大蒜芦荟液消除R质粒的实验研究

项裕财

(皖南医学院 微生物学与免疫学教研室，安徽 芜湖 241002)

细菌中许多天然的质粒带有抗药性基因，如编码合成能分解破坏四环素、氯霉素、氨芐表霉素等的酶基因，这种质粒称为抗药性质粒，又称R质粒，带有R质粒的细菌就能在相应的抗生素存在下生存繁殖。R质粒已成为临床上的一个突出问题，它使许多药物不再对某些感染性疾病有效，给临床治疗带来了很大困难。人们试图寻找有效的R质粒消除剂，把耐药质粒(R质粒)从宿主菌株中消除掉，使其重新恢复对抗生素的敏感性。笔者经多种食物实验发现大蒜芦荟混合液对R质粒有消除作用。以下是大蒜芦荟混合液作为消除剂对痢疾杆菌 R质粒和大肠杆菌R质粒的消除实验报道。

1 材料

D15痢疾杆菌［耐氯霉素(CM)痢疾杆菌］、大肠杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌(本实验室提供)大蒜、芦荟(市场购买)、链霉素纸片、红霉素纸片、庆大霉素纸片、青霉素纸片、氯霉素纸片(杭洲微生物试剂有限公司，执行标准:ws/T125-1999)，含20 μg/ml CM 中国蓝培养基、含 20 μg/ml CM SS 培养基(本室提供)。

2 方法

2.1 R 质粒接合传递实验［1，2］取 D15 痢疾杆菌(供体菌)分别和大肠杆菌(受体菌)或/和痢疾杆菌(受体菌)各2滴于2 ml肉汤培养基中混匀，经37℃振荡培养2 h后分别接种于含CM的中国蓝培养基和含CMSS培养基，37℃培养18 h后，观察生长现象。

2.2 药物敏感实验［3，4］将大肠杆菌、痢疾杆菌、含R质粒大肠杆菌、含R质粒痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌分别密集接种于普通琼脂平板表面，用小镊子分别夹取链霉素纸片、红霉素纸片、庆大霉素纸片、青霉素纸片、氯霉素纸片、大蒜液、芦荟液等抗菌纸片置于上述培养基的相应区域内，37℃培养18 h。

2.3 大蒜芦荟混合液消除大肠杆菌R质粒和痢疾杆菌R质粒实验 将大蒜芦荟混合液按1∶1浓度分别注入含R质粒大肠杆菌菌液和含R质粒痢疾杆菌菌液内充分混匀37℃水浴4 h，而后用接种环分别接种于含CM中国蓝培养基和含CMSS培养基以及不含CM中国蓝培养基和不含CMSS培养基37℃培养18 h。

2.4 大蒜液消除含R质粒大肠杆菌和痢疾杆菌实验 取大蒜液分别作用于含R质粒的大肠杆菌菌液和痢疾杆菌菌液内充分混匀37℃水浴4 h，再用接种环各取1环分别接种于含CM中国蓝培养基和含CMSS培养基37℃培养18 h。

2.5 芦荟液消除含R质粒大肠杆菌和痢疾杆菌实验 取芦荟液分别作用于含R质粒的大肠杆菌菌液和痢疾杆菌菌液内充分混匀37℃水浴4 h，再用接种环取1环分别接种于含CM中国蓝培养基和含CMSS培养基37℃培养18 h。

3 结果

3.1 R质粒接合传递实验 在含CM中国蓝培养基有蓝色菌落生长和在SS培养基有红色菌落生长，说明D15痢疾杆菌R质粒经传递给大肠杆菌已成功。在含CM中国蓝培养基和含CM的SS培养基上形成无色的半透明小菌落生长，说明已形成耐CM的痢疾杆菌。没有经过接合传递实验的大肠杆菌和痢疾杆菌在含CM的中国蓝培养基和含CM的SS培养基上均不生长。见表1。

3.2 药物敏感实验 含R质粒的大肠杆菌和含R质粒的痢疾杆菌对氯霉素都耐药，不含R质粒的大肠杆菌和痢疾杆菌对CM高度敏感。大肠杆菌和痢疾杆菌均对大蒜液敏感，对芦荟液都不敏感，金黄色葡萄球菌对大蒜和芦荟都敏感。见表2。

3.3 大蒜芦荟混合液消除R质粒实验 经大蒜芦荟混合液作用的含R质粒的大肠杆菌和痢疾杆菌接种在含CM中国蓝培养基和含CMSS培养基上都不生长，而在不含CM中国蓝培养基和不含CMSS培养基都生长。见表3。

3.4 大蒜液、芦荟液分别消除R质粒细菌实验经大蒜液作用的含R质粒大肠杆菌和含R质粒痢疾杆菌、以及经芦荟液作用的大肠杆菌和痢疾杆菌在含CM中国蓝培养基和含CMSS培养基都有菌生长。

表1 细菌在含CM培养基生长情况

表2 药物敏感实验结果

表3 大蒜芦荟混合液消除R质粒细菌结果

4 讨论

质粒编码所产生的细菌耐药性和毒力等问题，给人类疾病治疗带来了很大困难，肠道耐药基因库的存在是肠道致病性耐药菌株流行的潜在危险。消除耐药质粒，使耐药菌株恢复敏感性，对于临床上治疗由耐药菌导致的感染和阻断耐药性和毒力的传播都有非常重要的意义。

本实验表明大蒜芦荟混合液对R质粒有消除作用(至于何因还需进一步研究)，提示它可以有效控制由质粒的传播所引起的耐药性的扩展、蔓延。而且大蒜芦荟是集食物药物的保健植物，具有杀菌消毒以及增强免疫力等功效［5］。

随着抗生素的应用日益广泛，细菌对一些常用的药物呈现不同程度的耐药性。对于那些应用时间越长、使用范围越广泛的药物，细菌的耐药性往往越严重［6～8］。在不断变化的外界环境中，细菌的质粒、转座子、噬菌体等通过接合、转化及转导等方式 ，相互间交换所携带的一些基因，可使菌群更好地适应环境。这是细菌在长期进化过程中所获得的生存本领。耐药基因最初可能起源于少数抗生素产生菌或细菌自身基因的随机突变，在抗生素广泛应用所形成的选择压力胁迫下，没有机会获得耐药基因的细菌不得不退出竞争，而有机会通过菌间交换获得耐药基因的细菌却能自如地生存［4，9］、繁衍形成耐药菌株。由于消化道是人体内的开放性通道，易受内外环境因素的影响，更是一些长期应用抗菌药物、免疫抑制剂、慢性疾病住院患者，医院感染的好发部位［10］。因此，选择有效的药物，控制耐药菌株的传播，阻断医院感染的发生，是我们一直在探索的问题。又由于许多研究提示［11～13］抗菌药物的使用过程实际上也是对耐药菌株的选择过程。故使得筛选天然物质阻断耐药菌株的传播，成为我们关注和研究的焦点。

［1］项裕财.R质粒的紫外线消除实验改进和体会［J］.皖南医学院学报，2001，20(2):154.

［2］李苌清，周岐新，凌保东.耐药质粒消除的研究概况与展望［J］.川北医学院学报，2003，18(2):168.

［3］刘毅华.医学免疫学微生物学实验与习题［M］.武汉大学出版社，1997:61.

［4］陆德源.医学微生物学［M］.第4版.北京:人民卫生出版社，1996:50.

［5］饮食养生全书/日知生活［M］.上海科学普及出版社，2008:33－124.

［6］陈群，陈菊南，王胜春.黄连对大肠杆菌R质粒消除作用的实验研究［J］.中国中西医结合杂志，1996，16(1):37.

［7］金冬燕，黎盂枫.分子克隆实验指南［M］.第2版.北京:科学出版社，1992:19.

［8］刘克，关键，李菁华，等.黄芩甙对铜绿假单胞菌R质粒的消除作用［J］.微生物学杂志，2003，23(2):49.

［9］陈军剑，陈 群.中药对R质粒消除作用的研究［J］.中国微生态学杂志，2003，15(2):120.

［10］杨烨建，张劲丰，蔡惠兴.肠道菌群失调原因菌耐药性调查及治疗探讨［J］.中华医院感染学杂志，2006，16(1):83 －85.

［11］韩伟，张铁，钟秀会.中药对细菌R质粒消除作用的研究概况［J］.中国畜牧兽医，2006，33(8):52.

［12］李凤云，韩俊，唐素兰.痢疾杆菌R质粒的检测消除及药物敏感试验［J］.蚌埠医学院学报，2000，25(3):161 －02.

［13］雷连成，韩文瑜，王兴龙.大肠杆菌质粒与喹诺酮耐药性关系的研究［J］.吉林农业大学学报，2001，23(2):89 －92.