福多司坦片健康人体药动学研究

周 佳，李 珍＊，杨武云，唐世新，闻 俊，范国荣，胡晋红＊

（1.第二军医大学长海医院药学部，上海200433；2.第二军医大学药学院药物分析学教研室，上海200433）

福多司坦是一种新型祛痰药，为L－半胱氨酸衍生物，具有抑制炎症、修复黏膜、促进气管分泌的作用［1］。临床广泛用于呼吸道疾病的祛痰治疗［2］。基于福多司坦广泛的临床应用，对其药动学特点的了解很有必要。本研究应用建立的LC－MS／MS法测定血浆中福多司坦药物浓度，考察单次口服给药后，福多司坦在健康志愿者体内的药动学特征，为临床应用确定给药剂量和给药方案提供依据。

1 材料和方法

1.1 仪器和试药 VARIAN 1200L液相色谱－质谱联用仪，包括ProStar 210高压泵，ProStar 410自动进样器，1200L Quadrupole MS／MS仪，MS 6.3工作站（美国瓦里安公司）。XW－80A涡旋混合器（上海医科大学仪器厂），TGL－16G台式高速离心机和80－2B台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。Millipore Simplicity 185超纯水系统（美国Millipore公司）。福多司坦对照品（批号030801，含量99.15%）由上海医药（集团）有限公司信谊制药总厂提供。试验药物福多司坦片［由无锡药明康德新药开发有限公司和上海医药（集团）有限公司信谊制药总厂联合研制，规格：200mg／片，批号：030901C］，经检验合格，符合临床研究用药质量要求。甲醇（色谱纯，美国Merck公司），水为去离子水。

1.2 受试者选择 10例男性健康志愿者，年龄20～24岁，体重55～75kg，身高166～181cm。无心、肝、肾、消化道和血液系统等疾病史，且精神状态良好。经体检，血常规、尿常规、血生化、凝血酶原时间、粪常规（包括潜血）、心电图、胸片检查等合格。试验方案经第二军医大学长海医院伦理委员会审批同意，所有健康志愿者明了本试验的目的与要求，并自愿签署知情同意书。

1.3 试验方案 受试者于给药前1d入选并入住试验病房，给药前1d晚餐后开始禁食，给药当天早上7：00空腹口服400mg福多司坦片，用200ml温开水送服。服药2h后可以饮水，服药4h后进食统一低脂餐。于给药前及给药后的0.083、0.167、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、10、12h于肘静脉取血4ml，肝素抗凝，置一次性塑料离心管中，9×102× g离心10min，分取血浆1ml于－20℃冰箱保存至测定。血样采集及临床观察均在Ⅰ期病房中进行，由临床经验丰富的医师进行监护。试验期间受试者禁用含柑橘、柠檬类、葡萄柚汁类、咖啡因、乙醇或黄嘌呤等的饮料，避免剧烈运动及长时间卧床。

1.4 血药浓度测定

1.4.1 色谱分离条件 色谱柱：Diamonsil C18柱（200mm× 4.6mm，5μm，美国迪马公司）；柱温30℃；流动相：甲醇－水（50∶50），采用等梯度洗脱方式；流速0.6ml／min；分流比3∶1；进样量20μl；分析时间6min。

1.4.2 质谱检测条件 采用ESI离子源、负离子检测，选择SRM工作方式进行一／二级质谱分析。质谱检测工作参数如下：福多司坦Q1（m／z）178、Q3（m／z）91；扫描时间1.0s，SIM宽0.7，Q1峰宽1.5；分析针4 500V、12μA；阀门压力600V、55psi；干燥气体380℃、21psi；毛细管35V，Q0 0.7V，L4 1.0V，Q1 1.0V；Q2碰撞能量12.0V，碰撞气体0.24Pa；负离子检测1 300V。在上述LC－MS／MS条件下测得福多司坦一／二级质谱及空白血浆、空白血浆添加对照品、实测血浆样品的典型谱图，见图1。

图1 血浆中福多司坦的LC－MS／MS谱图

1.4.3 血样预处理 静脉血样置于5.0ml塑料离心管中（肝素抗凝），9×102×g离心10min，分离血浆。取血浆100μl置于1.5ml塑料Eppendorf离心管中，加入300μl甲醇，涡旋振荡1min，于1.1×104×g高速离心10min。分取上清液250μl置于0.5ml塑料Eppendorf离心管中，于1.1×104×g二次离心4min。吸取上清液150μl，自动进样20μl进行LC－MS／MS分析。

1.4.4 标准曲线的制备 精密称取福多司坦对照品10.10mg，置于10.0ml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得1 010.0μg／ml的对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液适量，用去离子水分别稀释定容至3个10.0ml量瓶中，配成浓度为101.00、10.10和1.01μg／ml的对照品溶液。从福多司坦对照品溶液中精密吸取相当于1.01、2.02、5.05、10.10、20.20、50.50、101.00μg福多司坦溶液置于7个10.0ml量瓶中，加入空白血浆稀释定容，配制成含福多司坦0.101、0.202、0.505、1.01、2.02、5.05、10.10μg／ml的标准血浆样品。按1.4.3项步骤操作，并进行LC－MS／MS分析。以福多司坦对照品的峰面积（A）对相应的浓度（c）进行线性回归，得福多司坦血浆标准曲线方程为：A＝6.134 c－0.505 3， r＝0.999 7（n＝5），线性范围0.101～10.10μg／ml。本法测定血浆中福多司坦的最低定量浓度为0.101μg／ml（S／N＞3）。1.4.5 回收率和精密度考察 （1）回收率实验 配制0.202、1.01、5.05μg／ml低、中、高3种不同浓度的福多司坦标准血浆样品，按1.4.3项下步骤操作，将血浆样品中福多司坦色谱峰面积代入血浆标准曲线，通过测得量与加入量的比值求得相对回收率。（2）精密度实验 取上述3种浓度的福多司坦血浆样品测定峰面积，每日制备随行标准曲线，从当日标准曲线上求算血浆样品的浓度，连续测定5d，再计算方法的日内和日间RSD，结果见表1。

表1 福多司坦的回收率与精密度实验结果（n＝6）

2 结 果

2.1 血药浓度－时间曲线 10名健康志愿者单剂量口服400mg福多司坦片后，福多司坦血药浓度－时间曲线见图2。

图2 单剂量口服400mg福多司坦片后平均血药浓度－时间曲线n＝10

2.2 药动学参数 采用非房室模型（统计矩）法计算药动学参数，cmax和tmax采用实测值，梯型面积法计算药－时曲线下面积。10名健康志愿者单剂量口服400mg福多司坦片后体内福多司坦药－时曲线的末端相消除半衰期（t1／2）、平均驻留时间（MRT）、峰浓度（cmax）、达峰时间（tmax）、AUC0～12、AUC0～∞分别为（3.88±0.65）h、（4.50±0.75）h、（6.96±3.78）μg／ml、（0.4±0.2）h、（14.23± 4.99）μg·h·ml－1、（15.51±5.23）μg·h·ml－1。

3 讨 论

本研究采用甲醇沉淀蛋白质法预处理血浆样品，应用建立的LC－MS／MS法测定福多司坦在健康受试者体内血药浓度。通过测定单剂量口服福多司坦400mg后不同时间的血药浓度，对福多司坦在人体内的药动学规律进行了研究。研究结果显示，福多司坦在健康人体内主要药动学参数与文献报道［3，4］基本一致。通过本研究发现，福多司坦片口服给药后，约0.5h血浆中药物浓度即达峰值，3～4h后血药浓度即可下降50%。其口服吸收迅速、良好，临床用药起效快，半衰期较短，体内排泄较快。

［1］ 陈 光.福多司坦的药理及临床试验［J］.泰州职业技术学院学报，2009，9（6）：35－38.

Chen Guang.Pharmacology and clinical trial of fudosteine［J］.J Taizhou Polytech Coll，2009，9（6）：35－38.In Chinese with English abstract.

［2］ 张华峰，王健康，戴 博，等.高效液相色谱－串联质谱法测定人血浆中福多司坦的浓度［J］.解放军药学学报，2010，26（2）：156－157，164.

Zhang HuaFeng，Wang JianKang，Dai Bo，et al.Determination of fudosteine in human plasma by high performance liquid chromatography－tandem mass spectrometry［J］.Pharm J Chin PLA，2010，26（2）：156－157，164.In Chinese with English abstract.

［3］ 张 红，胡 敏，熊玉卿，等.液质联用测定血中福多司坦浓度及其人体药动学［J］.中国医院药学杂志，2008，28（16）：1370－1373.

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［4］ 卢 姗，刘 伟，李晓红，等.人血浆中福多司坦的LC－MS／MS法测定［J］.中国医药工业杂志，2009，40（5）：365－367.

Lu Shan，Liu Wei，Li XiaoHong，et al.Determination of fudosteine in human plasma by LC－MS／MS［J］.Chin J Pharmaceuticals，2009，40（5）：365－367.In Chinese with English abstract.