桔梗药材及饮片的质量标准研究

笔雪艳，刘晓凤，张清波，仲昭庆

(1.黑龙江省食品药品检验检测所，黑龙江 哈尔滨 150001;2.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

桔梗(Platycodonis Radix)为桔梗科植物桔梗［Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC.］的干燥根，气微，味微甜而后苦。具有宣肺，利咽，祛痰，排脓之功效，用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛音哑，肺痈吐脓［1］。《中国药典》2005年版一部桔梗项下有鉴别和含量测定项目，但其含量测定以重量法测定其中的总皂苷，方法专属性不强，重现性不好。为了更好的控制桔梗药材及饮片的质量，本实验对全国收集的8批桔梗药材及5批桔梗饮片进行了水分、总灰分和浸出物的测定，并采用高效液相色谱法对桔梗药材及饮片进行了定量研究，制定了全面控制桔梗药材及饮片的质量标准。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪;蒸发光散射检测器(SEDEX 75)及DAD检测器;XWK－3A空气泵(天津市华生仪器分析厂);BP211D电子天平(德国Sartorius公司);乙腈为色谱纯;水为超滤水;其它试剂、试药均为分析纯;桔梗对照药材(批号121028－200507，中国药品生物制品检定所);对照品桔梗皂苷D(自制，纯度为98.6%);8批桔梗药材(来源见表1，经笔者鉴定均为桔梗科植物桔梗［Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC.］的干燥根);5批桔梗饮片(见表2，分别为浙江中医药大学中药饮片厂(3批)及哈药集团世一堂中药饮片公司(2批)加工)。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别 取本品粉末1g，加7%硫酸乙醇－水(1∶3)混合液20ml，加热回流3h，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙醚(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1。

图1 桔梗薄层色谱图

2.2 水分、总灰分及浸出物的测定

2.2.1 测定方法 水分测定参照《中国药典》2005年版一部附录IX H水分测定法第一法;总灰分测定参照《中国药典》2005年版一部附录IX K灰分测定法;浸出物测定参照《中国药典》2005年版一部附录X A浸出物测定法，用乙醇作溶剂照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定。

2.2.2 测定结果 8批桔梗药材及5批桔梗饮片的水分、总灰分及浸出物的测定结果见表1、表2。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，YMC－Pack ODS－A(250mm×4.6mm，5μm);流动相:乙腈 － 水(25∶75)［2］;检测器:蒸发光散射检测器;漂移管温度108℃，载气流速3.0 L/min，流速1.0ml/min。理论板数按桔梗皂苷D峰计算应不低于3000。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取桔梗皂苷D对照品适量，加甲醇制成每1ml含桔梗皂苷D 0.5mg的溶液，即得。

表1 桔梗药材中水分、总灰分、浸出物及桔梗皂苷D测定结果

表2 桔梗饮片中水分、总灰分、浸出物及桔梗皂苷D测定结果

2.3.3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)约2.0g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置水浴上蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇3ml使溶解，加硅胶0.5g拌匀，置水浴上蒸干，加于以氯仿－甲醇(9∶1)装好的硅胶柱(内径2cm，10g)上，以氯仿 － 甲醇(9∶1)50ml洗脱，弃去洗脱液，再以氯仿－甲醇－水(60∶20∶3)100ml洗脱，弃去洗脱液，继用氯仿 － 甲醇－水(60∶29∶6)100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，摇匀，即得。

2.3.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl，供试品溶液10～15μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。色谱图见图2。

图2 桔梗样品的HPLC图 1桔梗皂苷D

2.3.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液(0.501 2mg/ml)5μl，重复进样5次，桔梗皂苷D峰面积积分值的RSD为2.5%。

2.3.6 线性范围

分别精密吸取对照品溶液(0.501 2 mg/ml)2、5、10、15、20μl，注入液相色谱仪，以峰面积的常用对数值Y为纵坐标，以进样量的常用对数值X为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=1.738 2X+2.220 9，γ=0.999 6。结果表明，桔梗皂苷D在1.002 4～10.024 μg之间，其浓度的对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系。

2.3.7 重复性试验

取同一批桔梗药材样品(编号4)按供试品溶液制备方法平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件测定，测得桔梗中桔梗皂苷D的含量为0.12%，6次测定的 RSD为1.3%。结果表明:本方法的重复性良好。

2.3.8 稳定性试验

取同一批桔梗药材供试品溶液(编号4)，分别于0，4，8，40h测定，桔梗中桔梗皂苷 D含量的 RSD为0.9%，表明该供试品溶液在40h内稳定。

2.3.9 回收率试验

精密称取已知含量的同一批桔梗药材样品(编号4)约1.0g共6份，精密加入上述对照品溶液2.0ml，按供试品溶液制备项下方法操作，按上述色谱条件测定，平均加样回收率101.3%，RSD为4.4%。结果表明，本法的回收率良好。

2.3.10 样品含量测定 取8批桔梗药材及5批桔梗饮片依法测定，测定结果见表1～2。

3 讨论

实验所收集的药材为野生与栽培品种并存，具有一定的代表性;饮片的加工均为获得GMP认证的饮片加工企业。实验结果表明，桔梗药材及桔梗饮片浸出物及桔梗皂苷D含量各批次间最大值与最小值的差异不足2倍，且桔梗药材经过炮制制成桔梗饮片后，浸出物及桔梗皂苷D的变化亦不大。根据实验结果，桔梗药材的标准暂定为:水分不得过15.0%;总灰分不得过6.0%;浸出物不得少于17.0%;桔梗皂苷D不得少于0.10%。桔梗饮片的标准暂定为:水分不得过12.0%;总灰分不得过5.0%;浸出物及含量测定同药材。上述指标均为在2005年版《中国药典》基础上新增的控制指标。同时，为了在薄层色谱上取得最佳的色谱条件，将薄层色谱鉴别进行修订［3］，有利于更好地控制其药材及饮片的质量。

桔梗皂苷为桔梗的有效部位，以桔梗皂苷D为代表的三萜皂苷类成分为桔梗的主要及有效成分，并具有镇咳、祛痰、解热镇痛等与桔梗功能主治有关的药理作用［4］。以桔梗皂苷D为对照品对桔梗药材及饮片的质量进行控制，具有更强的专属性，含量测定方法的稳定、准确、重现性好。可用于桔梗药材及饮片的质量控制。

由于桔梗皂苷D只有一个C=C双键，无共轭结构，无强的发色基团，紫外吸收弱，且末端吸收在210nm有较大的干扰，使得检测灵敏度降低，因此选用蒸发光散射检测法检测。在供试品溶液制备的过程中，如果不使用硅胶柱，有时也可得到单一的色谱峰，但DAD检测器显示，在与桔梗皂苷D相同保留时间处色谱峰不纯。且通过改变流动相的组成及比例均达不到良好的分离效果，因此，将供试品采用正相硅胶柱分离后，在高效液相色谱仪上分离较好。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京:化学工业出版社，2005:259 －260.

［2］ 李伟，张晶，李慧萍，等.桔梗皂苷D对照品的制备［J］.中药新药与临床药理，2007，18(1):55－56.

［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典中药材薄层色谱彩色图集［S］.北京:人民卫生出版社，2009:633 －635.

［4］ 肖培根.中药志［M］.北京:化学工业出版社，2002:766－771.