ER、PR和GLUT-1在子宫内膜息肉中的表达及意义

郭伟男 孙丽敏 郑小霞 张锺元 李梦轩 翟雨佳 张成顺

子宫内膜息肉(EP)是良性内膜腺体和纤维性间质组成的瘤样病变，在青春期后的任何年龄均可发生，多数发生在35岁以后，以绝经前后为发病的高峰，可引起异常子宫出血、不育等。文献报道其患病率为24%～25%［1］。3.3%的EP可发生癌前病变，3.0%可发生恶变，特别是绝经后EP患者的恶变率更高［2］。目前，EP的病因和发病机制尚未完全清楚。本实验通过检测子宫内膜息肉及正常增殖期子宫内膜中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)的表达，探讨子宫内膜息肉形成的机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2009年1月至2010年8月就诊于我院门诊宫腔镜检查，并检出EP的已婚女性38例为病例组，其中置宫内节育器(不含激素及抗炎药物)13例，年龄25～46岁;近3个月未用任何甾体激素类药物;排除生殖器官畸形、合并肝肾等慢性疾病的患者。选取同期因生殖道畸形而行宫腔镜检查的女性，月经规律，刮取少量子宫内膜作为对照组，共19例(患者知情并同意)。以上标本均取自月经干净后3～7 d，术后分别经病理证实为EP和增生期子宫内膜。

1.2 方法

1.2.1 样本采集:用0.9%氯化钠溶液清洗经宫腔镜剪取的子宫内膜及息肉组织后迅速投入液氮中保存。采用Trizol法提取细胞总RNA，取5 μl经1.5%琼脂糖凝胶电泳，检测完整性。

1.2.2 cDNA合成:将RNA模板10 μl、引物1 μl混匀置于70℃水浴5 min，后冰浴30 s，再加入二硫苏糖醇(DTT)5 μl、5×缓冲液10 μl、核糖核酸酶抑制剂(RNase Inhibitor)0.5 μl、三磷酸脱氧核苷(dNTP)2 μl、M-MLV逆转录酶0.5 μl和双氧水21 μl，30℃ 10 min，42℃ 30 min，95℃灭活逆转录酶5 min。1.2.3 引物:ER引物:上游5’-GGAGACATGAGAGCTGCCA-3’下游5’-CCAGCAGCATGTCGAAGATC-3’目的片段长度为438bp;PR引物:上游5’-TCATGAGCCGGTCCGGGTGCAAG-3’，下游5’-CGGGGTGGACGAGGCACAGG-3’，目的片段长度为196bp;GLUT-1引物:上游5’-TCATCGTGGCTGAACTCTTCAG-3’下游5’-TCACACTTGGGAATCAGCCCC-3’，目的片段长度为231bp;β-actin引物:Actb-F:5’-TACCCAGGCATTGCTGACAGG-3’，Actb-R:5’-ACTTGCGGT GCACGATGGA-3’，目的片段长度205bp。

1.2.4 PCR扩增:扩增体系包括:上下游引物:2.5 μl、逆转录产物(cDNA):1 μl、dNTP(2 mmol/L):1 μl、Buffer:2 μl、ddH2O:14.85 μl，共25 μl。

ER扩增条件:95℃ 预变性5 min，95℃变性30 s、53℃退火30 s、72℃30 s，72℃ 延伸5 min，30个循环，4℃保存;PR扩增条件:95℃预变性5 min，进入循环，95℃变性45 s、55℃退火30 s、72℃延伸30 s，30个循环后72℃最后延伸5 min，4℃保存;GLUT-1扩增条件:94℃ 预变性5 min，92℃变性:30 s，63℃退火:30 s，72℃延伸45 s，35个循环后72℃最后延伸7 min，4℃保存。

1.2.5 产物分析:紫外透射仪上观察结果并照相，选用Band-Scan5.0凝胶图像处理软件进行光密度值分析，采用目的基因与β-actin光密度的比值表示目的基因的表达水平。

1.3 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计量资料以¯x±s表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

图1 2组RT-PCR检测ER、PR、Glut-1转录水平1、2为对照组;3、4为病例组

2 结果

对照组 ER与 GLUT-1的表达明显低于病例组(P＜0.05)，PR的表达高于病例组(P＜0.05)。见表1。

表1 2组ER、PR及GLUT-1表达比较 ±s

表1 2组ER、PR及GLUT-1表达比较 ±s

注:与对照组比较，*P＜0.05

组别ER PR GLUT-1对照组(n=19)0.734±0.302 0.768±0.205 0.342±0.035病例组(n=38) 1.253±0.305* 0.421±0.107* 0.843±0.105*

3 讨论

雌激素通过与ER结合，形成二聚体，再通过与靶基因中的雌激素反应元件(ERE)特异性结合，形成细胞信号刺激靶基因转录，造成一系列促进靶器官细胞增殖和分化的蛋白表达，对子宫内膜作用即表现为促进子宫内膜的增生和血管增殖［3，4］。此外雌激素通过正反馈作用还可以在DNA复制转录水平上诱导ER和PR生成，长期过度的作用即可使子宫内膜发生增生甚至癌变，而增生的一个表现即为形成子宫内膜息肉。近年来在对育龄女性的研究中发现，并非ER、PR都参与了子宫内膜息肉的形成，雌激素在其中起着更为重要的作用［5］，而孕激素在息肉中的表达降低，对本病发生起保护作用。当内分泌功能出现紊乱时，雌、孕激素的水平及时相异常，导致子宫内膜ER、PR表达发生差异，不同部位内膜性激素受体表达不平衡，使内膜对雌、孕激素反应不一致，各处子宫内膜增生不平衡，ER表达较高的内膜可在雌激素的刺激下过度增生［6］。

Glut是哺乳动物细胞葡萄糖跨膜转运的主要载体，主要负责葡萄糖跨膜转运的生理过程，其家族共有13个成员:GLUT1-12和HMIT，不同组织中可表达不同分型的GLUT。许多研究表明，不典型增生组织和癌组织中，GLUT-1的表达普遍增强，而且其表达强度与细胞的增殖程度相关［7］。可以说GLUT家族是细胞耗能的一个标志，其表达增高可能预示着细胞异常分裂增生而需要大量葡萄糖作为基础供能。有文献报道，单纯性、复杂性增生子宫内膜与不典型增生子宫内膜的GLUT-1表达有差异，提示GLUT-1可以区分良性子宫内膜和具有恶性倾向的不典型增生子宫内膜，并认为GLUT-1异常表达可能是组织恶性转化中的早期事件［8］。

在子宫内膜息肉组织中，ER和GLUT-1表达升高，PR表达降低，提示ER、PR和GLUT-1在子宫内膜息肉的发生发展中起重要作用，为今后以ER、PR和GLUT-1为靶点的临床基因治疗子宫内膜息肉提供新的重要对策。

.Current practice for

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7 Jih YJ，Llin WH，Tsai WC，et al.Distinct regulation of genes by bFGFand VEGF-A in endothelial cells.Angiogenesis，2001，4:313.

8 Goldman NA，Katz EB，Glenn AS，et al.GLUT1 and GLUT8 in endometrium and endometrial adenocarcinoma.Mod Pathol，2006，19:1429.