HPLC－ELSD法测定胃泰咀嚼片中黄芪甲苷质量比

赵 威，李云涛，杨 波，杨书良

(1.哈尔滨商业大学药学院，哈尔滨150076;2.哈药集团世一堂制药厂，哈尔滨150088)

胃泰咀嚼片是由黄芪、白芍、党参、丹参等十一味药组成，具有健脾和胃的功效.用于慢性萎缩性胃炎、慢性浅表性胃炎之脾胃虚弱证引起的胃脘隐痛、食少纳呆、食后胀满等症状.黄芪为方中君药具有增强人体正气，调节免疫功能的作用［1］，同时还具有广泛的抗菌作用［2］，达到消除和杀灭幽门螺杆菌的目的.为有效控制该药生产质量，对黄芪中有效物质黄芪甲苷进行质量比测定，建立HPLCELSD测定方法.

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪，包括G1379A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1329B自动进样器，G2170AA色谱工作站，SEDEX55蒸发光散射检测器.

黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，110781－200613)，甲醇、正丁醇、氨试液，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水，胃泰咀嚼片(自制).

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Alltima－C18(5 μm，4.6 mm×250 mm);甲醇－水(68∶32)为流动相;流速1 mL/min;进样量:20 μL.

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.3 mg的黄芪甲苷溶液，即得.注入高效液相色谱仪见图1.

图1 黄芪甲苷标准品色谱图

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品20片，去除薄膜衣研细，精密称定，取约10 g，置具塞锥形瓶中，加甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率250 W，频率45 kHz)30 min，过滤，取滤液浓缩至干.残渣加蒸馏水10 mL微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液充分洗涤两次，每次40 mL，弃去氨液.正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解转移并定容至10 mL容量瓶中，样品过0.45 μm微孔滤膜，即得.注入高效液相色谱仪见图2.

2.2.3 阴性样品溶液的制备

按照胃泰咀嚼片制备工艺，制备缺少黄芪药材的成品，按照2.2.2供试品制备方法制备阴性液样品.注入高效液相色谱仪见图3.

2.3 测定方法

分别吸取标准品10、20 μL，供试品溶液20 μL注入高效液相色谱仪测定峰面积，按照外标两点法对数方程计算质量比.

2.4 线性关系考察

精密称取黄芪甲苷对照品24.01 mg置于10 mL容量瓶中，加入甲醇定容，分别精密吸取该溶液2.4、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1 mL，置于5 mL容量瓶中，配成质量浓度为1.14、0.76、0.38、0.19、0.095、0.0475 mg/mL的溶液，各精密吸取20 μL注入高效液相色谱仪，测得峰面积值.以进样量对数和峰面积对数进行线性回归绘制标准曲线，结果在0.95～22.8 μg线性关系良好，回归方程为lgY=11.346+1.550lgX相关系数为0.999 00.结果见图4.

2.5 精密度实验

精密吸取上述供试品溶液20 μL注入高效液相色谱仪，重复进样6次，计算峰面积对数RSD为0.94%

2.6 重复性实验

取同一批号的胃泰咀嚼片，按2.2.2供试品溶液制备方法制备6份样品，色谱条件如上所述，结果6次测定的平均质量比为0.63 mg/g，RSD为1.20%，说明重复性较好.

图4 黄芪甲苷标准曲线

2.7 回收率实验

取同一批样品胃泰咀嚼片6份，每份约5 g (0.23 mg/g)，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入黄芪甲苷对照品溶液1 mL(1.15 mg/mL)，按供试品溶液制备方法制得加样回收溶液，吸取加样回收溶液20 μL，注入液相色谱仪中，测定.结果表明本方法回收率良好.计算结果见表1.

2.8 稳定性实验

精密吸取同一供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，每隔2 h测定1次，共测定5次，考察峰面积积分值在8 h内变化，结果表明在8 h内基本稳定.取峰面积积分值对数，RSD为0.86%.

2.9 样品质量比测定

按照2.3项下测定方法测定3批胃泰咀嚼片黄芪甲苷的质量比，结果见表2.根据质量比测定结果确定每片(片重1.2 g)含黄芪甲苷不低于0.22 mg.

表1 加样回收率结果

表2 三批样品测定结果

3 讨论

黄芪甲苷是方中君药黄芪的主要指标性成分，其在近紫外区200～210 nm处有紫外吸收(末端吸收)，与杂质多糖、氨基酸等的吸收有重合，检测干扰多，并且黄芪甲苷在黄芪中的质量比比较低，所以采用HPLC－ELSD法对其进行质量比测定［3］.

黄芪甲苷的提取分离方法主要有索氏提取法和超声提取法，经预试对比两种方法提取效果相近，故选择方便省时的超声法提取.

查阅相关文献，黄芪甲苷测定常用流动相系统为乙腈 －水［4］、甲醇 －水［5］、乙腈 －水 －四氢呋喃［6－7］.预实验考察发现对于本品甲醇－水(68∶ 32)可以使本品中黄芪甲苷得到较好分离，所以选定此流动相系统.

［1］ 房静远.扶正祛邪法治疗幽门弯曲菌感染性胃病的临床与病理探讨［J］.中西医结合杂志，1991，11(3):150－152.

［2］ 邱勇波.黄芪化学成分及药理作用研究进展［J］.中国疗养医学，2011，20(5):435－436.

［3］ 段立军，孙博航.黄芪甲苷的研究进展［J］.沈阳药科大学学报，2011，28(5):410－416.

［4］ 候 璐.HPLC－ELSD法测定复方养心片中黄芪甲苷的质量比［J］.天津药学，2008，20(2):23－24.

［5］ 杜中惠.HPLC－ELSD法测定参芪降糖颗粒中黄芪甲苷的质量比［J］.齐鲁药事，2010，29(2):86－87.

［6］ 尹 强，李晶晶.HPLC－ELSD法测定天健胶囊中黄芪甲苷质量比［J］.湖北中医杂志，2010，32(11):61－62.

［7］ 于鹤丹，王政超，汪蔼文，等.抗风湿涂膜剂的体内药物动力学研究［J］.哈尔滨商业大学学报:自然科学版，2012，28 (1):4－7.