正交实验法优选妇宁舒颗粒的提取工艺

王卫锋 葛 莉 李 芳 李 凡 陕西省中医药研究院（西安 710003）

正交实验法优选妇宁舒颗粒的提取工艺

王卫锋 葛 莉 李 芳 李 凡 陕西省中医药研究院（西安 710003）

目的：优选中药妇宁舒颗粒的水提取工艺。方法：采用L9（34））正交试验，以栀子苷为指标，再辅助以干膏量，以煎煮时间、加水量和煎煮次数为考察因素，筛选最佳的水提取工艺。结果：最佳的提取工艺为加水煎煮3次，第一次加10倍量，煎煮1.5h，第二、三次分别加8倍量水，各煎煮1h，所得栀子苷和干膏量均较高。结论：优选得到的提取工艺合理，操作可行，质量可控。

妇宁舒颗粒由栀子、黄芪、金银花等7味中药组成，主要用于妇科炎症的治疗。其中栀子、黄芪、金银花、土茯苓四味药材以水提取入药。为了有效控制提取工艺，本文采取正交实验法，对妇宁舒颗粒水提取工艺采用高效液相色谱法测定栀子苷的含量，结合出膏量两个指标，确定最佳提取工艺。

1 仪器与试药1.1 试药 栀子、黄芪、金银花、土茯苓等中药均购自陕西省药材公司，经检验均符合《中国药典》2010年版一部的规定［1］；栀子苷（中国药品生物制品检定所，批号：110749-200714），所用化学试剂为分析纯（天津富宇化学试剂厂）、液相用试剂为色谱纯（美国Fisher scintific）、水为娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈食品有限公司）。

1.2 仪器 高效液相色谱仪（Lab Alliance型恒流泵；Waters966二极管阵列检测器，活德国际贸易（上海）有限公司；Millennium 32色谱工作站）、C 色谱柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）、超声波清洗机（H66025T）、TGL-16G离心机（上海安亭科学仪器厂）、HCTP11B10托盘药物天平（北京市宣武区天平厂）、BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯天平有限公司）、四孔水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司）。

2 方法与结果2.1 水提工艺正交设计 为了确定最佳的提取参数，拟采用正交试验对提取工艺中所涉及的条件进行优选，通常情况下：提取次数、煎煮时间、加水量对提取结果影响较大，因此，以提取次数、煎煮时间、加水量作为影响因素，各选择三个水平，以L9（34）表安排试验，筛选最佳提取工艺条件。因素水平表见表1。

表1 煎煮工艺条件正交试验因素水平表

2.2 评价指标的确定 栀子为方中主药，栀子苷为其主要有效成分之一，且其含量测定有成熟方法，可用HPLC法测定提取物中栀子苷的含量，因此选择以栀子苷的含量并结合出膏量作为评价指标。

2.3 样品溶液的制备 按处方比例量称取水提工艺部分的药材共340g，共9份，按正交实验表下设计的实验条件以加热回流方式进行提取，合并提取液。将上述提取液浓缩，定容至一定体积，制得样品溶液。

2.4 收膏率测定方法 取各正交试验号浓缩液100mL，于干燥蒸发皿中水浴蒸干，80℃烘箱干燥至干，取出，迅速置干燥器中放冷，称重，计算。

2.5 栀子苷的含量测定［2－5］2.5.1 色谱条件：色谱柱：C18色谱柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈－水（15∶85）；流速1.0mL·min－1；检测波长238nm；柱温25℃；进样量10μL。

2.5.2 对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含38.4ug的溶液，摇匀，即得。

2.5.3 供试品溶液的制备：分别精密吸取各提取液1mL，置50mL量瓶中，加甲醇约30mL，超声5min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.5.4 测定法：分别吸取对照品溶液及上述供试品溶液各10μL，注入色谱仪，测定并计算。

2.6 结果及分析 正交实验结果见表2，方差分析结果见表3、表4。

表2 水提L9（34）正交试验表及结果

表3 栀子苷含量方差分析表

表4 干膏量方差分析表

试验结果表明，以栀子苷为指标，表2中极差值大小显示，各因素作用主次为提取次数对栀子苷和干膏的提取量影响较大，由正交试验结果以及方差分析结果表现出来的最佳工艺为A3B2C1。即：加10、8、8倍量水煎煮提取3次，第一次1.5h，第二、三次各1.0h。

2.7 验证试验 按处方量称取各药材共1020g，共3份，按照所选提取条件试验，并测定栀子苷含量和出膏率。结果见表5。

3次验证试验表明，检测指标接近或者高于正交表中最优值，说明优选的提取条件基本可行。

表5 验证试验结果

3 讨 论3.1 在对水提工艺条件进行优选时 我们同时考察了栀子苷的含量和出膏率，这比采取单一指标对提取工艺进行评价更加科学和合理。

3.2 根据本实验优选的最佳工艺 经三批中试放大生产 结果产品质量稳定，适合工业化大生产。

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：人民卫生出版社，2010：3.

［2］李 岩.高效液相色谱法测定肾炎灵片中栀子苷含量［J］.中国医药指南，2011，9（22）：224-225.

［3］张大军，王兆华.高效液相色谱法测定复肾宁片中栀子苷含量［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（12）：88-89.

［4］邓义娟.高效液相色谱法测定安宫灵颗粒中栀子苷含量［J］.中国药业，2011，20（16）：39-40.

［5］陈伟康，方建和，丁银平.RP-HPLC法测定清肝利胆胶囊中栀子苷 ［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（7）：71-73.

妇宁舒颗粒／化学 栀子／分析 含量测定

R284

A

1000 -7369（2012）04-0484-03

（收稿2011-11-03；修回2011-12-03）