uPA和VEGF在子宫内膜癌中的表达及临床意义

李彩红，李志伟，时志民，王 蕾，席 丰

(1.邯郸市妇幼保健院 妇科，河北 邯郸 0569002；2.邯郸市第一医院 检验科，河北 邯郸 056002；3 河北工程大学医学院 病理科， 河北 邯郸 056001)

子宫内膜癌为女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一，占女性生殖系统恶性肿瘤的20%～30%，发病率仅次于子宫颈癌[1]。近年来，研究发现尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)是降解细胞外基质的重要因子，血管内皮生长因子(VEGF)在淋巴管生成及癌细胞淋巴道转移中起重要作用，VEGF与uPA关系研究较为少见。本研究拟用免疫组化SP方法检测正常子宫内膜、子宫内膜癌组织中uPA和VEGF表达情况，分析这两种蛋白表达与子宫内膜癌生物学行为的关系，探讨它们在子宫内膜癌中发生、发展、转移及生物学行为，为临床治疗和预后提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 材 料

选取2008年1月-2011年6月河北邯郸市妇幼保健院妇科子宫内膜癌手术切除子宫标本60例，平均年龄52.22岁，所有子宫内膜癌患者术前均未行放、化疗及激素治疗；取因子宫肌瘤或子宫脱垂而手术切除子宫的正常子宫内膜标本32例，平均年龄48.25岁。子宫内膜癌按2000年FIGO标准进行临床病理分期及组织分级:Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例；G1级36例，G2级13例，G3级11例。病灶局限于内膜层及浸润<1/2肌层44例，浸润>1/2肌层16例。

1.2 试剂与方法

常规免疫组化试剂盒SP、二硝基联苯胺(DAB)显色液及鼠抗人uPA单克隆抗体和鼠抗人VEGF单克隆抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)。采用SP免疫组化法，方法操作按试剂盒说明书进行，取已知切片作为阳性对照，以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断

uPA和VEGF阳性定位于细胞浆，以细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性信号。参照Parenti等[2]的标准，每张切片均随机观察5个高倍视野(×400)，3阳性细胞数<5%为(-)，5%～25%为(+)，25%～50%为(++)， >50%为(+++)。以(+～+++)均视为阳性表达，(-)视为阴性表达。

1.4 统计学方法

应用SPSS 12. 0统计软件，计数资料采用χ2检验,相互关系用等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 uPA和VEGF在正常子宫内和子宫内膜癌组织中的表达情况

在32例正常的子宫内膜中uPA无表达，60例子宫内膜癌中表达31例，表达率为51.67%(31/60)，两者比较差异有显著性意义(P<0.05)；32例正常的子宫内膜中有4例VEGF表达，表达率为12.50%(4/32)，60例子宫内膜癌中表达40例，表达率为43.33%(26/60)，两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。见图1、2及表1。

图1 uPA在子宫内膜癌组织中的表达(SP×400)Fig 1 Expression of uPA in endometrial carcinoma(SP×400)

图2 VEGF在子宫内膜癌组织中的表达(SP×400)Fig 2 Expression of VEGF in endometrial carcinoma(SP×400)

2.2 uPA和VEGF在子宫内膜癌中的表达与临床病理指标的关系

uPA和VEGF在子宫内膜癌中的表达与组织学分级、临床病理分期、肌层浸润深度以及淋巴道转移有关(P<0.05)。见表1。

表1 uPA和VEGF在正常子宫内膜及子宫内膜癌中的表达与临床病理指标的关系Tab1 The expression of uPA and VEGF in normal endometrium and endometrial carcinoma and correlation with clinicopathologic factor n(%)

2.3 uPA和VEGF在子宫内膜癌组织中表达的相关性分析

uPA和VEGF在子宫内膜癌组织中的表达呈显著正相关，r=0.509，P=0.000。见表2。

表2 uPA和VEGF在子宫内膜癌组织中的相关性

Tab 2 The relationship between uPA and VEGF in the endometrial carcinoma

VEGF(n=26)uPA(n=31)+-+215-1024

3 讨 论

尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)是一种丝氨酸蛋白水解酶，位于10号染色体的长臂上，由10个内含子和11个外显子构成，成熟的mRNA长度为2.4 kb[3]，具有水解蛋白和信号传导等多种功能。uPA可以将纤溶酶原激活故为纤溶酶，纤溶酶可以降解基质和基底膜等成份，在肿瘤侵袭、转移过程中发挥着重要的作用[4]。另外uPA还参与信号转导通路，促进肿瘤细胞发生、增殖等活动[5]。有报道uPA在多种恶性肿瘤中均有过表达[6-7]，它主要是在生理、病理的条件下，参与各种细胞的分化、增殖、迁移、细胞周围基质降解以及组织重建等。本实验结果显示uPA蛋白阳性表达主要位于细胞浆，在子宫内膜癌组织中表达率较高(51.67%)，在正常子宫内膜组织中不表达，差异有显著性意义(P<0.05)；uPA的表达与FIGO分期及组织学分级有关，随着FIGO分期及组织学分级的增加，uPA在内膜癌中的表达率增高；而且有淋巴结转移及浸润深度>1/2肌层的内膜癌uPA表达率高于无淋巴结转移和浸润深度<1/2肌层者(P<0.05)，uPA的高表达可以使子宫内膜癌中恶性细胞降解细胞外基质和基膜能力加强，诱使恶性细胞向组织深层和淋巴管中浸润，并发生远处转移。本研究证实，uPA随着组织学分级的升高、浸润深度的增加而表达增加，这与王淑敏等[8]的报道一致。同时本研究还发现uPA的表达与是否有淋巴结转移有关，虽与王淑敏等的研究结论存在异议，但结果都提示uPA在子宫内膜癌的侵袭转移过程中发挥着重要作用。

恶性肿瘤组织在向周围组织侵袭、向远处器官转移时，必须同时伴随新生血管的形成，新生血管为肿瘤的侵袭性生长提供充足的营养与氧气，两者相互促进，相互协调，加剧了肿瘤细胞的侵袭力，使得恶性肿瘤发生更广泛的侵袭与转移。血管内皮生长因子(VEGF)是一种具有肝素结合活性的生长因子，作用于血管内皮细胞，在肿瘤血管生成中起到非常重要的作用，对血管内皮细胞的促有丝分裂作用十分强烈，到目前为止，VEGF被认为是所知道的最强的直接作用于血管内皮细胞的生长因子。本研究发现VEGF在子宫内膜癌组织中表达明显高于正常内膜组织(P<0.05)，VEGF的表达与有无淋巴结转移、病理分期、浸润深度及组织学分级有关，与肿瘤的病理组织类型无关。当肿瘤生长到一定程度时，造成局部缺氧，血管生成不足，从而刺激肿瘤细胞分泌VEGF，而促进新生血管生成，增加血管通透性，故VEGF可以加速肿瘤的生长，促进肿瘤发生转移，说明VEGF在子宫内膜癌的发展及浸润转移过程中发挥重要作用。

有研究显示在MAPK通路中，通过对uPA的调控表达可以诱导VEGF在人脐静脉内皮细胞的迁移[9]。VEGF也可以促进内皮细胞分泌和激活uPA来降解基质[10]，uPA也可以直接激活VEGF，促使VEGF的释放[11]，从而为肿瘤细胞的转移和肿瘤的新生血管形成提供条件。通过二者相关性分析，本研究发现uPA和VEGF在子宫内膜癌组织中的表达呈显著正相关。提示uPA和VEGF在子宫内膜癌的新生血管形成和细胞外基质降解中是相互联系、相互促进的，形成正反馈调节环，为新生血管形成提供有利的微环境，uRA通过激活VEGF而诱导肿瘤血管的生成，同时也有利于肿瘤细胞脱落进入脉管或向邻近组织扩散，为肿瘤侵袭、转移创造条件。

总之，子宫内膜癌组织中uPA和VEGF处于过表达状态，与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关，本研究对控制子宫内膜癌患者的复发和转移提供了新的治疗思路和方法。

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