愈溃生物黏附单向释药贴膜的质量标准研究Δ

段晓颖，高卫芳，平佳宜，张辉（.河南中医学院第一附属医院国家中医药管理局中药制剂三级实验室，郑州市 450000；.新乡医学院第一附属医院，卫辉市 45300）

愈溃生物黏附单向释药贴膜系由胡黄连、牡丹皮、青黛与冰片4味药组成，具有清热解毒、消肿散结、止痛、化腐生肌之功效，用于治疗口腔溃疡，疗效显著。该贴膜由具生物黏附性的载药层和在口腔中不溶解的背衬层复合而成，使药物仅向内侧释放，减轻了药物不适口味，增大了药物浓度梯度，使药物缓慢释放吸收，达到了长效及加快溃疡面愈合的目的。为了更有效控制该产品的质量，笔者对制剂中青黛、冰片、牡丹皮进行了薄层色谱（TLC）鉴别，并采用高效液相色谱（HPLC）法对胡黄连中胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ进行了含量测定。

1 仪器与试药

LC-10A HPLC仪、AEL-200电子天平（日本岛津公司）；CP225D电子天平（德国赛多利斯公司）。

胡黄连苷Ⅰ（批号：111727-200501）、胡黄连苷Ⅱ（批号：111596-200301）、靛玉红（批号：110717-200204）、芍药苷（批号：0736-9913）、冰片（批号：110743-200303）对照品均购自中国食品药品检定研究院；愈溃生物黏附单向释药贴膜（以下简称愈溃贴膜，河南中医学院第一附属医院制剂室自制，批号：091222、091212、091218、091228）；牡丹皮、冰片、胡黄连、青黛饮片（安徽亳州济人药业有限公司，批号分别为090306、090503、090306、090412）。

2 定性鉴别

2.1 牡丹皮的TLC鉴别

精密称取芍药苷对照品1.37mg，加乙醇1m L溶解，制成每1m L含1.37mg的溶液，作为对照品溶液；取本品50片（批号：091222），剪碎，加乙醇30m L，超声30m in，滤过，滤液蒸干，残渣加水30m L使溶解，滤过，滤液用水饱和的正丁醇萃取3次（20、15、15m L），分别取正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇2m L使溶解，加入0.5 g中性氧化铝，拌匀，装入预先装好的中性氧化铝柱（氧化铝100～200目，内径10mm）顶部，以甲醇40m L洗脱，收集洗脱液，挥干，残渣加乙醇0.5m L使溶解，作为供试品溶液；取缺牡丹皮的处方药材，按工艺制成缺牡丹皮阴性样品，同法制备缺牡丹皮阴性对照溶液。照TLC法[1]试验，吸取上述3种溶液各10µL，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。牡丹皮的TLC见图1。

2.2 青黛的TLC鉴别

精密称取靛玉红对照品0.91mg，加三氯甲烷制成每1m L含0.45mg的溶液，作为对照品溶液；取本品20片（批号：091222），剪碎，加三氯甲烷10m L，超声30min，滤过，滤液作为供试品溶液；取缺青黛的处方药材，按工艺制成缺青黛阴性样品，同法制成缺青黛阴性对照溶液。照TLC法[1]试验，吸取上述3种溶液各10µL，点于同一硅胶G薄层板板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。青黛的TLC见图2。

2.3 冰片的TLC鉴别

取冰片对照品2.0mg，加乙醇制成每1m L含2.0mg的溶液，作为对照品溶液；取本品20片（批号：091222），剪碎，加乙醚20 m L，密塞，冷浸30 m in，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇1 m L使溶解，作为供试品溶液；取缺冰片的处方药材，按工艺制成缺冰片阴性对照，同法制备缺冰片阴性对照溶液。照TLC法[1]试验，吸取上述3种溶液各5µL，点于同一硅胶G薄层板板上，以石油醚（60～90℃）-苯-乙酸乙酯（9∶4∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。冰片的TLC见图3。

图1 牡丹皮的TLC 1.芍药苷对照品；2.阴性对照；3～5.供试品Fig 1 TLC of Paeonia suffruticosa 1.paeoniflorin control；2.negative control；3～5.testsamples

图2 青黛的TLC 1.靛玉红对照品；2.阴性对照；3～5.供试品Fig 2 TLC of Indigo Naturalis 1.indirubin control；2.negative control；3～5.test samples

图3 冰片的TLC 1.冰片对照品；2.阴性对照；3～5.供试品Fig 3 TLC of Borneolum Syntheticum 1.Borneolum Syntheticum control；2.negative sample；3.testsamples

3 含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱：Agilent XDB-C18柱（150 mm×4.6mm，5µm）；流动相：甲醇-水-磷酸（35∶65∶0.1）；检测波长：275 nm；流速：1m L·min-1；柱温：25 ℃；进样量：10µL。

3.2 混合对照品溶液的制备

精密称取胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ对照品5.01、5.02mg，置25m L容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液1m L，置5m L量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1m L中含胡黄连苷Ⅰ40.08µg、胡黄连苷Ⅱ40.16µg）。

3.3 供试品溶液的制备

取本品30片，剪碎，称取0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50.0m L，密塞，称定重量，超声处理（功率：250W，频率：50 kHz）30m in，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀，取续滤液2.0m L置5m L容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3.4 阴性对照溶液的制备

取缺胡黄连的阴性样品，按“3.3”项下方法制备阴性对照溶液。

3.5 专属性试验

精密吸取各对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液适量，按上述色谱条件测定。结果表明，胡黄连供试品色谱中，在与胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ对照品色谱相同保留时间处有色谱峰出现，阴性对照无干扰。色谱见图4。

图4 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.胡黄连苷Ⅱ；2.胡黄连苷ⅠFig 4 HPLC chromatograms A.substance control；B.testsample；C.negative control；1.picrosidⅡ；2.picrosideⅠ

3.6 线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0m L，置5m L容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液。分别精密吸取上述溶液各10µL，按上述色谱条件测定。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，检测浓度（X，µg·m L-1）为横坐标，制备标准曲线，得胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ的回归方程分别为Y胡黄连苷Ⅰ＝2 408 171.25X胡黄连苷Ⅰ+5 921.7（r＝0.999 9）；Y胡黄连苷Ⅱ＝977 847.69X胡黄连苷Ⅱ+1 007.00（r＝0.999 9）。结果表明，胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ的检测浓度分别在0.08～0.40、0.12～0.60µg·m L-1范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系。

3.7 精密度试验

分别吸取混合对照品溶液10µL，按上述色谱条件测定，重复进样5次。结果，胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ峰面积的RSD分别为0.40%、0.28%（n均为5），表明仪器精密度良好。

3.8 稳定性试验

精密量取同一供试品溶液10µL，在室温下放置0、1、2、4、6、8、12、16、20、24 h，按上述色谱条件测定。结果，胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ峰面积的RSD分别为1.01%、1.47%（n均为10），表明供试品溶液在24 h内稳定。

3.9 重复性试验

精密称取同一批样品（批号：091228）6份，各约0.2 g，精密称定，按“3.3”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定。结果，胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ含量的RSD分别为1.97%、2.20%（n均为6），表明方法重复性良好。

3.10 加样回收率试验

称取已知含量的愈溃贴膜（胡黄连苷Ⅰ含量：8.3µg·g-1、胡黄连苷Ⅱ含量：20µg·g-1）0.1 g，置具塞锥形瓶中，精密称定，平行称取9份，分别精密加入80%、100%、120%的胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ对照品，按供试品溶液的制备方法操作，计算加样回收率。结果，胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ的平均回收率分别为100.24%、99.61%，RSD分别为1.72%、1.76%，n均为9。

3.11 样品含量测定

取3批样品（批号：091212、091218、091228），按上述方法测定胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ的含量，每个批号平行测定3次。结果，3批样品中胡黄连苷Ⅰ、胡黄莲苷Ⅱ的平均总含量分别为每片0.925、0.904、0.903mg。

4 讨论

牡丹皮中主要成分是丹皮酚，采用TLC法对其进行鉴别[2]，供试品色谱中，在与丹皮酚对照品色谱相应位置，阴性对照产生干扰。检索有关文献[3，4]，发现胡黄连中成分香草酸与丹皮酚分子结构式相似，这可能是导致阴性干扰的原因，因此未建立牡丹皮中丹皮酚的TLC鉴别方法，而改为鉴别牡丹皮中芍药苷。因供试品杂质干扰较大，影响芍药苷斑点的检视，故用氧化铝柱对供试品进行洗脱、精制，以消除背景干扰。

采用TLC法鉴别本品中牡丹皮、青黛、冰片，采用HPLC法测定胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ的含量，经方法学考察，证明方法灵敏、专属、快速，可用于愈溃贴膜的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录34.

[2]段晓颖，张 辉，高卫芳.复方牛蒡子含片质量标准研究[J].中国药房，2009，20（15）：1 158.

[3]郑启占，董泽红，余 靖，等.中药现代研究与应用[M].北京：学苑出版社，1998：3 232.

[4]国家中医药管理局中草药情报中心站.植物有效成分手册[M].北京：人民卫生出版社，1986：799、1 108.