东莨菪碱及其制剂含量测定方法的研究进展

夏 天,石力夫,胡晋红(第二军医大学长海医院药学部,上海 200433)

东莨菪碱(scopolamine)是从颠茄(Atropa belladonna L.)、曼佗罗(Datura stramonium L.)及莨菪(Hyoscyamusniger L.)等茄科植物中提取分离的一种托品烷类生物碱,具有广泛的生理活性,为一种典型的M受体阻断剂,同时具有兴奋呼吸中枢的作用,临床主要用于全身麻醉前给药、镇静、止吐,对晕动症也有效[1,2]。目前,市场上有东莨菪碱片剂、注射剂、贴剂、胶囊剂等剂型,新的剂型和制剂如微囊,缓释、控释制剂将投放市场。为了不断完善现有剂型质控标准,并使之适应新剂型测定的要求,本文对东莨菪碱及其制剂的含量测定方法进行综述,以供参考。

1 紫外分光光度法

东莨菪碱分子结构中具有酯结构,对紫外光有较强的特征吸收,所以可以采用紫外分光光度法对东莨菪碱进行含量测定。张俊峰等[3]用紫外分光光度法测定了氢溴酸东莨菪碱注射液的含量,选择258 nm为测定波长,在0.2～1.2 mg/ml范围内,氢溴酸东莨菪碱的浓度与吸光度呈良好的线性关系,平均回收率为99.9%,RSD为0.4%。该法使用的仪器较为常见,操作方便。

2 薄层色谱法

薄层扫描法具有进样量少,操作简便,分离效果好等优点。闫凯侠等[4]采用薄层-比色法,用硅胶G板,以乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(17∶2∶1)为展开剂,以碘化铋钾溶液为显色剂,选用721A型分光光度计在415 nm处测定增率片中东莨菪碱的含量。此法对仪器的精密性要求不高,并具有分离好、专属性强等优点。

马长清等[5]用薄层扫描法测定复方洋金花擦剂中氢溴酸东莨菪碱的含量,采用羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为黏合剂的硅胶G板,展开剂为氯仿-甲醇-氨水(9∶1∶0.05),显色剂为改良碘化铋钾溶液。根据吸收光谱图,选用495 nm为样品波长,610 nm为参比波长,结果东莨菪碱在5～25 μ g范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.997 8),平均加样回收率为97.1%。样品的分离和含量测定结果都较满意,精密度和回收率实验均表明该方法实用,结果可靠,适用于常规分析,但其薄层显色剂用量难以准确控制,人为误差较大。

牛丽颖等[6]以薄层色谱法(双波长反射法锯齿型扫描)测定洋金花中东莨菪碱的含量,以乙酸乙酯-甲醇-浓氨水(17∶2∶1)为展开剂,将待测液在厚0.3 mm的硅胶G板展开,在测定波长505 nm、参比波长600 nm下进行扫描。实验结果表明该方法简便、准确,重现性好。

3 HPLC法

2010 版《中华人民共和国药典》采用HPLC法测定东莨菪碱含量,用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.25%十二烷基硫酸钠溶液(sodium lauryl sulphate,SLS,用硫酸调节 pH值至 2.5)-乙腈(60∶40)为流动相;检测波长210 nm。

目前已有大量文献报道采用HPLC法测定制剂中的东莨菪碱含量。如郑莉莉[7]用HPLC法测定金牛胶囊中东莨菪碱的含量。该法使用的色谱柱为 Hypersil ODS2(250 mm ×4.6 mm,5 μ m),流动相为乙腈-0.04 mol/L磷酸钠溶液(含0.01 mol/L SLS,用磷酸调 pH至 6.0)(50∶100),流速为1.0 ml/min,检测波长为 216 nm。东莨菪碱在0.01946～0.583 8 μ g范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.08%,RSD为4.17%。该法快速、简便,精密度好,灵敏度高。

周益芬等[8]用HPLC法测定氢溴酸东莨菪碱的含量和有关物质。使用 Inertsil C8色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5 μ m),流动相为乙腈-0.25%SLS溶液(用磷酸调pH至2.5)(4∶6),检测波长210 nm。结果氢溴酸东莨菪碱进样量在0.8～12.4 μ g与峰面积的线性关系良好(r=0.999 9);最低检测限为1.875 ng;最低定量限为6.008 ng。单一最大杂质含量为0.02%,有关物质总量为0.03%～0.07%。该法与目前药典收载的滴定法相比,专属性强,准确度和精密度均好,操作简便且相对环保。

刘建华等[9]用HPLC法测定止喘灵注射液中东莨菪碱的含量,采用Spherisorb-C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μ m),柱温 25 ℃,流动相 :甲醇-水(78 ∶22),含0.005%SLS,流速 1.0 ml/min,检测波长为210 nm。结果线性范围为0.6～4.2 μ g,回归方程为:Y=173 305 X+2 108(r=0.997 8)。平均回收率为98.94%,RSD为 1.03%。此法快速、灵敏、重现性好,能满足止喘灵注射液中东莨菪碱含量测定的要求。

Ceyhan等[10]以LC法测定药物中硫酸阿托品和氢溴酸东莨菪碱的含量。采用μ Bondapack C18色谱柱(300 mm×3.9 mm,10 μ m),流动相为甲醇∶水∶甲酸(165∶35∶1)(用三乙胺调节 pH至8.3),采用梯度洗脱法进行分离,流速:1.0 ml/min,采用光电二极管阵列检测器,检测波长为230 nm。结果硫酸阿托品和氢溴酸东莨菪碱浓度分别在10.38～ 1038 μ g/ml和 10.00 ～ 1034 μ g/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,该法准确、简单,重现性和灵敏度好。

易艳东等[11]用 RP-HPLC法测定金辛镇痛喷雾剂中氢溴酸东茛菪碱和硫酸阿托品的含量。使用Agilent Zorbax C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μ m),以乙腈-0.07 mol/L 磷酸钠溶液(含0.40%三乙胺,17.50 mmol/L SLS,用磷酸调pH至6.0)(42∶58)为流动相,流速:0.8 ml/min,检测波长:215 nm,柱温:40℃。结果氢溴酸东莨菪碱在1.00～5.00 μ g范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 9(n=5),平均回收率为 98.35%,RSD为1.68%(n=6);硫酸阿托品在2.94～14.70 μ g范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 7(n=6),平均回收率为97.71%,RSD为1.91%(n=6)。本法简便准确,灵敏度高,重复性好。

李晓燕等[12]使用HPLC法测定喘平滴丸中东莨菪碱的含量。采用Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μ m)为色谱柱,以甲醇-0.001 mol/L 磷酸(70∶30)(流动相含0.02 mol/L SLS)为流动相,检测波长为216 nm,流速:1.0 ml/min,外标法定量。结果东莨菪碱在0.028 5～0.285 μ g范围内与峰面积呈良好的线性关系,方法回收率为98.86%(n=6),RSD为2.54%。该法简便、准确,重复性好,可用于喘平滴丸中东莨菪碱的含量测定。

周益芬等[13]使用HPLC法测定氢溴酸东莨菪碱注射液的含量。采用的流动相为乙腈-0.25%SLS溶液(用磷酸调节pH至2.5)(40∶60),流速0.7 ml/min,Alltima C8色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μ m),检测波长208 nm,柱温为35 ℃。线性范围为 2.0～ 14.0 μ g(r=0.999 9),平均回收率为99.8%(n=9)。该法专属性强,灵敏准确,重现性好,为氢溴酸东莨菪碱注射液的质量控制提供了有效的检测方法。

吴克楠等[14]用HPLC法测定止喘灵气雾剂中东莨菪碱和盐酸克仑特罗的含量。采用Kromasil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5 μ m),流动相为乙腈-0.07 mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调节pH值至6.0)(18∶82),柱温:25℃,紫外检测波长:216 nm。结果东莨菪碱在 21.20～169.63 μ g/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.0%(n=9)。该法能在较短的时间内对这两种成分实现同时检测,是一种快速、简便、有效的分析方法。

4 毛细管电泳法

毛细管电泳法由于柱效高、分离速度快、样品量小等优点,近年来也有研究将这种方法应用于东莨菪碱的含量测定。童萍等[15]将毛细管区带电泳-安培检测装置联用,对中草药天仙子中主要成分阿托品和东茛菪碱进行分析测定。毛细管运行液为50 mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH为8.0),分离电压为12 kV,阿托品和东莨菪碱的峰高和浓度分别在1.0～40 mol/L和3.0～100 mol/L范围内呈良好的线性关系,检测限均为7.0×10-7mol/L,该方法灵敏且重现性好。

于燕莉等[16]采用高效毛细管电泳法对痹痛宁贴剂中东莨菪碱和乌头碱的含量进行测定。系统采用未涂层石英毛细管,以50 mmol/L pH6.0磷酸盐缓冲液(含20%无水乙醇)为电泳介质,进样压力2 kPa×5 s,分离电压8 kV,检测波长200 nm,操作温度30℃。结果制剂中两种生物碱能较好分离。加样回收率东莨菪碱为98.4%,乌头碱为96.6%,RSD分别为1.61%和1.17%(n=5)。该方法快速简便,灵敏度高,重现性好。

李霞等[17]建立区带毛细管电泳法分离测定莨菪浸膏片中4种莨菪烷类生物碱——阿托品、山莨菪碱、樟柳碱和东莨菪碱的含量,该方法采用未涂层石英毛细管柱,运行缓冲液:100 mmol/L Tris-磷酸(pH=8.6);进样压力:21 Pa×5 s;工作电压25 kV;温度25℃;检测波长202 nm。两样品测定间用0.1 mol/L氢氧化钠溶液与水冲洗2 min,运行缓冲液冲洗3 min,运行时间5 min。结果硫酸阿托品、氢溴酸山莨菪碱、樟柳碱和氢溴酸东莨菪碱浓度分别 在 2.05 ～41.04 μ g/ml(r=0.998 2)、2.04 ～40.72 μ g/ml(r=0.9958)、 2.05 ～41.0 μ g/ml(r=0.996 5)和 2.13 ～41.60 μ g/ml(r=0.9974)的范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为 99.2%、98.5%、95.1%和98.2%。此法快速、简便、准确、环保。

Gao等[18]用毛细管电泳-电化学发光检测法同时对洋金花中的两种活性成分进行测定。用电化学发光检测法检测时,检测电压为1.2 V,槽内溶液为5 mmol/L的三联(2,2-)吡啶钌(在发生电化学反应时是阿托品和东莨菪碱的有效共反应剂,可使分离和电化学参数都达到最佳状态),使用20 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH 8.48)时阿托品的检测限为5×10-8mol/L;使用50 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH 7.48)时东莨菪碱的检测限是1×10-6mol/L。阿托品电化学发光强度和迁移时间的RSD为5.16和0.17%,东莨菪碱为5.07和1.22%。该法成功地用于洋金花中生物碱的测定。此法简便快速,选择性好,灵敏度高,已应用于从植物中提取的托品烷类生物碱的测定和茄科植物的指纹图谱分析。

Yuan等[19]用非水毛细管电泳法、电化学发光和电化学法联合测定植物提取物中的阿托品、山莨菪碱和东莨菪碱。电泳缓冲液为乙腈和异丙醇的混合液(含1 mol/L的乙酸,20 mmol/L的乙酸钠,2.5 mmol/L高氯酸四丁铵)。结果阿托品、山莨菪碱和东莨菪碱的线性范围分别为0.5～50 μ mol/L(r=0.996),5 ～ 2000 μ mol/L(r=0.992)和 50 ～2000 μ mol/L(r=0.991)。3种生物碱的检测限分别为0.5、2和5 μ mol/L。该法简便快速,可用于洋金花中3种生物碱的测定,为以后中药的定量和定性分析提供可能性。

5 小 结

总之,东莨菪碱及其制剂的含量测定方法中,紫外分光光度法简便、快速,但是准确性较差,故其应用受到一定限制。薄层色谱法简单、经济、快速,但是分离效果、准确度和精密度等方面不如 HPLC法。从收集到的文献和应用范围来分析,HPLC法使用最多,其分辨率高、重复性好、精确度高、速度快,实验用色谱柱可反复使用,节约实验成本。70%以上的有机化合物都用HPLC法分析,尤其在高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物的分离分析中,HPLC法显示出更大的优势。由于HPLC法准确、精确,故更能准确地反映药物的药动学特性,从而为药物进入临床研究提供基础,为估算人体试验的最初剂量和确定药物的潜在临床不良反应提供监测指标。随着东莨菪碱研究的不断深入和分析手段的不断进步,相信现有的含量测定方法将会越来越完善,一些新的分析方法也会得到应用。

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