胃痛消痞方对肝郁脾虚型FD大鼠胃泌素和生长抑素的影响

包海兰，梁靓靓，陈苏宁

功能性消化不良(Functional dyspepsia，FD)是一种常见的功能性胃肠疾病，其发病机制复杂，目前尚未完全明确［1］，以往研究表明，本病与胃肠运动障碍、内脏敏感性增高、胃肠激素和神经递质变化、自主神经功能失调、精神社会心理因素、幽门螺杆菌(HP)感染、胃酸、性激素、遗传基因等诸多因素相关［2－3］。其中，“胃肠运动障碍”和“胃肠激素和神经递质的改变”在发病过程中起重要作用。目前发现的胃肠激素有40余种，其中胃泌素(GAS)及生长抑素(SS)一直是研究热点。本实验研究胃痛消痞方对实验大鼠血清及胃肠组织中GAS及SS含量的影响。

1 材料和方法

1.1 材料 选择健康♂SPF级Wistar大鼠40只，12周，体质量180～220 g，由中国医科大学实验动物中心提供，动物使用许可证号SYSK(辽)2003－0019。大鼠GAS及SS(ELISA法)试剂盒购自美国R＆D公司;兔抗鼠GAS及SS购自北京博奥森生物技术有限公司;免疫组化染色试剂盒购自北京中杉金桥有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分组及造模 采用随机数字表法随机分为4组，即正常对照组、模型组、胃痛消痞方(中药)组，西沙必利(西药)组，每组10只。除正常对照组外，其余3组均采用改良夹尾刺激法制造FD肝郁脾虚模型，即每日用长海绵镊子钳夹大鼠尾巴末端1/3处，以令其尖叫挣扎但不破皮为度(如有抓伤破皮，则用0.5%碘伏消毒受伤部位，以防感染)，使其暴怒并与其他大鼠撕打，每次持续30 min，2次/d，连续刺激3周。造模期间，各组大鼠自由进食及饮水。大鼠出现躁动等紧张、焦虑反应，且进食量明显减少，即为造模成功。

1.2.2 药物制备及给药 造模成功后，胃痛消痞方(柴胡、白芍、延胡索、炒枳实、炒砂仁、炒麦芽、焦山楂、炒鸡内金、党参、炙甘草、炒白术等中药组成)，由中国医科大学附属盛京医院药局提供，每1 mL合剂相当于原药材1.125 g;西沙必利，上海沪源医药有限公司产品，5 mg/片，临用时加蒸馏水制成混悬液，每 1 mL混悬液含西沙必利0.25 mg。给药剂量依据人和鼠给药剂量换算公式dB=dARB/RA(WA/WB)1/3进行计算，中药组给予胃痛消痞方9 g/kg，西药组给予西沙必利2 mg/kg，模型组及正常对照组给予灌服等量蒸馏水，1次/d灌胃，持续3周。

1.2.3 取材 在给药第21天，禁食不禁水12 h，麻醉处死全部大鼠，心脏取血，约3 mL/只，静置，4℃离心(3 500 r/min，20 min)，收集上清，置于－20℃冻存待测，用于 ELISA法检测血清中GAS、SS的含量;每只大鼠取胃窦及十二指肠部组织约100 mg，将标本投入4%多聚甲醛液中固定24 h后，石蜡包埋。

1.2.4 ELISA法检测血清中GAS、SS的含量ELISA检测方法严格按照试剂盒说明进行操作。

1.2.5 免疫组化法检测胃组织中GAS、SS的表达 各组动物于造模及用药结束前1 d(第20天)，禁食12 h(不禁水、药)，第21天处死后，立即剖腹，定位于距幽门胃端、肠端各0.5 cm处，连同幽门一起取出。将标本投入4%多聚甲醛液中固定24 h后，石蜡包埋，5 μm连续切片。依照试剂盒行GAS及SS免疫组织化学染色。

2 结果

2.1 各组干预对大鼠血清、胃窦及十二指肠组织中GAS的影响 各组大鼠血清及胃窦十二指肠组织中GAS含量见表1、图1和图2。结果表明，与正常对照组比较，模型组大鼠血清及组织中GAS含量明显降低(P＜0.05);与模型组比较，中药组及西药组均可显著增高血清及组织GAS表达，但均低于正常对照组(P＜0.05);中药治疗组GAS水平高于西药组(P＜0.05)。

表1 各组大鼠血清及胃窦十二指肠组织中GAS的含量(ng/L)

图1 胃组织中GAS表达(400×)注:A.正常对照组，B.模型组，C.西药组，D.中药组

图2 肠组织中GAS表达(400×)注:A.正常对照组，B.模型组，C.西药组，D.中药组

2.2 各组干预对大鼠血清、胃窦及十二指肠组织中SS的影响 各组大鼠血清及胃窦、十二指肠组织中SS含量见表2、图3和图4。结果表明，与正常对照组比较，模型组大鼠血清及组织中SS含量明显增高(P＜0.05);与模型组比较，中药组及西药组血清及组织SS水平显著降低，且均低于正常对照组(P＜0.05);中药组SS水平低于西药组(P＜0.05)。

表2 各组大鼠血清及胃窦十二指肠组织中SS的含量(pg/mL)

图3 胃组织中SS表达(400×)注:A.正常对照组，B.模型组，C.西药组，D.中药组

图4 肠组织中SS表达(400×)注:A.正常对照组，B.模型组，C.西药组，D.中药组

3 讨论

胃肠动力障碍、心理因素等对 FD影响较大［4－6］，胃肠运动功能障碍在FD发病机制中的作用一直备受重视，并被认为是引起上消化道症状的主要原因，而胃肠激素与胃肠运动密切相关，胃肠运动受到相关激素的影响和神经递质的调控。有学者从胃肠激素方面对FD的发病机制进行了研究，发现FD患者存在胃肠激素分泌异常［7］。

GAS刺激壁细胞分泌胃酸和营养黏膜的生长，能促进胃肠平滑肌收缩，增加胃肠道的运动［8－9］。SS以旁分泌方式调节G细胞GAS的分泌，并对胃肠道的分泌、吸收、运动功能有普遍的抑制作用［10］，对胃黏膜有直接的保护作用。SS可抑制许多细胞因子的释放，其作用表现在对胃肠道具有广泛的直接和间接调节作用［11］，它对多种生理功能具有抑制作用。GAS和SS的平衡对保持胃黏膜胃酸分泌和维持正常胃肠道功能有着重要作用。GAS和SS的分泌失调可以导致疾病，病理状态下又可导致其分泌失调。胃黏膜G细胞主要分布在胃窦部，D细胞在胃窦、胃体和胃底均有分布，而以胃窦部较多。胃肠黏膜内G、D细胞的比值相对恒定，这有利于维持正常的胃肠功能。

本研究结果显示，FD模型组大鼠血浆、胃窦及十二指肠组织中GAS水平下降，而SS水平升高。表明胃痛消痞方及西沙必利可能促进GAS的分泌，抑制SS的分泌。两组血浆及组织中GAS及SS分泌量差异显著，表明胃痛消痞方优于西沙必利。而唐海英等［12］研究发现，SS抑制胃酸的分泌，抑制胃排空，还可以通过内分泌和旁分泌途径来抑制胃泌素的分泌。可见胃痛消痞方及西沙必利通过促进胃泌素的分泌，抑制生长抑素的分泌来刺激胃泌素分泌，进而对FD大鼠协同起到体液和胃肠道动力调节作用。

FD属中医“痞满”［13］、“胃脘痛”、“嘈杂”等范畴。该病的发生不仅与胃有直接关系，而且与肝脾密切相关。虽然导致FD发病的因素较多，但脾胃虚弱是根本，肝郁是关键。治疗上着重调理情志与脾胃，复其升降。胃痛消痞方以柴胡、白芍疏肝解郁，调理气机;炒白术、党参健脾益气助运;砂仁、枳实化湿行气，散结消痞;焦山楂、炒麦芽，炒鸡内金疏理中焦以醒脾，健脾消食以化积［14］。肝郁则可见脘腹胀满疼痛，延胡索行气止痛，炙甘草调药缓中，全方将疏肝解郁与健脾消食两法有机结合起来，从而使木达土旺。共奏疏肝健脾、理气和胃之功效。在FD与GAS、SS关系方面，SS对胃排空的抑制作用主要影响胃及十二指肠间的协调运动，并通过实验发现SS升高与胃排空迟缓呈显著正相关。刘松林等［15］研究发现，FD大鼠血中GAS的含量降低，通过用药提高GAS含量，通过其效应而发挥促胃动力作用。SS对胃肠道有广泛的抑制作用，抑制胃肠运动及胆囊收缩，对胃肠其他激素分泌也有广泛抑制作用。目前，西医治疗FD采用的是药物治疗，首选促胃肠动力药，常用5－HT4受体激动剂［16－17］，如西沙必利、莫沙必利等，但西沙必利疗程较长，停药易复发，且其不良反应也有较多报道。我们根据FD的临床表现及病机使用胃痛消痞方治疗，结果表明，FD可以引起大鼠GAS、SS水平改变，胃痛消痞方可促进FD大鼠胃泌素的释放，降低生长抑素的释放。

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