八仙花叶中异香豆素和香豆素成分的结构鉴定

王知斌，孙海姣，雷印廷，马振平，肖 扬，杨春娟

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040;2.哈尔滨医科大学，黑龙江哈尔滨150081)

八仙花(Hydrangea macrophylla)又名绣球花、紫阳花、粉团花，为虎耳草科八仙花属多年生草本植物。原产中国大陆长江中下游以南和日本本州等地，在我国的栽培历史悠久，分布于我国南北各地。《中药大词典》记载:“苦微辛，寒，有小毒。”其复方治疟疾和治肾囊风。近年来，日本学者对其多有研究，其有效成分具有抗溃疡、抗过敏等生物活性［1］。因此，为了更好的利用该植物，我们利用现代中药化学手段对其化学成分进行了研究。通过硅胶柱色谱﹑ODS柱色谱和HPLC等方法从中分离得到了5个异香豆素和香豆素类化合物，根据其波谱数据并结合文献，确定了这5个化合物的结构，分别鉴定为①绣球酚，②绣球酚－4'－O－β－D－葡萄糖苷，③7－羟基香豆素，④香豆素－7－O－β－D－葡萄糖苷，⑤8－甲氧基香豆素－7－O－β－D－葡萄糖苷。

1 仪器与材料

核磁共振仪:JEOL EX－270(270 MHz)，JEOL E－500(500 MHz);高效液相色谱仪:HPLC detector－Shimadzu RID－6A refractive index;柱色谱用硅胶:BW－200，150～300目;柱色谱用ODS:DM1020T，100～200目)。

2 提取分离

八仙花叶3 kg用甲醇回流提取，得浸膏325.8 g，用水分散后，用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩，得到乙酸乙酯层浸膏67 g。乙酸乙酯层浸膏经硅胶柱色谱分离，采用氯仿－甲醇－ 水(20∶3∶1→10∶3∶1→7∶3∶1，lower layer→6∶4∶1，v/v/v)系统进行梯度洗脱，所得馏分经ODS柱色谱以及HPLC等方法进行分离纯化，得到 5个化合物:①100.3 mg，②58.2 mg，③10.5 mg，④17.2 mg;⑤13.3 mg。

3 结构鉴定

化合物1:白色粉末，该化合物的 EIMS给出 m/z 256［M］+。该化合物的1H－NMR(500 MHz，CD3OD)谱中显示分子中含有1个AA'BB'偶合系统的苯环，质子信号为δ7.34(2H，d，J=7.3 Hz)，6.81(2H，d，J=7.3 Hz)，1 个三取代的苯环，质子信号为 δ7.53(1H，t，J=8.6，7.4 Hz)，6.90(1H，d，J=8.6 Hz)，6.88(1H，d，J=7.4 Hz)和 2 个羟基质子信号δ10.93(1H，s)，9.62(1H，s)。该化合物的13C － NMR(125 MHz，CD3OD)谱中可见15个碳信号，包括12个苯环碳信号δ 160.9，157.8，140.6，136.3，128.5，128.3 × 2，118.4，115.4，115.2 ×2，108.4 和1 个羰基碳信号 δ169.4。在 HMBC 谱中，H－3与C－2'、C－4a和 C－1相关，H －4与 C－5、C－8a和C－1'相关。通过2D－NMR和NMR确定了化合物的结构，即化合物1为绣球酚。

化合物2:白色粉末，该化合物的FABMS给出m/z 441［M+Na］+。该化合物的1H －NMR(500 MHz，CD3OD)谱中显示分子中含有1个AA'BB'偶合系统的苯环，质子信号为δ7.45(2H，d，J=8.3 Hz)，7.07(2H，d，J=8.3 Hz)，1 个三取代的苯环，质子信号为 δ7.52(1H，t，J=8.3，7.6 Hz)，6.89(1H，d，J=8.3 Hz)，6.88(1H，d，J=7.6 Hz)和1 个8 位羟基的质子信号 δ10.90(1H，s)。该化合物的13C－NMR(125 MHz，CD3OD)谱中可见21个碳信号，包括12个苯环碳信号δ160.9，157.6，140.5，136.4，131.5，128.0 × 2，118.4，116.2×2，115.5，108.5，1 个羰基碳信号 δ169.2 和 1 分子葡萄糖的碳信号 δ100.2，73.2，77.0，69.7，76.6，60.7。该化合物波谱数据与文献报道数据基本一致［2］，确定化合物2为绣球酚－4'－O－β－D－葡萄糖苷。化合物3:黄色粉末。1H－NMR(270 MHz，CD3OD)谱给出δ7.85(1H，d，J=9.6 Hz，H －4)和 6.18(1H，d，J=9.6 Hz，H－3)，提示为香豆素类化合物;给出ABX偶合系统的苯环质子信号 δ7.45(1H，d，J=8.3 Hz，H － 5)，6.78(1H，dd，J=8.3，2.0 Hz，H －6)，6.71(1H，d，J=2.0 Hz，H － 8)。13C －NMR(68 MHz，DMSO － d6):C2 163.8，C3112.3，C4146.1，C5130.7，C6114.7，C7163.5，C8103.5，C9157.3，C10113.1。综合上述信息并结合文献［3］，鉴定该化合物为7－羟基香豆素。

表 1 1H and13C NMR(500 MHz and 125 MHz，CD3OD)data of compounds 1 and 2

化合物4:白色粉末。1H－NMR(270 MHz，DMSO－d6)谱给出 δ8.00(1H，d，J=9.4 Hz，H －4)和 6.34(1H，d，J=9.4 Hz，H－3)，提示为香豆素类化合物;3个ABX偶合系统的苯环质子信号 δ 7.65(1H，d，J=8.4 Hz，H －5)，7.02(1H，dd，J=8.4，2.2 Hz，H －6)，7.05(1H，d，J=2.2 Hz，H －8)和1 个葡萄糖上的端基质子信号 δ 5.04(1H，d，J=7.4 Hz)。13C－ NMR(68 MHz，DMSO － d6):C2160.2，C3113.1，C4144.2，C5129.4，C6113.6，C7160.2，C8103.2，C9155.0，C10113.3，C1'100.0，C2'73.1，C3'76.5，C4'69.6，C5'77.1，C6'60.6。综合上述信息并结合文献［4］，鉴定该化合物为香豆素－7－O－β－D－葡萄糖苷。

化合物5:白色粉末。1H －NMR(270 MHz，DMSO －d6)谱给出 δ 8.00(1H，d，J=9.5 Hz，H －4)和 6.34(1H，d，J=9.5 Hz，H－3)，提示为香豆素类化合物;2个相邻的苯环质子信号 δ7.40(1H，d，J=8.7 Hz，H －5)，7.19(1H，d，J=8.7 Hz，H－6);1个甲氧基质子信号δ3.88(3H，s)和1个葡萄糖端基质子信号 δ5.03(1H，d，J=7.4 Hz)。13C － NMR(68 MHz，DMSO －d6):C2159.7，C3113.3，C4144.4，C5123.1，C6112.3，C7153.1，C8135.8，C9147.3，C10114.1，C1'100.4，C2'73.1，C3'76.6，C4'69.5，C5'77.1，C6'60.5。综合上述信息并结合文献［5］，鉴定该化合物为8－甲氧基香豆素－7－O－β－D－葡萄糖苷。该化合物为从该属植物中首次分离得到。

3 讨论

异香豆素类化合物(绣球酚和绣球酚－4'－O－β－D－葡萄糖苷等)为八仙花中主要的活性成分和特征性成分，自然界植物中存在较少。近年来研究表明异香豆素类化合物具有降血糖、保肝、减肥等活性作用，因此有必要对其有效成分进行质量控制。本文为八仙花的进一步研究提供了有效的物质基础。同时，本文首次报道了绣球酚的光谱数据，为其活性的深入研究提供了保证。

［1］ Johji Y，Hisashi M，Hiroshi S，et al.Development of bioactive functions in Hydrangeae dulcis folium.Ⅱ.Antiulcer，antiallergy，and cholagoic effects of the extract from Hydrangeae dulcis folium［J］.Yakugaku Zasshi，1994，114(6):401 －413.

［2］ Yoshikawa M，Matsuda H，Shimoda H，et al.Development of bioactive functions in Hydrangeae Dulcis Folium.V.On the antiallergic and antimicrobial principles of Hydrangeae Dulcis Folium.(2).Thunberginols C，D，and E，thunberginol G 3'－O －glucoside，(－)－hydrangenol 4'－O －glucoside，and(+)－hydrangenol 4'－O －glucoside［J］.Chemical＆ Pharmaceutical Bulletin，1996，44(8):1440 －1447.

［3］ 尹锋，楼凤昌.佛手化学成分的研究［J］.中国药学杂志，2004，39(1):20 －21.

［4］ Bjerre J，Nielsen EH，Bols M.Hydrolysis of toxic natural glucosides catalyzed by cyclodextrin dicyanohydrins［J］.European Journal of Organic Chemistry，2008，(4):745 －752.

［5］ Ogawa M，Ito A，Takase Y，Ogihara Y，et al.Studies on the constituents of Enkianthus campanulatus NICHOLSON subsp.Longilobus and KITAMURA and Consideration on the Chemotaxonomy of Genus Enkianthus Plants［J］.Shoyakugaku Zasshi，1986，40(4):393－396.