小柴胡汤滴丸质量标准研究

刘琳娜，戚志华，郭志伟，张 琰，张海凤，张文娟

小柴胡汤由柴胡、黄芩、党参、甘草(炙)、生姜、大枣和半夏7味药材组成，具有疏肝利胆、通利三焦水道的作用，用于治疗慢性肝炎、肝硬化伴腹水［1］。为提高小柴胡汤的生物利用度，加快药物溶出速率，笔者经过精制、富集其有效成分，将其制成滴丸剂［2］，为有效控制该制剂的质量，本实验选取组方中的黄芩和柴胡以薄层色谱检查作为定性指标，选取黄芩中的黄芩苷作为定量指标，应用HPLC法测定其含量。

1 仪器与材料

日本岛津高效液相色谱仪(LC-10ATvp泵，SPD-Avp紫外检测器，Class-10 Avp色谱工作站); BP211D型电子天平(1/10万，北京赛多利斯科学仪器有限公司);密理博Millipore高纯水机(美国密理博公司)。

小柴胡汤滴丸(自制);黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用);薄层色谱用硅胶G(青岛海洋化工厂产品);甲醇为色谱纯(fisher公司)，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 柴胡 ①供试品溶液的制备:取本品约3 g，于研钵中研细，加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解;②对照药材溶液的制备:取柴胡对照药材约0.5 g，加甲醇20 mL，自“加热回流1 h”起制备对照药材溶液;③缺柴胡阴性对照溶液的制备:取缺柴胡阴性样品约3 g，制备方法同①。按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B［3］进行实验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开剂为乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)，展距约8 cm，展开后取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置365 nm紫外光灯下检视。供试品与对照药材色谱相应的位置上均显示相同的蓝色荧光斑点，阴性对照无斑点。见图1。

2.1.2 黄芩 ①供试品溶液的制备:取本品约3 g，于研钵中研细，加丙酮 30 mL，加热回流40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1 mL使溶解;②对照药材溶液的制备:取黄芩对照药材0.5 g，同①制备对照品溶液;③缺黄芩阴性对照溶液的制备:另称取与供试品处方相同比例，但无黄芩的处方药味的阴性对照样品3 g，按供试品溶液制备的方法制成对照药材溶液，按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B［3］进行实验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开剂为乙酸丁酯-甲酸-水(70∶25∶25)，展距约8 cm，展开后取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇液，日光灯下检视，供试品和黄芩对照药材在相应位置上显颜色相同的斑点，阴性对照无斑点。见图2。

图1 柴胡的TLC图注:从左到右依次为供试品(第1批)，供试品(第2批)，供试品(第3批)，柴胡对照药材，缺柴胡阴性对照

图2 黄芩的TLC图注:1.供试品(第1批);2.供试品(第2批);3.供试品(第3批); 4.黄芩对照药材;5.缺黄芩阴性对照

2.2 黄芩苷含量测定

2.2.1 色谱条件 采用日本岛津高效液相色谱仪(LC-10ATvp泵，SPD-Avp紫外检测器，Class-10 Avp色谱工作站)建立小柴胡汤滴丸中主要成分黄芩苷的 HPLC检测条件:Hypemil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(45∶55)［3］，检测波长为280 nm，流速1.0 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL，理论塔板数按黄芩苷计不应低于3 000。黄芩苷的色谱图见图3。

2.2.2 对照品溶液的配制 精密称取在60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品20 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取上述溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 mL，分别置20 mL量瓶中，配成各个浓度的黄芩苷对照品溶液，备用。

2.2.3 供试品溶液的配制 取小柴胡汤滴丸80粒，精密称定，于研钵中研细，精密称定0.5 g，放入具塞锥形瓶中，加70%乙醇50 mL，超声处理30 min，过滤，取滤液0.45 μm滤膜过滤，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 取不含黄芩、其他成分不变的滴丸80粒，按“2.2.3”项下制备，即得。

2.2.5 标准曲线 取“2.2.2”项下各浓度的黄芩苷对照品溶液10 μL进样进行测定，以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，得其回归方程为Y=1 124 508 X-5 549.66(r=0.999 7)。结果表明，黄芩苷在0.1～1.2 μg内，进样量与峰面积具有良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液2 μL，连续进样6次，测定色谱峰面积，计算RSD值。结果黄芩苷峰面积的RSD为0.89%，表明仪器的精密度良好。

图3 小柴胡汤滴丸中主要成分黄芩苷的HPLC图注:A.对照品，B.样品，C.阴性;1.黄芩苷

2.2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、8、10、12 h进样2 μL，共6次，测定色谱峰面积，计算RSD值。结果黄芩苷峰面积的RSD为1.08%，表明样品溶液在12 h内稳定。

2.2.8 加样回收率试验 精密称取同批次已知含量的滴丸样品6份，于研钵中研细，按照“表1”中所示量分别精密加入黄芩苷，按“2.2.3”项下制备，进样量2 μL，按照“2.2.4”项下色谱条件测定，计算黄芩苷的平均回收率及RSD值，结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收率试验(n=6)

2.2.9 样品含量测定 按照“2.2.1”项下所示的样品溶液制备方法，制备3批次小柴胡汤滴丸样品溶液，平行测定其中黄芩苷的含量。结果:批号分别为20100513、20100519和20100529的小柴胡汤滴丸样品中的黄芩苷含量分别为26.3、26.8、27.2 mg/g，RSD分别为1.08%、0.97%、0.90%。

3 讨论

本制剂为中药复方制剂，由多味药材提取制成，本实验分别从定性和定量两个方面对制剂质量进行控制，采用薄层色谱法对方中黄芩和柴胡进行了定性鉴别，同时进行了阴性对照试验，该方法简便且具有较强的专属性;采用HPLC对方中黄芩的黄芩苷进行了定量测定，结果准确，重复性良好，能够良好地控制制剂的质量。

考虑到本制剂组方药材较多，故采取了超声和回流两种方法对黄芩中黄芩苷的提取率进行了比较，结果表明，两种方法对黄芩苷的提取率相差无几，但超声提取方法操作相对简便，故在样品处理方法上确定为超声提取30 min。

小柴胡汤滴丸为复方制剂，成分复杂，干扰较大，本实验建立了处方中柴胡与黄芩两味中药的TLC鉴别，便于该制剂的快速质量控制;HPLC测定小柴胡汤滴丸的有效成分黄芩苷的含量为26.8 mg/g，考虑到生产过程中的损失，故确定本制剂中黄芩苷含量应不低于23.0 mg/g。

［1］ 柴瑞霞.《伤寒论》小柴胡汤证治研究［J］.中医药通报，2010，9(1):8.

［2］ 刘琳娜，张琰，徐媛，等.正交试验法优选小柴胡汤滴丸制备工艺［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17(9):44.

［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录ⅥB.