁 530221

肝喜乐片由墩果酸、刺五加浸膏、五味子浸膏等成分组成。功能主治有降低谷丙转氨酶，保护及促进肝细胞再生功能，主要用于治疗急性肝炎，迁延型慢性肝炎和肝硬化等症。齐墩果酸为本方中有效成分之一，因此测定本品中齐墩果酸的含量，可作为本品质量控制的指标之一。为了更好的控制该制剂的质量，保证药品使用安全、有效，采用HPLC法测定了齐墩果酸的含量及含量均匀度。

1 仪器与试药

LC－10AP型高效液相色谱仪 (日本岛津公司);SPD－10Avp紫外－可见检测器;LC－10ATVP7725(i)型手动进样器;威玛龙色谱数据工作站;Aglient 8456紫外可见分光光度计;?kh－250db型超声处理器 (昆山禾创超声仪器有限公司)。

齐墩果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为:110773－9911;肝喜乐片 (购自A厂，共3批);乙腈为色谱纯;其余试剂为分析纯，水为超纯水。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:十八烷基键合硅胶Kromasil C18(4.6×150mm，5um)流动相为乙腈－水－磷酸溶液 (75:25:0.42)，检测波长:210nm，流速为1.0 ml· min－1，进样量为10μl;柱温为室温;理论塔板数按齐墩果酸计算应不低于1500。在上述色谱条件下，供试品中齐墩果酸能完全分离，对照品与阴性对照品溶液中没有峰重叠，色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品10.0mg，置100ml棕色容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 (每1ml含齐墩果酸0.1 mg)。

2.3 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.3g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理 (功率250W，频率50kHz)50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，以上述色谱条件测定，根据齐墩果酸峰面积，以外标法计算供试品中齐墩果酸含量。

2.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液以1、2、3、4、5μl按拟定的色谱条件测定峰面积，以峰面积分值为纵坐标，齐墩果酸量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程:Y=500165 X－5495.3，r=0.9997，结果表明:齐墩果酸进样浓度在0.592～2.96mg范围内，进样浓度与齐墩果酸峰面积呈良好线性关系。

2.6 精密度试验 分别精密吸取齐墩果酸对照品溶液和供试品溶液 (批号:20110101)各10μl，重复进样5次，记录色谱图，测定齐墩果酸面积，其RSD为1.85%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 (批号:20110101)10μl，分别于0、4、8、12、16、24小时进行测定，其峰面积RSD为1.87%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8 阴性对照试验 按处方比例取处方中缺齐墩果酸，照制法制取阴性样品。取阴性样品0.3g，并按供试品溶液提取方法制成阴性对照溶液，测定，在上述色谱条件下，缺齐墩果酸阴性对照溶液，在齐墩果酸谱峰处无干扰峰出现，表明对被测成分无干扰。

2.9 重复性试验 取同一批号供试品 (批号:20110101)共5份，每份约1.5g，精密称定，按样品测定项下方法进行提取，测定，结果测得平均值0.451 mg·g－1，RSD%=0.20，表明重复性良好。

图1 高效液相色谱图

2.10 加样回收率试验 取已知含量的肝喜乐片 (批号20110101)五份，精密加入齐墩果酸对照品适量，制成供试品溶液，按上述色谱测定，以下计算回收率。结果见表1。

2.11 含量测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液3批，按上述色谱条件测定，以外标法计算，结果见表2。

2.12 含量均匀度测定 取样品3批，按供试品溶液制备方法提取，以上述色谱条件依法 (2010年版药典二部附录XE)测定齐墩果酸含量均匀度，结果见表2。

表1 齐墩果酸加样回收试验结果

表2 样品含量及含量均匀度测定结果

3 讨论

3.1 波长的选择 文献［1］采用215nm作为检测波长;而对齐墩果酸对照品溶液进行紫外吸收光谱测定，其吸收峰为210nm处的峰面积较大，故选择210nm作为本品的检验波长。

3.2 流动相的选择 齐墩果酸为弱酸性化合物，在流动相中加入少量酸性物质可改善峰形，参考文献［2］乙腈－水(94∶6)溶液，文献［3］甲醇 － 水 －冰乙酸 －三乙胺 (87∶13∶0.0 4∶0.0 2)，通过比较两者不同配比下的分离效果，最终确定为乙腈－0.42%磷酸溶液 (75:25)为流动相，此条件下，从色谱图形分析看，齐墩果酸托尾因子较小，样品分离效果好，阴性对照无干扰。

3.3 提取时间的考察 取同一供试品，超声时间分别为30min，40min，50min，对提取效果进行考察，结果超声提取50min时可提取完全，故实验中选择50分钟作为提取时间。

［1］李喜凤，郝哲，邱天宝，等.反相高效液相色谱法测定蒲公英中齐墩果酸的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(5):52－54.

［2］田园，李晓，关开，等.RP－HPLC法测定肝喜乐胶囊中齐墩果酸的含量［J］.辽宁中医杂志，2007，03:345.

［3］张雯婕，管太平，钱世兵.HPLC测定左归丸中齐墩果酸于熊果酸含量［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18(5):92－94.