肾细胞癌中RECK和MMP-9蛋白表达的相关性

傅全胜 苏泽轩 梁蔚波 卓育敏 徐谊朝 李 红 康举龄

(暨南大学第一附属医院泌尿外科，广东 广州 510632)

肾细胞癌中RECK和MMP-9蛋白表达的相关性

傅全胜 苏泽轩 梁蔚波 卓育敏 徐谊朝 李 红 康举龄

(暨南大学第一附属医院泌尿外科，广东 广州 510632)

目的观察RECK和MMP-9蛋白在肾细胞癌组织中的表达，探讨两者在肾细胞癌侵袭和转移中的关系。方法采用免疫组化SP法检测57例肾细胞癌手术切除标本中RECK、MMP-9蛋白表达情况。结果RECK在肾细胞癌组织中的阳性表达率为47.4%，明显低于癌旁正常组织(P＜0.01);而MMP-9在肾细胞癌组织中的阳性表达率为80.7%，明显高于癌旁正常组织(P＜0.01)。RECK和MMP-9蛋白表达与肿瘤的组织学分级、临床病理分期和淋巴结转移密切相关。两者表达水平呈负相关(r=－0.614，P＜0.05)。结论RECK和MMP-9蛋白表达与肾细胞癌的侵袭和转移密切相关，可作为评价肾细胞癌预后的生物学指标。

肾细胞癌;RECK;MMP-9;侵袭;转移

近年研究发现新的肿瘤抑制基因 RECK可在转录后水平抑制多种与肿瘤侵袭及转移相关的基质金属蛋白酶(MMPs)的表达，并且其高表达可抑制肿瘤新生血管的形成，从而抑制肿瘤的侵袭和转移〔1〕。RECK基因与肿瘤转移的研究成为当今肿瘤转移相关研究的热点。但仍缺乏与肾细胞癌侵袭和转移相关的临床研究。因此，本研究旨在探讨RECK、MMP-9蛋白表达与肾细胞癌侵袭、转移之间的相互关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料 选取2005年1月至2010年7月我院泌尿外科所行肾癌根治性切除病例，经病理检查确诊为肾细胞癌，收集其石蜡标本包括肾细胞癌组织及相应癌旁正常肾组织(距离肿瘤2 cm以上)共57例。所选病例临床资料和病理资料均完整，术前均未进行化疗、放疗及生物治疗。其中男35例，女22例，平均年龄57(45～79)岁。按WHO最新组织学分型标准分为肾透明细胞癌37例，乳头状肾细胞癌9例，嫌色细胞癌4例，未分类肾细胞癌7例;按组织学分级标准分为高分化31例，中分化9例，低分化或未分化17例。采用2002年AJCC的临床分期(cTNM):Ⅰ期10例，Ⅱ期21例，Ⅲ期15例，Ⅳ期11例。无转移者44例，有转移者13例。

1.2 方法 采用免疫组化SP法检测肾细胞癌组织、相应癌旁肾组织及正常肾组织中 RECK、MMP-9蛋白的表达水平。RECK、MMP-9单克隆抗体稀释，稀释倍数分别为1∶100和1∶50，DAB显色，苏木素复染。操作严格按试剂盒流程进行。以0.01 mol/L PBS液(pH7.4)代替一抗作阴性对照，用已知RECK、MMP-9阳性的乳腺癌组织切片作为阳性对照。

1.3 结果判断 RECK与MMP-9蛋白阳性细胞均表现为在细胞膜或胞质内出现棕黄色颗粒样物质。每例切片随机在玻片的四角与中央取5个高倍(200倍)视野进行观察，按以下标准进行染色强弱判定RECK与MMP-9蛋白表达水平:①按切片中细胞着色深浅评分:细胞无显色0分;浅黄色1分;棕黄色2分;棕褐色3分。②按阳性细胞数占同类细胞数的百分比:＜30%为1分;30% ～70%为2分;＞70%为3分。取①，②两项评分的乘积作为总积分，0～1分为阴性(－);2～3分为弱阳性(+);≥4分为阳性(■)。

1.4 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件进行分析，组间比较采用χ2检验。相关性分析用Spearman等级相关检验。

2 结果

2.1 肾细胞癌组织中RECK蛋白的表达及其与临床生物学行为的关系 RECK蛋白阳性表达在肿瘤细胞的胞质中呈浅黄色(图1)。肾细胞癌组织中RECK蛋白的阳性表达率明显低于相应癌旁正常肾组织(P＜0.01)。RECK表达水平与患者的年龄、性别无关(P＞0.05)，但与肾细胞癌的组织学分级、临床病理分期的进展和淋巴结转移有密切关系(均P＜0.05)(表1)。

2.2 肾细胞癌组织中MMP-9蛋白的表达及其与临床生物学行为的关系 MMP-9蛋白阳性表达在肿瘤细胞的胞质中呈深黄色(图1)。肾细胞癌组织中MMP-9蛋白的阳性表达率明显高于相应癌旁正常肾组织(P＜0.01)。MMP-9表达水平与患者的年龄、性别无关(P＞0.05);其表达水平随肾细胞癌的组织学分级和临床病理分期的进展而逐渐升高(均P＜0.05);有淋巴结转移的患者MMP-9蛋白阳性表达率明显高于无淋巴结转移者(P＜0.05)(表1)。

2.3 肾细胞癌组织中RECK、MMP-9蛋白表达的相关性分析RECK蛋白的表达水平与MMP-9蛋白表达水平呈负相关

(r= －0.614，P ＜0.05)。

表1 RECK和MMP-9蛋白阳性表达与肾细胞癌临床生物学行为的关系〔n(%)〕

图1 RECK、MM P-9在肾细胞癌组织中的阳性表达(×200)

3 讨论

RECK为编码971个氨基酸的膜锚定糖蛋白，在人体内多种正常组织细胞中均有较高水平的表达，而在各种肿瘤来源的细胞系及转染了Ras等癌基因的细胞中不表达。RECK具有独特的抑制MMPs表达与活性的功能，与许多癌基因信号及细胞外基质重建密切相关，可以通过抑制MMPs活性和肿瘤血管新生两方面影响肿瘤的侵袭、转移，进而影响患者预后〔2〕。国外研究发现在非小细胞肺癌、胰腺癌、胃癌和乳腺癌等侵袭性较强的肿瘤中RECK基因在蛋白、mRNA水平的表达明显下降，甚至无表达，与这些肿瘤的预后密切相关，肿瘤组织中RECK表达阳性的患者预后好于表达阴性的患者，提高RECK的表达可抑制肿瘤细胞的侵袭转移〔3〕。

本研究表明RECK基因的表达缺失在肾细胞癌的发展过程中可能起着重要作用，RECK低表达的肿瘤具有较强的侵袭转移能力。这与Takemoto等〔4〕报道的一致。提示RECK基因的表达与肾细胞癌的预后相关。从临床角度证实RECK蛋白是抑制肿瘤细胞侵袭转移的重要调控蛋白，其低水平的表达趋向利于肿瘤细胞的转移。

恶性肿瘤侵袭和转移涉及肿瘤细胞穿破细胞外基质(ECM)屏障、血管壁基膜及进入宿主微环境等复杂病理过程。MMP-9不仅使肿瘤细胞通过缺损基底膜向周围组织浸润，有促进肿瘤侵袭作用;还通过影响肿瘤新生血管生成，而与肿瘤转移密切相关，从多方面影响肿瘤的生物学行为。

MMP-9在淋巴转移的患者活性增高、表达过度，免疫组化表现为阳性增强，并且与肾细胞癌的侵袭性、转移特性呈正相关〔5〕。本研究提示可能由于肾细胞癌组织中RECK的表达水平降低，减弱了对MMP-9表达的抑制作用，从而使RECK蛋白低表达的癌细胞具有较强的侵袭和转移能力。这与国外有关结直肠癌和前列腺癌的研究结果相一致〔6〕。故可以通过对RECK和MMP-9蛋白的共同检测，来预测肾细胞癌的恶性潜能及作为预后的评价指标。

1 Joaquim Bellmunt.Current treatment in advanced renal cell carcinoma(RCC):impactof targeted therapies in themanagement of RCC〔J〕.Eur Urol Suppl，2007;6(7):484-91.

2 Clark JC，Thomas DM，Chong PF，et al.RECK-a newly discovered inhibitor ofmetastasis with prognostic significance in multiple forms of cancer〔J〕.Cancer Metastasis Rev，2007;26(3-4):675-83.

3 Song SY，Son HJ，Nam E，et al.Expression of reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazalmotifs(RECK)as a prognostic indicator in gastric cancer〔J〕.Eur JCancer，2006;42(1):101-8.

4 Takemoto N，Tada M，Hida Y，et al.Low expression of reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazalmotifs(RECK)indicates a shorter survival after resection in patientswith adenocarcinoma of the lung〔J〕.Lung Cancer，2007;58(3):376-83.

5 林 浩，吴碧莲，郑清水.MMP-9在肾细胞癌组织中的表达与临床病理因素相关性研究〔J〕.医学理论与实践，2010;23(3):260-1.

6 Rabien A，Burkhardt M，Jung M，et al.Decreased RECK expression indicating proteolytic imbalance in prostate cancer is associated with higher tumor aggressiveness and risk of prostate-specific antigen relapse after radical prostatectomy〔J〕.Eur Urol，2007;51(5):1259-66.

R737.11

A

1005-9202(2012)12-2480-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.015

广东省医学科学技术研究基金(WSTJJ 20081117440102196901074030)

傅全胜(1969-)，男，主治医师，在职医学博士，主要从事泌尿系肿瘤的诊断及微创治疗研究。

〔2012-01-09收稿 2012-02-10修回〕

(编辑 曹梦园)