受体牛移植后再次放栓对妊娠率的影响

付静涛 曹授俊 范永刚 陈学生 肖西山 （北京农业职业学院 房山 102442 甘肃省酒泉市畜牧服务中心 北京市平谷区动物卫生监督所）



受体牛移植后再次放栓对妊娠率的影响

付静涛①*曹授俊①范永刚③陈学生②肖西山①（①北京农业职业学院 房山 102442 ②甘肃省酒泉市畜牧服务中心 ③北京市平谷区动物卫生监督所）

本试验采用对移植后的受体牛再次阴道内放入本牛用过的CIDR(孕酮阴道栓)的方法，对妊娠率进行对比研究。结果表明：再次放栓组妊娠率(育成牛63.64%和经产牛60.98%)略高于未再次放栓组(育成牛53.66%和经产牛53.85%)，但无显著性差异(P>0.05)。

受体牛 胚胎移植 放栓 妊娠率

应用现代繁殖生物技术加速品种改良及扩大种群是目前国际上推动畜牧业，尤其是养牛业发展的重要途径之一。现代繁殖生物技术涉及到对种质细胞—精子、卵和胚胎在体外进行细胞或遗传水平的操作，再通过胚胎移植产生人们所需要的个体乃至群体。而移植后胚胎在母体子宫的着床率直接影响着繁殖生物技术应用的效率。因而，受体牛妊娠率一直是各国从事繁殖生物技术研究的科学家所关注的焦点之一。胚胎着床涉及到胚胎和受体牛子宫之间的相互作用，是一种高度进化和完善的生理过程。本文从受体牛移植胚胎后再次放栓对妊娠率的影响进行了研究，旨在提高受体牛移植妊娠率，从而为胚胎移植产业化奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 胚胎来源 胚胎引自于加拿大太平洋遗传中心(Canadian Pacific Genetics Centre)的荷斯坦奶牛体内生产的胚胎。

1.1.2 胚胎冷冻方法 采用1.5mol/L乙二醇为抗冻保护剂的常规冷冻法。

1.1.3 受体牛的选择及饲养管理 受体牛来源于甘肃省酒泉市，品种为黄牛杂交牛、西门塔尔杂种牛和低产黑白花奶牛。其中包括育成牛和经产牛、年龄在2~8周岁。同期发情处理前进行两次直肠检查，选择无繁殖障碍性疾病、健康、体况达到中等以上，断奶40d以上，且具有正常发情周期的210头母牛做受体实施同期发情处理。受体母牛在同期发情处理45d前加强饲养管理，补饲富含维生素、矿物质的全价配合饲料和适量胡萝卜。

1.1.4 药品和仪器 5%亚硒酸钠VE注射液：亚硒酸钠10mg+500IUVE/10ml/支(东台市动物药厂，上海)。CIDR：1.38g孕酮/支(Duirs PfarmAg Ltd；New Zealand)。PGF2α：0.2mg/支(上海计划生育研究所)。移植枪、硬外套、软外套(法国进口)。

1.2 方法

1.2.1 同期发情处理 采用CIDR联合使用PGF2α法对受体母牛进行同期发情处理。在受体牛发情周期的任意一天于阴道内埋置CIDR，第9天肌肉注PGF2α0.6 mg/头(经产牛)或0.5mg/头(育成牛)，第12天取出CIDR(清洗消毒后保存，并标记牛号)，于24~48h开始观察发情，并准确记录发情时间。

1.2.2 胚胎解冻 冷冻胚胎的细管首先空气浴7~8s，然后在32℃水浴中解冻10s，拔掉栓塞即可装入移植枪进行移植，但要求在解冻后8~10min内移植完毕。

1.2.3 胚胎移植 采用一步细管法直接移植165头。移植前首先对受体牛确认发情时间，并结合直肠检查，触摸黄体发育是否合格，对黄体合格的受体牛实施胚胎移植。致密桑椹胚可移植于发情后6.0~7.0d的受体，早期囊胚和囊胚可移植于7.0~7.5d的受体。

1.2.4 再次放栓 把同期发情时用过的CIDR进行消毒处理，随机选取85头(育成牛44头，经产牛41头)移植后的受体(对应本牛用过的CIDR)再次放入阴道内，10d后取出。

1.2.5 统计分析 采用χ2检验

2 结果

对165头受体牛进行分组试验，其中85头移植后再次阴道内放置用过的CIDR，80头未用。再次放入组妊娠率略高于未放置组，但差异不显著(P>0.05)，见附表。

附表 移植后再次放栓的效果比较

牛的类型是否放栓移植头数妊娠头数妊娠率(%) 育成牛是442863.64ａ 否412253.66ａ 经产牛是412560.98ａ 否392153.85ａ

注：同一栏数值中具有相同字母表示无显著性差异(P>0.05)

3 讨论

妊娠涉及胚胎和母体子宫间妊娠信号的建立、附植的发生和胎盘的形成等一系列分子事件[1]。同时妊娠率也受胚胎质量、受体牛同期化程度、胚胎移植和胚胎体外操作技术水平以及孕激素水平等因素的影响[2]。

卢淮武等[3]报道，孕酮影响子宫平滑肌细胞的通透性，使细胞内钾离子浓度降低，钠离子浓度升高，肌纤维松弛，兴奋性降低，同时降低妊娠子宫对缩宫素的敏感性，减少子宫收缩，有利于受精卵在子宫内生长发育。

董金莲等[4]报道，排卵后补充孕激素起到改变颗粒细胞的促性腺素受体含量，从而调节黄体化过程，促使子宫黏膜层加厚，腺体弯曲度增加，分泌功能增强，有利于胚胎着床，促使子宫颈口收缩，子宫颈粘液变稠形成宫颈塞起到保护作用。

由于孕激素有助于怀孕的过程，移植后再次放入同期发情时用过的CIDR，由于CIDR中的孕酮没有完全释放，所以继续外源性增加孕酮的含量，将有助于周期黄体的维持，提高妊娠率；但是，第2次放CIDR时，一定要严格消毒，以防造成感染，使妊娠率下降。

由于本次实验数据较少，结论还有待于进一步验证。

[1] Cross James C, Werb Zena, Fisher Susan J. Implantation and the placenta key pieces of the development puzzle. Science, 1994, 266: 1508-1518.

[2] 付静涛, 朱士恩, 李树静等. 影响受体牛冷冻移植胚胎效果的主要因素[J]. 中国畜牧杂志.2008,17(8): 14-17.

[3] 卢淮武, 周晖, 张建平等. 孕激素在黄体功能不全型复发性流产中的应用[J]. 中国处方药.2010,03: 36-38.

[4] 董金莲, 徐有盛等. 黄体酮和维生素治疗奶牛不孕症的试验[J]. 青海畜牧兽医杂志.2009, 39(06):22-23.

（2011–04–18）

北京市科委重点项目[H022020060420]和国家科技支撑计划[2006BAD04A02-10]部分内容资助。

北京农业职业学院项目[SF-YF-09-16]资助。

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1007-1733(2011)07-0017-02