超高效液相色谱－三重四极杆串联质谱法检测中药制剂和保健品中非法添加的醋酸氟轻松

许 奇，缪 刚

(江苏省苏州市药品检验所，江苏 苏州 215002)

醋酸氟轻松属糖皮质激素，具有抗炎、抗过敏、抗休克、免疫抑制等多种作用，但使用不当会引起胸闷、气喘、恶心、呕吐、肌无力等不良反应[1]。一些不法商人利用患者急于见效的心理，在中药制剂和保健品中非法添加激素，谋取暴利，对使用者的健康造成了威胁。笔者采用超高效液相色谱－三重四极杆串联质谱法检测用于皮肤及哮喘类疾病的中药制剂和保健品中非法添加的醋酸氟轻松，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters Acquity型超高效液相色谱仪，配有二元溶剂管理器、样品管理器、柱温箱、PDA二极管阵列检测器、Acquity TQD型串联四极杆质谱仪、Masslynx数据处理系统(美国Waters公司);Millipore Simpak型超纯水器(美国Millipore公司);AG245型电子天平(瑞士Mettler公司);HS 3120 D型超声波清洗器(天津恒奥有限公司)。醋酸氟轻松(批号为100010－200507，中国药品生物制品检定所);乙腈、甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 超高效液相色谱条件

色谱柱:Waters Acquity UPLC BEH C18柱(50 mm ×2.1 mm，1.7 μm);流动相:乙腈 － 水，梯度洗脱程序为 0 ～2.5 min 乙腈由19%增加至 23%，2.5～4.5 min乙腈由 23% 增加至 33%，4.5～6 min乙腈由33%增加至95%，6～7 min乙腈由95%减至19%;流速:0.5 mL/min;柱温:35 ℃;进样量:3 μL;检测波长:230 nm;紫外光谱范围:210～300 nm。

2.2 质谱条件

离子化方式:ESI+;锥孔电压:30 V;毛细管电压:3.5 kV;离子源温度:120℃;雾化气温度:350℃;雾化气流速:650 L/h;锥孔气

流速:50 L/h;扫描方式:多反应监测(MRM)。MRM选择的母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能量见表1。

2.3 溶液制备

精密称取醋酸氟轻松对照品10.8 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇超声溶解并定容，得对照品标准贮备液。精密吸取该标准贮备液10 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得对照品溶液。样品若为片剂或丸剂，则取适量，研细，精密称取1.0 g，置锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理15 min，冷至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.2 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液;样品若为胶囊剂，则精密称取内容物1.0 g，置锥形瓶中，同片剂或丸剂供试品溶液制备方法制备溶液，另精密称取胶囊壳1.0 g，加水10 mL，水浴加热使胶囊壳溶解，再加甲醇10 mL，超声处理15 min，冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.2 μm的微孔滤膜滤过，合并两滤液，即得供试品溶液;若样品为喷剂，则精密吸取0.5 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.2 μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。以甲醇为空白溶液。

表1 MRM分析的质谱参数

2.4 检测方法

2.4.1 醋酸氟轻松的色谱定性检测

有关糖皮质激素的色谱定性检测已有文献报道[2－4]。在色谱优化过程中，笔者发现采用文献[2]方法，大部分辅料和中药成分的色谱峰保留时间会在4 min以前，而醋酸氟轻松峰的保留时间为5.49 min，这对醋酸氟轻松的检出干扰不大。如果有中药成分干扰，则通过对比对照品峰的保留时间、紫外光谱图以及色谱峰的一级质谱图和二级MRM图，仍可以确定供试品中是否添加有化学成分。

2.4.2 醋酸氟轻松的串联质谱(MS/MS)定性特征

本法所检测的醋酸氟轻松易于加氢形成带正电荷的[M+H]离子峰，因此试验选用正离子检测方式，结合文献报道方法[4－5]，分析醋酸氟轻松可能的裂解方式如图1。醋酸氟轻松的母离子峰为 m/z 495.2，m/z 495.2的二级全扫描质谱分析表明，产生的主要碎片离子有 m/z 475.4，337.3。

图1 醋酸氟轻松的裂解方式

2.4.3 样品提取方法考察

为了减少操作步骤并获得尽可能高的提取率，笔者对样品的提取采用超声提取法，并分别考察了不同提取溶剂如甲醇、无水乙醇、乙腈 － 水(19 ∶81)、水和不同提取时间(10，15，20，25，30 min)的提取效果。结果表明，以甲醇为提取溶剂、超声提取15 min的提取效率最高，待测定成分提取完全。

2.5 样品检测结果

以从市场上随机购买的15批中成药和保健品作为样品，在相同的色谱质谱条件下，通过比较供试品溶液与对照品溶液的色谱峰保留时间、紫外光谱图、MS特征谱图和MRM图，确定供试品中是否添加了醋酸氟轻松。结果发现，1批逸美真菌清喷剂掺有醋酸氟轻松(图2－5)。

图2 高效液相色谱图

2.6 最低检出限确定

对未检出添加剂的样品添加一定质量浓度的对照品溶液，使之在同样条件下可以检出。按信噪比为 S/N=3计算，最低检出限确定为5 ng。

图3 二极管阵列紫外光谱图

图4 一级质谱图

图5 二级质谱MRM图

3 讨论

本试验建立的超高效液相色谱－三重四级杆串联质谱法，方法选择性强，灵敏度高，有效地提高了分析速度，可用于检测纯中药和保健品中非法添加的醋酸氟轻松。

[1]吴西梅，朱炳辉，钟志雄，等.镇咳类平喘中药中违禁添加的6种糖皮质激素的液相色谱质谱检测[J].分析测试学报，2009，28(1):55－58.

[2]马 强，王 超，王 星，等.超高效液相色谱法同时测定化妆品中的15种激素[J].色谱，2007，25(4):541－545.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:848.

[4]崔晓亮，邵 兵，赵 榕，等.超高效液相色谱－串联四极杆电喷雾质谱法同时测定牛奶中12种糖皮质激素的残留[J].色谱，2006，24(5):213－217.

[5]王传现，刘罡一，倪昕路，等.高效液相色谱－串联质谱法检测化妆品中糖皮质激素类违禁药物[J].分析仪器，2008，39(6):23－27.

[6]夏 瑞，车宝泉，张 吉.液相色谱－质谱法同时鉴别中药制剂中的15种糖皮质激素[J].色谱，2007，25(11):926－929.