桃金娘茎枝中没食子酸的分离鉴定及含量测定

黄景健陈海燕骆夏王钦东陈凌波黄敏琪

（1广西昌弘制药有限公司，广西 南宁，530221；2广西卫生职业技术学院，530023）

桃金娘茎枝中没食子酸的分离鉴定及含量测定

黄景健1陈海燕2骆夏1王钦东1陈凌波1黄敏琪2

（1广西昌弘制药有限公司，广西 南宁，530221；2广西卫生职业技术学院，530023）

目的：对桃金娘茎枝中的没食子酸进行提取分离鉴定并测定含量。方法：采用80%乙醇对桃金娘茎枝进行提取，利用柱层析和重结晶对提取液进行分离，通过理化性质鉴别和波谱技术鉴定其结构；采用高效液相色谱法测定桃金娘茎枝中没食子酸含量，色谱柱：Lichrospher C18，流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（1.5∶98.5），流速1.0m L/min，检测波长为270 nm，柱温为室温，进样量为10μL。结果：没食子酸在0.1~0.6μg范围内呈良好线性关系（r=0.999 2），平均回收率为100.6%，RSD为1.32%（n=6）。结论：该方法简便可行，重现性好，可用于桃金娘茎枝中没食子酸含量测定。

桃金娘；没食子酸；分离；鉴定；含量测定

桃金娘（Rhodomyrtu stomentosa（Ait.）Hassk.），是桃金娘科桃金娘属植物，别名山稔、山菍、岗稔、当梨、稔子、豆稔，广泛分布于我国东南部、南部及西南部，南亚、东南亚以及日本等地也有分布[1]。其叶能利湿止泻，生肌止血[2]；果实能健脾胃、补血虚、止血痢[3]；桃金娘油具有抗炎作用[4]。桃金娘茎枝理气止痛，利湿止泻，去瘀止血，益肾养血，主治消化不良，劳伤出血，风湿痹痛，血虚体弱等[2]。文献报道含黄酮苷[5]、花色苷[6-8]等黄酮类成分以及植物多糖成分和没食子酸等化合物[9]。目前关于桃金娘茎枝药材的质量控制方法，文献报道甚少，为有效地开发和利用桃金娘茎枝药材，更好地控制桃金娘茎枝药材及含有桃金娘茎枝制剂的质量，对桃金娘茎枝药材的质量控制方法进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

PG328A万分之一分析天平；KQ5200B型超声清洗器；Waters高效液相色谱仪515泵+2487双波长紫外吸收检测器；Agilent Syr.LC 25μL FN微量进样器；威玛龙色谱工作站。

1.2 试药

桃金娘茎枝药材采集自广西，且经广西中医药研究院中药研究所鉴定为Rhodomyrtus tomentos a.，没食子酸对照品（批号110831-200302，原中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。对照药材，由广西中医药研究院中药研究所提供。流动相中的水为超纯水，甲醇为色谱纯。其他试剂均为分析纯。

2 分离与鉴定

2.1 分离提取

桃金娘茎枝药材粗粉6 Kg，80%乙醇回流提取4次，每次2 h，滤液合并，回收乙醇，浓缩蒸干，干膏用乙酸乙酯回流提取7次，每次2 h，滤过，滤液合并，回收溶剂，蒸干，得乙酸乙酯提取物，将提取物进行硅胶柱层析分离，采用石油醚-乙酸乙酯（100∶0→60∶40）混合溶液，梯度洗脱，在石油醚-乙酸乙酯（7∶3）洗脱的第425流分中，析出结晶，经石油醚-乙酸乙酯混合溶液重结晶，得到经薄层色谱（TLC）检查为单一斑点的成分。

2.2 结构鉴定

白色结晶，熔点（mp）238~240℃，溶于水、甲醇、乙醇， UV（乙醇）nm：215、270； IR（KBr） cm-1：3 495、3 280、3 060、2 655、1 649、1 614、1 545、1 452、1 325、1 220、866；1H·NMR ppm：7.18（2H，s）；MS（EI）m/z：170（M+，100）、153、135、125、113、107、96、79、51、45、39。 与 没 食 子 酸 对 照 品 进 行TLC对照，比移值（Rf值）一致。经理化性质鉴别和光谱数据鉴定，与文献[10]相符，确定该化合物为没食子酸。

3 薄层色谱定性分析

取干燥桃金娘茎枝药材粉碎，称取2 g，加水煮1 h，趁热滤过，滤液用浓盐酸调pH值至2，用乙醚萃取2次，每次30m L，取乙醚层，挥干，残渣加乙酸乙酯1m L使溶解，作为供试品溶液。另取桃金娘对照药材同法制成对照药材溶液。再取没食子酸对照品，加甲醇制成每1 m L含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2005年版（一部）薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述各种溶液各1~2μL，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）为展开剂，展开，取出晾干，喷以5%FeCl3溶液。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，Rf=0.44，见图1。经多批样品试验，薄层色谱的重现性好，可作为桃金娘茎枝的定性鉴别方法。

图1 TLC图

4 定量分析

4.1 色谱条件

色谱柱：Lichrospher C18，流动相：甲醇 -0.2%磷酸水溶液（1.5∶98.5），流速 1.0m L/m in，检测波长为270 nm，柱温为室温，进样量为10μL；理论塔板数按没食子酸计算不低不于3 000。色谱图见图2、3。

4.2 对照品溶液的制备

精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成30μg/m L的对照品溶液。

图2 没食子酸对照品HPLC图

图3 桃金娘茎枝药材供试品HPLC图

4.3 供试品溶液的制备

取桃金娘茎枝药材粉末精密称定0.50 g，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 30 m L，摇匀，称定重量，超声1 h，放冷加50%甲醇补重，滤过，取续滤液用0.45μm有机相微孔滤膜滤过，即得。

4.4 线性关系的考察

精密称取没食子酸对照品25 mg，置25 m L量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得1mg/m L标准品溶液，精密吸取 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6m L至10 m L量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，进行测定。以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，得回归方程为 Y=63 287 X+17 776（n=6），r=0.999 2。表明，对照品在0.1~0.6μg范围呈良好线性关系。

4.5 精密度试验

取对照品溶液，连续重复进样6次。结果显示，没食子酸峰面积平均值为1 943 222，RSD=0.36%。

取供试品溶液，连续重复进样6次。结果显示，没食子酸峰面积平均值为1 346 718，RSD=0.33%。

4.6 稳定性试验

取同一供试品，每隔2 h进样，进行了10 h考察，结果没食子酸含量的RSD=1.85%。

4.7 重复性试验

精密称取同一批次桃金娘茎枝药材粉末样品各6份，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积并计算，结果没食子酸的平均含量为1.233 5mg/g，RSD=0.95%。

4.8 加样回收率试验

称取已测知含量的药材样品（没食子酸平均含量为1.233 5mg/g）0.25 g，共6份，精密称定。精密加入1.0mg/m L的没食子酸对照品溶液0.31m L，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积并计算，结果没食子酸的加样平均回收率为100.6%，RSD=1.32%。

4.9 样品含量测定

收集不同产地的桃金娘茎枝药材，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件依法测定没食子酸含量，结果见表1。

表1 桃金娘茎枝药材样品中没食子酸含量测定结果（n=3）

5 结论

桃金娘药用用途及保健功能广，特别是新发现对高血压特别是肾性高血压有确切的疗效[11-12]，引起医药科技工作者的高度重视。通过对主要化学成分没食子酸提取分离、分析与质量控制方法研究，为桃金娘茎枝质量标准及含桃金娘茎枝制剂质量标准提供科学依据。

[1]侯宽昭.广州植物志[M].北京：科技出版社，1956：200-201.

[2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（第15卷）[M].上海：上海科学技术技术社，1999：645.

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[4]楼启正.气红联用法研究标准桃金娘油的化学成分[J].光谱学与光谱分析，2007，27（5）：924-927.

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Isolation，Identification and Content Determination of Gallic Acid in Stem and Branch of Rhodomyrtus Tomentosa（Ait.）Hassk.

Huang Jingjian1，Chen Haiyan2， Luo Xia1，Wang Qindong1，Chen Lingbo1， Huang M inqi2（1 Guangxi Changhong Pharmaceutical Co.，Ltd.， GuangxiNanning 530221， China；2 Guangxi Health Vocational College， 530023）

Objective:To isolate and determine gallic acid in stem and branch ofRhodomyrtus tomentosa（Ait.）Hassk..M ethods:Gallic acid was extracted by 80%ethanol， isolated and purified by column chromatography， and recrystallized from the stem and branch ofRhodomyrtus to mentosa（Ait.） Hassk..A HPLC method was set up to determine the content of gallic acid inRhodomyrtus tomentosa（Ait.）Hassk.， using Lichrospher C18（4.6mm× 250mm，5μm）column， and methanol-0.2%-phosphoric acid water solution(1.5∶98.5)as themobile phase， the UV detection wavelength was at 270 nm，with the flow rate of 1.0 mL/min at room temperature.Results:A good linear was obtained in the range of 0.1~0.6μg and the average recovery was 100.6%（RSD=1.32%，n=6）.Conclusion:Themethod is simple with a good reproducibility for the determ ination of gallic acid inRhodomyrtus tomentosa（Ait.）Hassk..

Rhodomyrtus tomentosa（Ait.）Hassk.；Gallic Acid；Isolation；Identification；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2012.08.004

广西自然科学基金项目（桂科自0640077）

黄景健，男，高级工程师。研究方向：中药心脑血管新药。E-mail：huangshan831@sohu.com陈海燕，女，讲师。研究方向：中药活性成分及制剂。通讯作者E-mail：chy1371@163.com

2011-12-31）