血清高尔基体蛋白73、异常凝血酶原、磷脂酰基醇蛋白聚糖－3和甲胎蛋白联合检测对原发性肝癌的早期诊断价值研究

赵运胜，王猛，李军良，吴侠，李洪臣

血清高尔基体蛋白73、异常凝血酶原、磷脂酰基醇蛋白聚糖－3和甲胎蛋白联合检测对原发性肝癌的早期诊断价值研究

赵运胜，王猛，李军良，吴侠，李洪臣

目的探讨血清高尔基体蛋白73(GP73)、异常凝血酶原(DCP)、磷脂酰基醇蛋白聚糖－3(GPC－3)和甲胎蛋白(AFP)联合检测对原发性肝癌(PHC)的早期诊断价值。方法选择2011年4—9月在我院就诊的消化系统疾病患者共110例，根据患者疾病分为PHC组50例、慢性肝炎组20例、肝硬化组20、其他消化系统恶性肿瘤组(其他肿瘤组)20例。选择同期我院健康体检正常者20例为对照组。采用酶联免疫法检测各组血清GP73、DCP、GPC－3水平，电化学发光法测定AFP水平。评价各指标单独和联合检测对早期PHC的诊断价值。结果各组血清GP73、DCP、GPC－3和AFP水平比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。GP73、DCP、GPC－3和AFP诊断早期PHC的曲线下面积(AUG)分别为0.824〔95%CI(0.735，0.912)〕、0.640〔95%CI(0.533，0.746)〕、0.635〔95%CI(0.527，0.743)〕和0.668〔95%CI(0.564，0.773)〕。将慢性肝炎组、肝硬化组、其他肿瘤组及对照组合并为非PHC组，与PHC组进行比较:单项检测以GP73灵敏度和准确率最高，以GPC－3特异度最高;联合检测以GP73/AFP灵敏度和准确率最高，系列试验中GP73与其他任何一项或几项指标联合的特异度均可达100.0%。结论单独检测GP73对早期PHC诊断价值优于AFP，单独检测DCP或GPC－3对早期PHC有一定的鉴别诊断价值，与AFP相当，GP73、DCP、GPC－3和AFP联合检测对早期PHC有较好的诊断价值，可根据临床实际选择不同的项目组合。

肝肿瘤;高尔基体蛋白73;异常凝血酶原;磷脂酰基醇蛋白聚糖类;甲胎蛋白类

R 735.7

A

1007－9572(2012)11－3730－04

原发性肝癌(PHC)是世界上致死率最高的恶性肿瘤之一，其发病率有逐年上升的趋势［1］。早期诊断PHC是治疗和延长PHC患者生存期的最主要策略。血清甲胎蛋白(AFP)是目前检测PHC最常用的肿瘤标志物，但其灵敏度和特异度较差，对PHC的早期诊断价值有限［2］。血清高尔基体蛋白73(GP73)、异常凝血酶原(DCP)和磷脂酰基醇蛋白聚糖－3(GPC－3)有望成为PHC早期诊断及判断预后的新标记物［2］。GP73是一种定位于高尔基体的Ⅱ型跨膜蛋白，病毒感染或PHC患者血清中GP73水平显著升高［3－4］，文献报道其诊断PHC的敏感度为69%、特异度为90%［5］。DCP可以在PHC患者、维生素K缺乏者及服用华法林患者的血清中测得，其在PHC患者血清中的表达水平与瘤灶大小、肿瘤数量、血管浸润程度及肝内转移密切相关［6］，是判断PHC进展程度及预后的重要指标［7］。GPC－3是一种膜性硫酸乙酰肝素糖蛋白，在PHC患者癌细胞中高表达［8］，对PHC的早期诊断和良恶性肿瘤的鉴别诊断有较高特异度［9］。

但上述血清标记物既有自身独到的诊断价值，也有自身局限性。有研究提议，将GP73与其他常用肿瘤标记物联合检测以提高PHC早期诊断水平［10］。本研究旨在探讨GP73、DCP、GPC－3和AFP联合检测对PHC的早期诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2011年4—9月在我院就诊的消化系统疾病患者共110例，根据患者疾病进行分组:(1)PHC组50例，其中男38例，女12例;年龄32～81岁，平均57岁;均经病理检查明确诊断为早期PHC。(2)慢性肝炎组20例，其中男11例，女9例;年龄36～57岁，平均48岁。(3)肝硬化组20例，其中男15例，女5例;年龄41～81岁，平均55岁。(3)其他消化系统恶性肿瘤组(其他肿瘤组)20例，其中男14例，女6例;年龄47～78岁，平均69岁。选择同期我院健康体检正常者20例为对照组，其中男10例，女10例;年龄21～45岁，平均34岁。

1.2 检测方法采用促凝管采集受检者清晨空腹肘静脉血3 ml，离心半径r=16 cm，3 000 r/min离心10 min分离血清，－80℃冰箱保存。采用CODA全自动酶标仪检测受检者GP73、DCP、GPC－3水平，检测方法采用酶联免疫定量方法，试剂盒均购自上海瑞奇科技有限公司;采用罗氏2010电化学发光仪检测其AFP水平，检测方法采用罗氏电化学发光法，试剂盒购自上海罗氏诊断产品有限公司。上述指标的检测均严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.3 观察内容检测各组血清GP73、DCP、GPC－3和AFP水平并比较其差异;分析各指标诊断早期PHC的曲线下面积(AUG)及95%可信区间(95%CI)、临界值。评价多指标联合检测的意义，联合检测分为系列试验和平行试验。系列试验也称串联试验，是指采用几种筛查方法检测疾病，只有全部指标均为阳性才判为阳性，凡有一项指标为阴性即判为阴性;平行试验也称并联试验，是指采用几种筛查方法检测疾病，凡有一项指标为阳性即判为阳性，所有指标均为阴性才判为阴性。1.4统计学方法应用SPSS 13.0统计软件进行分析，偏态分布的计量资料采用M(QR)表示，多组间比较采用Kruskal－Wallis检验，两两比较采用Nemeny法;计数资料采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。各指标诊断早期PHC的灵敏度、特异度和AUG等通过绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)获得。

2 结果

2.1 各组血清GP73、DCP、GPC－3和AFP水平比较各组血清GP73水平比较，差异有统计学意义(P＜0.01);其中PHC组与慢性肝炎组(U=129.00)、肝硬化组(U=280.00)、其他肿瘤组(U=183.00)、对照组(U=114.00)比较，肝硬化组和其他肿瘤组与慢性肝炎组(U值分别为57.50和87.00)比较，肝硬化组和其他肿瘤组与对照组(U值分别为43.00和48.50)比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。各组血清DCP水平比较，差异有统计学意义(P＜0.01);其中PHC组与慢性肝炎组(U=301.50)、其他肿瘤组(U=338.00)、对照组(U=264.00)比较，肝硬化组和其他肿瘤组与对照组(U值分别为71.50和71.00)比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。各种血清GPC－3水平比较，差异有统计学意义(P＜0.01);其中PHC组与慢性肝炎组(U=347.00)、其他肿瘤组(U=350.00)、对照组(U=261.50)比较，肝硬化组与对照组(U=69.50)比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。各组血清AFP水平比较，差异有统计学意义(P＜0.01);其中PHC组与慢性肝炎组(U=338.00)、肝硬化组(U=344.00)、其他肿瘤组(U=348.00)、对照组(U=164.00)比较，慢性肝炎组、肝硬化组和其他肿瘤组与对照组(U值分别为33.00、70.50、57.00)比较，差异均有统计学意义(P＜0.05，见表1)。

表1 各组血清GP73、DCP、GPC－3和AFP水平比较〔M(QR)，μg/L〕Table 1 Comparison of serum GP73，DCP，GPC－3 and AFP levels in each group

2.2 GP73、DCP、GPC－3和AFP对早期PHC的诊断价值

GP73、DCP、GPC－3和AFP诊断早期PHC的AUG分别为0.824〔95%CI(0.735，0.912)〕、0.640〔95%CI(0.533，0.746)〕、0.635〔95%CI(0.527，0.743)〕和0.668〔95%CI(0.564，0.773)〕。GP73、DCP、GPC－3和AFP诊断早期PHC的临界值分别为72.7 μg/L、37.5 μg/L、20.7 μg/L和108.0 μg/L(见图1)。

图1 GP73、DCP、GPC－3和AFP诊断早期PHC的ROC曲线Figure 1 ROC curve of GP73，DCP，GPC－3 and AFP for diagnosis of early PHC

2.3 GP73、DCP、GPC－3和AFP单项及联合检测对早期PHC的诊断价值将慢性肝炎组、肝硬化组、其他肿瘤组及对照组合并为非PHC组，与PHC组进行比较:单项检测以GP73灵敏度和准确率最高，以GPC－3特异度最高;联合检测以GP73/AFP灵敏度和准确率最高，系列试验中GP73与其他任何一项或几项指标联合的特异度均可达100.0%(见表2)。

表2 GP73、DCP、GPC－3和AFP单项及联合检测对早期PHC的诊断价值比较Table 2 Comparison of diagnosis value about single and combined examination of GP73，DCP，GPC－3 and AFP for early PHC

3 讨论

PHC的治疗效果取决于早期诊断，GP73是新近发现的PHC血清标记物之一［11］。本研究结果显示，早期PHC患者血清GP73水平高于慢性肝炎、肝硬化、其他消化系统恶性肿瘤患者及正常人群，肝硬化及其他消化系统肿瘤患者高于慢性肝炎患者及正常人群，与以往研究结果基本一致［12－13］。GP73单独诊断早期PHC的AUG为0.824，灵敏度为72.0%，特异度为95.0%，诊断价值明显优于AFP，与Drake等［5］研究结果一致。但Ozkan等［14］报道，GP73诊断早期PHC的灵敏度和特异度与AFP相当或更低，因此，单独检测GP73对PHC的早期诊断价值有待进一步研究探讨。

本研究结果显示，早期PHC患者血清DCP水平高于慢性肝炎、其他消化系统恶性肿瘤患者及正常人群，肝硬化、其他消化系统恶性肿瘤患者高于正常人群，与Yamashiki等［15］研究结果一致。但单独检测DCP诊断早期PHC的AUG为0.640，灵敏度仅为44.0%，与文献报道其敏感度较差一致［7］;而DCP可能与PHC的肝内转移尤其是门脉转移相关，在预测肝癌预后方面可能优于AFP［16］。GPC－3与DCP诊断早期PHC的AUG和灵敏度相似，但其特异度较高，在区分良恶性肿瘤及判断疾病预后方面效果较好［9］。因此，DCP和GPC－3对早期PHC有较好的鉴别诊断价值。AFP是目前临床应用最广泛的PHC肿瘤标记物，本研究结果显示，早期PHC患者血清AFP水平高于慢性肝炎、肝硬化、其他消化系统恶性肿瘤患者及正常人群，且慢性肝炎、肝硬化及其他消化系统恶性肿瘤患者AFP均高于正常人群;单独检测AFP诊断早期PHC的AUG为0.668，灵敏度为52.0%，特异度为92.5%。徐万菊等［17］报道，血清AFP水平在肝癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、胆管肿瘤及睾丸肿瘤患者中均明显升高，提示AFP诊断早期PHC的特异度较差，鉴别诊断价值有限。

联合检测结果表明，GP73、DCP、GPC－3和AFP联合检测可提高诊断早期PHC的灵敏度和特异度。在系列实验中，GP73和其他任何一项指标联合检测的特异度都可达100.0%，继续增加其他联合检测的指标意义不大，因此可将其作为诊断早期PHC的较好的肿瘤标记物。在平行实验中，以GP73/AFP的灵敏度最高，继续增加其他联合检测的指标意义也不大，且联合检测所有组合中以GP73/AFP准确率最高，诊断价值最好。临床上应根据工作需要和患者特点选择不同的项目组合，多种肿瘤标记物联合检测对提高PHC早期诊断率有重要价值［10］。

综上所述，单独检测GP73对早期PHC诊断价值优于AFP，单独检测DCP或GPC－3对早期PHC有一定的鉴别诊断价值，与AFP相当，GP73、DCP、GPC－3和AFP联合检测对早期PHC有较好的诊断价值，可根据临床实际选择不同的项目组合。但本研究样本量较小，所使用的统计软件本身可能存在一定的局限性，数据处理过程中存在一定的误差，GP73、DCP、GPC－3和AFP联合检测对早期PHC的诊断价值及其评价PHC手术效果、判断预后的价值，均有待更大规模的多中心联合的临床试验进一步研究验证。

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Clinical Significance of Serum GP73，DCP，GPC－3 and AFP Tests in Diagnosis of Primary Hepatic Carcinoma

ZHAO Yun－sheng，WANG Meng，LI Jun－liang，et al．Department of Clinical Laboratory，the First Hospital of Qinhuangdao，Qinhuangdao 066000，China

ObjectiveTo investigate the clinical value of serum Glogi glycoprotein 73(GP73)，des－γ－carboxy prothrombin(DCP)，glypican－3(GPC－3)and alpha－fetoprotein(AFP)tests for early diagnosis of primary hepatic carcinoma(PHC)．MethodsTotally 50 cases of PHC(PHC group)，20 cases of chronic hepatitis(CH group)，20 cases of liver cirrhosis(LC group)，20 cases of malignant tumors of digestive system except hepatic carcinoma(DS group)，and 20 cases of healthy controls(control group)were enrolled in this study．Serum GP73，DCP，and GPC－3 levels were detected using enzyme－linked immunosorbent assay．AFP was detected by electrochemiluminescence reaction.ResultsThe serum GP73，DCP，GPC－3，and AFP levels were significantly different among these five groups．The area under curve(AUC)of GP73，DCP，GPC－3，and AFP for diagnosing the early PHC was 0.824〔95%CI(0.735，0.912)〕，0.640〔95%CI(0.533，0.746)〕，0.635〔95%CI(0.527，0.743)〕，and 0.668〔95%CI(0.564，0.773)〕．Comparison between the non－PHC group(including the CH group，LC group，DS group，and control group)and PHC group showed that GP73 had the highest sensitivity and accuracy and GPC－3 had the highest specificity．When applied in a combined manner，GP73/AFP had the highest sensitivity and accuracy．During the consequent tests，GP73，when used consequently with other tests，yielded a specificity of 100.0%．ConclusionWhen used alone，GP73 has superior diagnostic value than AFP for early PHC．Either DCP or GPC－3 has similar value as AFP for the differential diagnosis of early PHC．The combined GP73，DCP，GPC－3，and AFP tests has good diagnostic value for early PHC，and can be applied based on the specific clinical conditions．

Liver neoplasms;Glogi glycoprotein 73;Des－γ－carboxy prothrombin;Glypicans;Alpha－fetoproteins

10.3969/j.issn.1007－9572.2012.11.053

066000河北省秦皇岛市第一医院检验科

赵运胜，066000河北省秦皇岛市第一医院检验科;E－mail:zhao_yun_sheng_sh@yahoo.cn

2012－06－30;

2012－10－15)

(本文编辑:鹿飞飞)