玫参胶囊对小鼠神经系统影响的实验研究

王彩霞，程卫东 ，李 健 ，杨 萍

（1.甘肃省卫生学校，甘肃 兰州 730000；2.兰州大学中西医结合研究所，甘肃 兰州 730000；3.北京中医药大学，北京 100029）

妇女在绝经前后，由于卵巢功能衰退，雌激素水平明显下降，导致下丘脑-垂体-性腺轴功能失调，引起心血管、神经、内分泌系统功能紊乱，导致功能性子宫出血、阵发性潮热和出汗、外阴及阴道萎缩、骨质疏松及失眠、记忆力明显下降、情绪反常等精神和神经系统症状，即为围绝经期综合征。目前该病发生率上升，发病年龄提前，严重影响了妇女生活质量。激素替代治疗虽然有效，但因副作用而受到限制，中医药以安全有效备受青睐。本研究选用BALB/C小鼠作为动物模型，以观察纯中药制剂玫参胶囊对BALB/C小鼠神经系统的影响，揭示其治疗围绝经期综合征的机理，为临床应用及新药开发提供药理学依据。

1 材料

1.1 药物

玫参胶囊：由玫瑰花、西洋参、熟地、白芍、女贞子、枸杞子、生牡蛎、决明子、酸枣仁、莲子心、远志等中药组成，并按一定工艺制成胶囊，由北京中医药大学基础医学院方药系制备。用蒸馏水制成水剂，低、中、高剂量分别为2.15 g/kg、4.30 g/kg、8.60 g/kg。更年欣胶囊：通化方大药业股份有限公司生产，批号：050401，用蒸馏水制成水剂，给药剂量为0.73 g/kg。

1.2 动物

6周龄 BALB/C小鼠，雌性，体重（20 ±2）g；12月龄 BALB/C小鼠，雌性，体重（30 ±2）g。均由北京维通利华实验动物有限公司提供，许可证号：SCXB（京）：2004-0003。

1.3 主要试剂与仪器

戊巴比妥钠：广州南方化玻公司进口分装，批号：961030。氢溴化东莨菪碱注射液：广州明兴制药厂生产，批号：040701。胆碱酯酶（AchE）试剂盒：购自南京建成生物工程研究所，批号：20051029。超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒：购自南京建成生物工程研究所，批号：20051108。丙二醛（MDA）试剂盒：购自南京建成生物工程研究所，批号：20051103。T-D-L-5A型离心机：上海安亭科学仪器厂。

2 方法

2.1 对小鼠自主活动及睡眠时间影响的检测

6周龄BALB/C小鼠90只，随机分为6组：玫参胶囊低、中、高剂量组，更年欣胶囊组，正常对照组及模型对照组，每组15只。玫参胶囊低、中、高剂量组及更年欣胶囊组分别以相应剂量药物灌胃，正常对照组和模型对照组以等量蒸馏水灌胃，各组小鼠每天灌胃1次，连续给药30 d，末次给药后1 h，将小鼠置于自主活动测定仪中，适应5 min 后，记录小鼠10 min 内的活动次数;休息10 min 后，除正常对照组小鼠腹腔注射1 ml 蒸馏水外，其余各组小鼠腹腔注射阈剂量戊巴比妥钠50 mg/kg，以翻正反射消失为入睡时间，从翻正反射消失至恢复时间为睡眠持续时间。

2.2 对小鼠记忆功能影响的检测

6周龄BALB/C小鼠90只，随机分为6组：玫参胶囊低、中、高剂量组，更年欣胶囊组，正常对照组及模型对照组，每组15只。给药方法同前，末次给药后1 h，进行Y型电迷宫测试，每鼠测试15次，记录各组小鼠正确反应次数。次日进行造模[1]，记忆获得障碍模型制造：腹腔注射东莨菪碱5 mg/kg；记忆巩固障碍模型制造：皮下注射亚硝酸钠120 mg/kg；记忆再现障碍模型制造：30%乙醇10 ml/kg 灌胃；正常对照组用等量生理盐水代替造模药。造模后1 h，再进行测试，方法同前。

2.3 对老龄小鼠脑组织生化指标的检测[2]

12月龄BALB/C小鼠75只，随机分为5组，玫参胶囊低、中、高剂量组，更年欣胶囊组及模型对照组，每组15只；6周龄BALB/C小鼠15只为正常对照组，各组给药方法同前，末次给药后1 h，将各组小鼠分别断头，冰盘上快速剖取全脑，弃去嗅球及小脑，其余大脑用冰生理盐水冲洗血液，再用滤纸拭干，电子天平称重后加入9倍冷生理盐水，在玻璃匀浆器中研磨成10%匀浆，4℃、3600 r/min 离心 5 min，提取上清液，-20℃冻存。按试剂盒要求测定脑组织中SOD、MDA 及AchE 含量。

2.4 统计学方法

应用 SPSS 13.0 软件包，各指标均以（x ±s）表示，组间比较采用方差分析。

3 结果

3.1 对小鼠自主活动及睡眠时间的影响（见表1）

表1 各组小鼠自主活动及睡眠时间变化（±s）

表1 各组小鼠自主活动及睡眠时间变化（±s）

注：与正常对照组比较，▲▲ P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 自主活动次数 睡眠时间（min）正常对照组模型对照组玫参胶囊低剂量组玫参胶囊中剂量组玫参胶囊高剂量组更年欣胶囊组487.9 ±75.7488.1 ±74.2352.2 ±61.6*346.1 ±69.3*211.8 ±54.5**349.6 ±70.8*72.6 ±19.248.9 ±14.2▲▲85.7 ±18.7*128.4 ±25.0**143.1 ±24.7**141.9 ±22.5**

由表1可见，与正常对照组比较，模型对照组小鼠的自主活动次数无显著性差异；睡眠时间明显延长，有显著性差异（P＜0.01）。与模型对照组比较，玫参胶囊各剂量组及更年欣胶囊组小鼠自主活动次数均减少，睡眠时间延长，有显著性差异（P＜0.05 或P＜0.01）。

3.2 对小鼠记忆功能的影响（见表2）

表2 各组小鼠正确反应次数变化（±s，n=15）

表2 各组小鼠正确反应次数变化（±s，n=15）

注：与正常对照组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与模型对照组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01

组别 造模前 东莨菪碱造模 亚硝酸钠造模 乙醇造模正常对照组模型对照组玫参胶囊低剂量组玫参胶囊中剂量组玫参胶囊高剂量组更年欣胶囊组9.2 ±2.29.3 ±2.49.3 ±1.99.6 ±2.49.7 ±2.09.3 ±1.79.3 ±2.15.4 ±1.9▲9.1 ±1.6*10.4 ±1.5*11.6 ±2.0*9.2 ±2.5*9.2 ±2.15.9 ±1.2▲10.4 ±2.7*12.8 ±2.5*13.9 ±2.1*9.2 ±1.7*9.2 ±2.36.7 ±1.6▲▲9.8 ±1.9*11.3 ±2.5*12.4 ±2.1**9.8 ±1.7**

由表2可见，造模前的Y型迷宫测试，各组小鼠正确反应次数无显著性差异。造模后，与正常对照组比较，模型对照组Y型迷宫测试小鼠正确反应次数明显减少；与模型对照组比较，玫参胶囊各剂量组及更年欣胶囊组小鼠正确反应次数均有所增加，有显著性差异（P＜0.05 或 P＜ 0.01）。

3.3 对小鼠脑组织生化指标影响（见表3）

表3 各组小鼠脑组织生化指标变化（±s，n=15）

表3 各组小鼠脑组织生化指标变化（±s，n=15）

注：与正常对照组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别SOD（U/m gprot）MDA（nmol/m gprot）AchE（U/m gprot）正常对照组模型对照组玫参胶囊低剂量组玫参胶囊中剂量组玫参胶囊高剂量组更年欣胶囊组13.80 ±2.535.60 ±0.53▲▲8.68 ±3.05*12.15 ±3.16**13.77 ±3.02**9.54 ±4.13*1.32 ±0.120.52 ±0.12▲▲1.06 ±0.19*1.18 ±0.24*1.31 ±0.28*1.29 ±0.31*0.51 ±0.070.21 ±0.12▲0.26 ±0.130.44 ±0.12**0.58 ±0.14**0.24 ±0.08

由表3可见，与正常对照组比较，模型对照组小鼠脑组织中SOD、MDA、AchE 含量均降低，有显著性差异（P＜0.05 或P＜0.01）。与模型对照组比较，玫参胶囊各剂量组及更年欣胶囊组小鼠脑组织中SOD、MDA、AchE 含量均增加，有显著性差异（P＜0.05 或 P ＜0.01）。

4 讨论

中医认为，肾藏精化血主生殖，既为生殖之本，又是脏腑生理活动的先天之本。妇女绝经期前后，肾气渐衰，天葵将绝，冲任亏虚，精血不足，五脏失却滋养与濡润，阴精亏虚不能制约浮阳，致心肾不交，故治宜滋水清肝，交通心肾。更年欣胶囊治疗心肾不交型绝经前后诸证临床疗效满意[3]，另有报道补肾活血方可改善缺血再灌注脑损伤小鼠学习记忆功能[4]。而玫参胶囊中西洋参、熟地、枸杞子、女贞子滋阴补肾；玫瑰花、白芍、决明子清肝解郁；远志、莲子心、酸枣仁宁心安神、交通心肾，众药合用，达标本兼治之功效。本实验结果表明，与模型对照组相比，玫参胶囊各剂量组小鼠自主活动次数减少，戊巴比妥钠诱导的睡眠时间延长，提示玫参胶囊具有镇静作用，可以协同戊巴比妥钠的作用；玫参胶囊能增加记忆功能障碍小鼠的正确反应次数，对3种类型的记忆功能障碍均有效，对记忆再现障碍及记忆巩固障碍模型疗效显著，其高剂量组有显著性差异（P＜0.01）；玫参胶囊能增加老龄小鼠脑组织MDA 含量、SOD 活性、AchE活性，显示玫参胶囊对胆碱能神经系统及神经细胞有显著保护作用。以上研究结果提示，玫参胶囊可治疗围绝经期综合征，对神经系统功能紊乱有良好的调节作用，从而发挥其临床药理作用。

[1]中华人民共和国卫生部.保健食品检测与评价技术规范[Z].2003.

[2]Dunbar G L，Rylett R J，Schnidt B M，et al.Hippcampal choline activity correlates with spatial learning in aged rats[J].Brain Res，2008（604）：267～272.

[3]周颖瑜，陈冠林，许仕杰.周福生教授辨治更年期综合征经验介绍[J].新中医，2007，39（8）：12～13.

[4]田国庆，郭赛珊，卢贺起.补肾活血方对缺血再灌注脑损伤小鼠学习记忆功能及海马神经细胞凋亡的影响[J].中国中西医结合杂志，2003，23（2）:123～127.