景天三七对多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用

张彦霞，续雪红，乔海霞，张玉妥

（1．河北北方学院微生物研究所，河北 张家口075000；2．天津市河东区向阳楼街社区卫生服务中心，天津300000）

景天三七又名土三七，为景天科植物景天三七 （Sedum aizoon L．）的全草。是一种药食两用的植物，味甘、微酸、性平、无毒，有凉血止血、散瘀、消炎、安神、镇痛等作用［1－2］。土三七的营养及药用价值较为广泛，应用于衄血、咳血、吐血、尿血、子宫出血及外伤和内脏出血、血小板减少性紫癜、白血病等症［1］。该药含有没食子酸 （gallic acid）和谷甾醇等成分。据文献报道［2］没食子酸具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤作用。

随着广谱抗菌药物的大量应用，铜绿假单胞菌的感染和耐药性日趋严重，特别是多重耐药铜绿假单胞菌在临床上引起的感染，治疗非常棘手且死亡率高，因此迫切需要研制一种能够抑制多重耐药铜绿假单胞菌的新型制剂。前期的实验及有关报道均表明景天三七对铜绿假单胞菌有抑制作用且抑菌作用较强［3］，进一步研究了景天三七醇提物和水提物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌作用，为开发中草药抗菌制剂提供科学依据。

1 材料与方法

1．1 一般资料

1．1．1 仪器 721分光光度计；培养箱；无菌超净工作台；高压蒸汽灭菌器；分析天平。

1．1．2 试药 景天三七：由河北北方学院中医系鉴定。

1．1．3 菌种 铜绿假单胞菌标准菌株购自北京生物制品检定所；临床菌株来自河北北方学院第一附属医院微生物科。

1．1．4 培养基

1．1．4．1 液体培养基：Mueller－Hinton （MH）肉汤。

1．1．4．2 固体培养基：Mueller－Hinton （MH）琼脂。

1．2 方法

1．2．1 景天三七水煎剂及醇提物的制备 参照陈奇的方法［4］进行，景天三七水煎剂及醇提物均浓缩成含生药1 g·m L－1的药液，灭菌后备用。

1．2．2 菌液的制备

1．2．2．1 0．5麦氏比浊管配制 操作参考医学微生物学实验指导［5］。

1．2．2．2 菌液制备 将实验所用20株菌的培养物 （菌落）用无菌生理盐水制成菌液，浓度相当于0．5麦氏比浊，比浊液相当于5× （107～108CFU·m L－1）。

1．2．3 抑菌实验方法 稀释法：取无菌小试管5支作为一组，第一管加无菌肉汤0．4 m L其余各管加肉汤0．5 m L，再依次加药液，第一管和第二管加药液0．5 m L，从第二管开始倍比稀释。然后第二至第五支试管各加肉汤0．4 m L，同样方法制备20组试管。每组试管土三七醇提物和水煎剂的最终稀释度依次为：0．5 g·m L－1、0．25 g·m L－1、0．125 g·m L－1、0．0625 g·m L－1、0．03125 g·m L－1。实验时将20株实验菌液分别加入20组含药液培养基的试管中，每管0．1 m L菌液，同时设培养基、药液和菌液对照管。所有试管放置温箱内37℃，培养24 h后观察结果，在对照管符合要求的情况下，将各实验管的培养物接种至相应培养基的琼脂平板上，确定是否有细菌生长。37℃，24 h观察结果，以琼脂平板上完全无细菌生长的药物最高稀释度为最低抑菌浓度 （MIC）。

2 实验结果

2．1 景天三七水煎剂对20株多重耐药铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度 （MIC）见表1。

表1 景天三七水煎剂对20株多重耐药铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度 （MIC）

表2 景天三七醇提物对20株多重耐药铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度 （MIC）

2．2 景天三七醇提物对20株多重耐药铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度 （MIC）见表2。

2．3 景天三七醇提物对20株多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用MIC（g·m L－1）见表3。

表3 景天三七醇提物对20株多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用MIC（g·mL－1）

2．4 景天三七醇提物对20株多重耐药铜绿假单胞菌的累积抑菌率 （%）见表4。

表4 景天三七醇提物对20株多重耐药铜绿假单胞菌的累积抑菌率 （%）

抑菌结果显示景天三七水煎剂对20株多重耐药铜绿假单胞菌的MIC50大于0．5 g·m L－1，而醇提物的MIC50为0．125 g·m L－1，由此可见景天三七醇提物对20株多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用强于水煎剂。

3 讨 论

景天三七醇提物和水提物对20株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌有不同程度的体外抗菌作用。醇提物对铜绿假单胞菌的MIC50为0．125 g·m L－1，MIC90为0．25 g·m L－1。结果表明景天三七醇提物对多重耐药铜绿假单胞菌有较强的抑制作用。

铜绿假单胞菌是最常见的医院内感染致病菌，位居非发酵细菌感染之首。随着抗生素尤其是广谱抗生素的广泛使用，铜绿假单胞菌耐药情况越来越严重，已出现了多重耐药甚至全耐药的菌株，因此迫切需要研制出能够抑制多重耐药铜绿假单胞菌的新型制剂。本实验提示景天三七醇提物对控制铜绿假单胞菌的感染可能有一定的应用价值。

目前对于景天三七抑菌作用的报道较少，有临床报道显示景天三七有一些不良反应，最为严重的不良反应是导致的肝小静脉闭塞病［6－7］。所以，关于景天三七的更多有效抑菌成分分析和药理药效等方面的工作，有待进一步研究，为景天三七应用于临床抗菌治疗提供充足的科学依据。

［1］ 国家中医药管理局 《中华草本》编委会．中华草本，第3册 ［M］．上海：上海科学技术出版社，1999：765．

［2］ 韩敏，赵莉．景天属植物研究进展 ［J］．安徽农业科学，2005，33（11）：2129－2141．

［3］ 张彦霞，乔海霞，单永强，等．景天三七醇提物体外抗菌作用的研究．河北北方学院学报：自然科学版，2011，27（5）：78－80．

［4］ 陈奇主编．中药药理研究方法学 ［M］．北京：人民卫生出版社，1993，67－261．

［5］ 张玉妥，季建军．医学微生物学实验指导 ［M］．北京：人民卫生出版社，2004：42．

［6］ 徐海波．土三七致肝小静脉闭塞病14例临床分析 ［J］．中国乡村医药，2010，17（9）：45．

［7］ 黄焕军，刘瑶，林菊生，等．土三七致肝小静脉闭塞病诊断及治疗体会 ［J］．临床消化病杂志，2008，20（1）：28．