复方五指柑胶囊毒理学研究

孙 虹 ，沈 琳 ，胡雅静 ，胡淑毅 ，许 睿 ，方永奇 ，李 翎

（1.国家中药现代化工程技术研究中心，广东珠海 519020；2.丽珠集团利民制药厂，广东韶关 512028；3.广州中医药大学第一附属医院临床实验中心，广东广州 510405）

复方五指柑胶囊是在部颁标准收载品种复方五指柑片的基础上研制而成的一种中药制剂，具有清热解表，燥湿止泻的功效，临床上用于治疗急性胃肠炎、风热感冒、痢疾等疾病[1-2]。本次试验对复方五指柑胶囊进行毒理学研究，观察小鼠灌胃给药的急性毒性反应以及大鼠连续给药2个月所产生的毒性反应，观察小鼠灌胃一次给予药物后所产生的急性毒性反应和死亡情况，了解药物不同剂量长期使用后可能对机体产生的毒性反应，毒性作用的靶器官及其恢复和发展情况，确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供参考。

1 材料与方法

1.1 药物

复方五指柑胶囊（每粒胶囊含3.0g 生药，丽珠集团利民制药厂，批号：20030416）。

1.2 仪器与试剂

雅培CEU-DYN3500R 型全自动血液分析仪 （美国雅培公司）；OLYMPUS AU600 型全自动生化分析仪 (日本奥林巴斯公司)。

1.3 动物及试验环境[3-4]

NIH 小白鼠20 只，雌雄各半，体重18～22g，合格证号：2002A022。SD 大鼠，体重150～200g，雌雄各半，每组20 只。由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：2002A024。动物房保持通风、干燥，室温18～25℃，湿度60%～80%，普通鼠料饲养，自由饮水。

1.4 小鼠急性毒性试验[5]

取20 只小鼠，雌雄各半，药物配成最大浓度50%，按0.8ml/20g体重（20g/20g 体重）灌胃给药。给药后连续观察7d，观察期间记录动物的毒性反应情况和死亡情况。

1.5 大鼠长期毒性试验[5]

取SD 大鼠80 只，随机分为4 组，每组20 只，大鼠连续2个月给予复方五指柑胶囊灌胃。受试药剂量分别为：复方五指柑胶囊高剂量、中剂量、低剂量（2.01、1.02、0.51g/kg）。对照组给予生理盐水，每日灌胃给药1次，观察一般状况。每周测量体重1次，并调整给药量。给药2个月后，每组处死一半动物并进行肉眼尸检，测量动物器官指数，进行病理、血液学、血液生化学检查。剩余动物停药继续观察2周后处死，并进行上述检查。

1.6 统计学方法

各组数据均计算组平均值±标准差，采用t 检验比较各给药组与对照组之间的差异，并且将指标数据与该种系大鼠的正常值范围比较，确定各项检查是否出现异常。

2 结果

2.1 急性毒性试验结果

20 只小鼠给予复方五指柑胶囊，观察7d，小鼠呼吸均匀，一般状态良好，活动、进食正常，皮毛均好，体重增加正常，无明显的毒性反应症状，动物无一例死亡，无法测出LD50，按给药量求小鼠最大耐受量。复方五指柑胶囊小鼠最大耐受量大于0.40g/20g 体重（20g/kg 体重），相当于临床推荐用量的370倍以上。在该剂量下，动物未见异常表现，情况良好，说明该药无明显急性毒性作用。

2.2 长期毒性试验结果

连续给予2个月复方五指柑胶囊后，大鼠活动基本正常，未出现明显毒性症状或死亡；肉眼尸检：各脏器无异常；动物器官指数检查、血液学检查、血液生化学检查及病理学检查，各项指标均在正常范围内，未见异常。给药组与对照组比较无显著性差异，且各组停药2周后，各项指标与对照组比较无显著性差异。心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、肾上腺、胸腺的病理组织学检查也未见明显病理性变化。

2.2.1 一般状况 在给药期间，动物毛发有光泽，活动自如，精神状态正常，摄食、粪便等未见异常。各用药组动物每周体重逐渐增加，与对照组比较无显著性差异，见表1。结果表明药物对动物体重增加无明显影响。

表1 长期给药对大白鼠体重的影响（±s，g）

表1 长期给药对大白鼠体重的影响（±s，g）

组别 0周 1周2周3周4周5周高剂量组中剂量组低剂量组对照组组别高剂量组中剂量组低剂量组对照组182.5 ±28.6 172.7 ±20.1 191.6 ±20.8 176.7 ±25.0 6周293.0 ±51.8 292.4 ±44.8 304.5 ±41.2 324.2 ±82.9 212.7 ±35.0 215.9 ±25.7 218.4 ±29.7 214.4 ±36.3 7周305.0 ±56.8 307.9 ±51.8 328.2 ±48.5 333.0 ±86.9 228.4 ±40.4 239.1 ±37.3 242.7 ±32.7 244.2 ±47.8 8周310.5 ±61.5 315.3 ±58.5 338.4 ±53.3 338.6 ±90.3 242.8 ±48.8 253.8 ±35.4 256.7 ±30.9 274.3 ±62.4 9周319.2 ±63.0 333.2 ±62.0 358.9 ±57.5 343.9 ±94.1 255.3 ±43.8 264.6 ±39.6 270.1 ±32.3 292.7 ±69.6 11周（停药2周后）345.0 ±81.0 353.5 ±93.7 352.2 ±63.3 341.1 ±91.4 266.3 ±45.7 273.4 ±41.0 283.8 ±34.6 304.3 ±75.9

2.2.2 血液分析 给药后各组大鼠血液分析指标的变化见表2、3。结果显示，给药2个月后，血液分析各项指标未见明显异常，与对照组比较无显著性差异。停药2周后，各项指标未见明显异常，与对照组比较无显著性差异。

表2 给药60d后大白鼠血液分析指标变化（±s）

表2 给药60d后大白鼠血液分析指标变化（±s）

组别 WBC（×109/L） NEU（×109/L）高剂量组中剂量组低剂量组对照组组别高剂量组中剂量组低剂量组对照组5.39 ±1.51 5.08 ±1.65 4.25 ±1.62 4.74 ±1.70 BASO（×109/L）0.033 ±0.024 0.043 ±0.077 0.014 ±0.012 0.024 ±0.026 0.99 ±0.26 2.06 ±1.10 1.29 ±0.62 1.21 ±0.48 RBC（×1012/L）7.40 ±0.60 7.42 ±0.48 7.49 ±0.56 7.83 ±0.76 LYM（×109/L）2.76 ±0.76 1.89 ±0.55 1.85 ±0.43 2.03 ±1.08 HGB（g/L）140 ±8.39 147 ±16.6 144 ±15.6 148 ±5.30 MONO（×109/L）1.24 ±0.59 1.03 ±0.41 0.85 ±0.29 0.95 ±0.61 HCT（×109/L）0.704 ±0.03 0.739 ±0.03 0.721 ±0.05 0.733 ±0.03 EOS（×109/L）0.038 ±0.025 0.075 ±0.025 0.068 ±0.041 0.060 ±0.047 PLT（×109/L）697 ±126 640 ±81.5 633 ±141 665 ±124

表3 停药14d后大白鼠血液分析指标变化（±s）

表3 停药14d后大白鼠血液分析指标变化（±s）

组别 WBC（×109/L） NEU（×109/L）高剂量组中剂量组低剂量组对照组组别高剂量组中剂量组低剂量组对照组4.54 ±0.95 5.43 ±1.87 3.77 ±0.93 4.02 ±0.90 BASO（×109/L）0.022 ±0.040 0.020 ±0.017 0.040 ±0.066 0.017 ±0.023 1.01 ±0.28 1.93 ±0.88 1.38 ±0.74 1.54 ±0.74 RBC（×1012/L）7.47 ±0.61 7.41 ±0.46 7.46 ±0.68 7.55 ±0.70 LYM（×109/L）2.56 ±0.82 1.85 ±0.46 1.71 ±0.75 2.04 ±0.55 HGB（g/L）144 ±20.8 145 ±22.5 144 ±17.3 155 ±19.7 MONO（×109/L）1.21 ±0.41 1.14 ±0.35 1.02 ±0.25 0.99 ±0.20 PLT（×109/L）679 ±155 678 ±119 633 ±124 623 ±89 EOS（×109/L）0.039 ±0.033 0.074 ±0.071 0.048 ±0.040 0.044 ±0.068 HCT（×109/L）0.75 ±0.06 0.75 ±0.05 0.71 ±0.04 0.74 ±0.04

2.2.3 血液生化学检查 给药后各组大鼠血液生化指标的变化见表4、5。结果显示，给药2个月及停药2周后，各项血液生化指标与对照组比较均无显著性差异。

2.2.4 器官指数测定 给药后各组大鼠器官指数的变化结果显示，各给药组与对照组比较，给药60d 与停药14d 后，大鼠的心、肝、脾、肺、肾等五种重要器官的器官指数与对照组比较均无显著性差异。

表4 给药60d后大白鼠血液生化学指标变化（±s）

表4 给药60d后大白鼠血液生化学指标变化（±s）

组别 BUN（mmol/L） CREA（μmol/L）高剂量组中剂量组低剂量组对照组6.74 ±0.54 7.07 ±1.16 6.61 ±0.60 6.82 ±1.30 54 ±5.09 59 ±5.63 55 ±4.08 61 ±7.42glu（mmol/L）6.21 ±1.56 5.64 ±0.49 6.06 ±0.68 5.85 ±0.44 ALP（μ/L）196 ±43.0 204 ±61.5 197 ±87.4 197 ±51.0 AST（μ/L） ALT（μ/L） TP（g/L） ALB（g/L）gLO（mmol/L）39.6 ±7.8 39.2 ±5.0 39.0 ±6.0 36.9 ±4.3 33.7 ±7.2 38.3 ±9.6 32.0 ±9.6 34.9 ±9.8 79.2 ±3.51 82.8 ±8.10 77.1 ±7.13 78.5 ±4.60 36.2 ±2.3 39.9 ±4.59 35.7 ±1.99 37.5 ±2.72 42.6 ±2.29 42.8 ±4.91 41.4 ±2.59 41.1 ±4.35

表5 停药14d后大白鼠血液生化学指标的变化（±s）

表5 停药14d后大白鼠血液生化学指标的变化（±s）

组别 BUN（mmol/L） CREA（μmol/L）高剂量组中剂量组低剂量组对照组6.86 ±0.93 6.68 ±0.44 6.54 ±0.61 6.76 ±0.81 55 ±5.47 56 ±5.95 56 ±4.31 56 ±5.15glu（mmol/L）5.99 ±1.42 5.79 ±0.95 5.87 ±0.28 5.61 ±0.46 ALP（μ/L）145 ±22.6 190 ±48.5 188 ±27.7 181 ±55.0 AST（μ/L） ALT（μ/L） TP（μmol/L） ALB（g/L）gLO（g/L）37.6 ±6.3 39.0 ±6.6 37.2 ±3.8 35.2 ±3.1 35.9 ±4.2 35.9 ±5.6 35.4 ±3.7 33.5 ±3.8 68.5 ±19.5 80.3 ±7.16 74.6 ±4.20 76.7 ±4.34 36.4 ±1.77 39.3 ±3.13 36.7 ±1.11 36.5 ±2.26 42.1 ±3.45 42.5 ±5.76 41.0 ±4.22 41.4 ±3.87

2.2.5 病理组织学检查 大体尸解：动物处死后，立即解剖，各组大鼠各脏器未发现有明显病变。病理检查：光镜下观察高、中、低剂量组，胶囊辅料组和对照组动物的心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、胸腺、肾上腺的组织切片。观察结果表明，长期给药60d 后，各剂量组动物各器官均未见明显异常。停药2周后，各组动物各器官亦未见异常。

3 结论

3.1 小鼠的急性毒性试验

复方五指柑胶囊小鼠最大耐受量大于0.40g/20g 体重（20g/kg 体重），相当于临床推荐用量的370倍以上。在该剂量下，动物未见异常表现，情况良好，说明该药无明显急性毒性作用。

3.2 大鼠的长期毒性试验

3.2.1 各用药组动物每周体重逐渐增加，与对照组比较无显著性差异，表明药物对动物体重增加无明显影响。

3.2.2 一般外观观察及肉眼尸检结果显示，无明显毒性反应。

3.2.3 复方五指柑胶囊给药60d 后，血液学检查、血液生化检查、动物器官指数等检查结果表明，各用药组动物与对照组比较，无显著性差异，所有指标均在正常范围内。

3.2.4 病理结果显示，长期给药后大鼠各器官中未发现毒副作用所引起的病理组织学改变。

综上所述，大鼠以复方五指柑胶囊连续灌胃给药2个月，各剂量组各项指标均未见异常。复方五指柑胶囊是一种毒副作用小、不易产生蓄积性毒性作用、安全有效的中药制剂。

[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1986:178,559,1122,1131.

[2]肖培根.新编中药志[M].北京:化学工业出版社,2002:457,701.

[3]郑虎占,董泽宏,佘靖.中药现代研究与应用[M].北京:学苑出版社,1998:1349,2365.

[4]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科技技术出版社,1996:561,1587.

[5]中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南（药学、药理学、毒理学）[S].北京：中国医药科技出版社,2005:203-205,194-198,205.