聚维酮碘泡腾片控制菌检查方法的探讨

徐雄利，田 力，林永丽，刘玉明，巴剑波

聚维酮碘泡腾片为1-乙烯-2-吡咯烷酮与碘的络合物制成的一种速溶型制剂，80%～90%结合碘可解聚成游离碘，抗菌谱广，杀菌力强，对多种革兰阳性菌、革兰阴性菌等有较强的抑杀作用。在制剂的微生物限度检查中，常规的方法［1］因不能完全排除供试液的抑菌作用，使所加入的阳性控制菌受到抑制而不能生长。根据其抑菌作用的强弱对供试品选择适宜的处理方法制备供试液是必要的［2］，本试验采用0.1 mol/L硫代硫酸钠中和法和淀粉吸附法排除其抑菌作用，收到了较好的效果。

1 材料与方法

1.1 实验菌种

金黄色葡萄球菌(CMCC 26003)、铜绿假单胞菌(CMCC 10104)均购自中国普通微生物保藏中心。

1.2 培养基和试剂

胆盐乳糖增菌液 、营养肉汤增菌液、甘露醇高盐琼脂、十六烷三甲基溴化胺琼脂培养基，均由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供;聚维酮碘泡腾片(自制);pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.1 mol/L硫代硫酸钠，均按药典要求配制;市售食用淀粉(经105℃，4 h干热灭菌)。

1.3 方法

1.3.1 菌液制备 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜斜面培养物，接种到5 ml营养肉汤培养基内，(35±1)℃培养20 h后，以10倍稀释成50～100 cfu/ml的菌液备用。

1.3.2 供试液制备 取含聚维酮碘1.0 g的泡腾片1片，溶于100 ml pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中备用。

1.3.3 硫代硫酸钠中和法［3］参照碘含量测定的方法，每100 ml供试液中加入过量的0.1 mol/L硫代硫酸钠7.5 ml，搅拌均匀至溶液呈无色。2瓶营养肉汤(100 ml/瓶)及2瓶胆盐乳糖增菌液(100 ml/瓶)中分别加入经中和后的供试液10 ml，其中1瓶营养肉汤中加入50～100 cfu金黄色葡萄球菌，1瓶胆盐乳糖增菌液中加入50～100 cfu铜绿假单胞菌为控制菌阳性对照组;另外2瓶不加菌作为供试品检验组。取上述2组增菌液置(35±1)℃培养24～48 h后，分别在十六烷三甲基溴化胺和甘露醇高盐琼脂平板上划线分离铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。

1.3.4 淀粉吸附法［4］取供试液100 ml，加入经干热灭菌的淀粉40 g，轻轻搅拌均匀，以1500 r/min(离心半径为6.3 cm)离心3 min，分别取10 ml上清液均匀加入到2瓶胆盐乳糖增菌液(100 ml/瓶)及2瓶营养肉汤增菌液(100 ml/瓶)中，其中1瓶胆盐乳糖增菌液及营养肉汤增菌液中分别加入50～100 cfu铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌，作为控制菌阳性对照组。另外2瓶不加菌作为供试品检验组。取上述2组增菌液置(35±1)℃培养24～48 h后，分别在十六烷三甲基溴化胺和甘露醇高盐琼脂平板上划线分离铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。

1.3.5 方法可行性验证试验［1］分别按上述2种操作方法除去供试液的抑菌活性后，取供试液10 ml及50～100 cfu试验菌分别加入2组增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。其中一组加入100 cfu金黄色葡萄球菌，另外一组加入100 cfu铜绿假单胞菌，检查2种方法金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞的检出情况;同时不加控制菌做按上述方法空白对照组。

2 结果

2.1 控制菌检查结果

试验结果表明，硫代硫酸钠中和法和淀粉吸附法均能有效祛除聚维酮碘泡腾片供试液的抑菌作用，阳性对照组均能检出相应的控制菌。见表1。

2.2 方法可行性验证试验结果

试验结果表明，经硫代硫酸钠中和法及淀粉吸附法处理的供试液，试验组控制菌检出结果为阳性，空白对照组无菌生长。见表2。

表1 2种方法检验控制菌的结果

表2 2种方法可行性验证试验结果

3 讨论

微生物污染监控是药品质量和安全性的重要指标［5］。当建立药品的微生物限度检查法时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的控制菌检查。

聚维酮碘抗菌谱广，杀菌力强，是临床上广泛使用的消毒剂。对其进行控制菌检查时，必须先祛除聚维酮碘供试液的抑菌活性，才能建立有效的控制菌检查方法。本试验硫代硫酸钠中和法是根据碘含量测定中每毫升0.1 mol/L硫代硫酸钠滴定液消耗12.69 mg碘的原理。当供试液与硫代硫酸钠作用由红棕色变无色时，供试液中的抑菌成分有效碘被完全中和。淀粉吸附法是根据碘与淀粉能够形成蓝色络合物，当供试液与淀粉作用由红棕色变为蓝色时，进行低速离心，使不溶性物质沉降于管底，取上清液作检查。方法可行性验证实验结果显示，在供试液中加入100 cfu阳性菌，供试液经上述2种方法作用后均能够检出阳性控制菌;2种方法均可排除供试品中的抑菌成分对控制菌的抑杀作用，说明2种方法均可行。其中淀粉吸附法，淀粉吸附碘的能力较强，但产生的不溶性沉淀物体积较大，吸取上清液时需小心操作。硫代硫酸钠中和法中，加入硫代硫酸钠不仅可以完全排除抑菌成分，而且操作更简便易行。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京:医药科技出版社，2010:107-116.

［2］吴晓敏，王燕燕.8种医院制剂微生物限度检查方法验证［J］.中国医院药学杂志，2007，27(1):97-99.

［3］饶耀刚，朱玲，阿有梅，等.聚维酮碘泡腾片杀菌效果测定［J］.郑州大学学报:医学版，2003，38(2):264-266.

［4］王立华，杨谊，马靖，等.含碘药物控制菌检查方法的探讨［J］.中国药事，2000，14(5):310-311.

［5］曹晓云，郭艳娟.药品微生物限度检查方法学验证试验及相关的技术问题［J］.天津药学，2006，18(6):49-51.

(本文编辑:彭润松)