紫外分光光度法测定葛根黄豆苷元自微乳中药物的含量Δ

张 娜，张 娜，康虞玲，杨更亮（河北大学药学院/河北省质量分析控制重点实验室，保定市 071000）

葛根黄豆苷元（daidzein），又名大豆苷元，提取于葛根，其化学成分为8-β-D-葡萄糖-4，7-二羟基异黄酮，1972年由我国人工合成。其具有治疗冠心病、高血压、高血脂，抗肿瘤与预防骨质疏松等多种药理作用[1]。但是由于该药脂溶性比较强、溶出速度慢、口服吸收差、生物利用度低，影响了药效的发挥。自微乳化药物传递系统（self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS）是一种新型药物传递系统，由油相、表面活性剂和助表面活性剂（不含或含少量水）构成。SMEDDS因能提高难溶性药物的溶解度，增加细胞膜的流动性，促进药物淋巴吸收，从而能够提高药物的口服生物利用度[2]。

葛根黄豆苷元自微乳为本实验室通过筛选、处方优化后制备的一种新制剂。为有效控制药品质量，确保临床疗效，笔者建立了采用紫外分光光度法测定葛根黄豆苷元自微乳药物含量的方法。该方法简便、快速、结果准确，可用于本品的质量控制。

1 仪器与试药

T6型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；万分之一电子天平（奥豪斯仪器（上海）有限公司）；KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，工作频率：40 kHz，功率：250 W）。

葛根黄豆苷元标准品（杨陵东科麦迪森制药有限公司，批号：HD080201，含量：98.63%）；葛根黄豆苷元自微乳（河北大学药剂实验室自制，批号：100304、100307、100311）；无水乙醇、聚乙二醇400（天津市华东试剂厂，分析纯）；乳化剂OP（天津市光复精细化工研究所，分析纯）；油酸乙酯（上海千为油脂科技有限公司，分析纯）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 标准品溶液 精密称取葛根黄豆苷元标准品25.0 mg，用无水乙醇溶解至100 mL，配成250 mg·L-1的标准品贮备液。用无水乙醇稀释适当倍数配制成浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、7.0 mg·L-1的标准品溶液。

2.1.2 空白自微乳溶液 精密称取乳化剂OP、聚乙二醇400、油酸乙酯各适量，37℃磁力搅拌（300 r·min-1）20 min即得空白自微乳。取适量空白自微乳，置于100 mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.3 供试品溶液 向空白自微乳中加入一定量干燥至恒重的葛根黄豆苷元，70℃超声振荡至药物完全溶解。取载药自微乳适量，置于100 mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 检测波长的确定

制备适宜浓度的标准品、供试品溶液。标准品溶液以无水乙醇为空白对照，供试品溶液以相同浓度的空白自微乳为空白对照，在200～600 nm波长范围内扫描。结果，二者均在250 nm波长处有最大吸收，故选择250 nm为检测波长。紫外扫描光谱见图1。

图1 紫外扫描图谱Fig 1 UV scanning spectra

2.3 标准曲线的制备

以无水乙醇为空白对照，用紫外分光光度计在250 nm波长处依次测定上述系列标准品溶液的吸光度。以吸光度（Y）为纵坐标，溶液浓度（X）为横坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝0.086 48X+0.008 13（r＝0.999 5，n＝5）。结果表明，葛根黄豆苷元检测浓度在0.5～7.0 mg·L-1范围内与吸光度呈良好线性关系。

2.4 精密度试验

取葛根黄豆苷元3.0 mg·L-1的标准品溶液适量，以无水乙醇为空白对照，在250 nm波长处连续测定吸光度5次。结果，RSD＝0.35%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验

取载药自微乳适量，用无水乙醇稀释至适宜浓度，平行配成6份同一浓度供试品溶液，以空白自微乳为空白对照，在250 nm波长处分别测定吸光度。结果，RSD＝0.47%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

取载药自微乳适量，用无水乙醇稀释至适宜浓度，以空白自微乳为空白对照，于0、1、2、4、8 h在250 nm波长处测定其吸光度。结果，RSD＝0.31%（n＝5），表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.7 加样回收率试验[3]

分别精密称取同一批次且已知含量的载药自微乳适量，共9份，分别置于100 mL容量瓶中，分别精密加入葛根黄豆苷元标准品适量，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，以空白自微乳为空白对照，按“2.3”项下方法测定，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

2.8 样品含量测定

按“2.1.2”项下方法制成载药的葛根黄豆苷元自微乳（标示量：2.20 mg·g-1）3批，按“2.1.3”项下方法配制成供试品溶液，按“2.3”项下方法测定吸光度，并计算含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2Results of content determination of samples（n＝3）

3 讨论

对自微乳中成分的检测，文献报道的方法多为高效液相色谱法，而本试验采用紫外分光光度法[4，5]，更简单、快捷，结果准确。本试验制备的葛根黄豆苷元自微乳在无水乙醇中溶解性能很好，且制备中所用的乳化剂及助乳化剂在250 nm波长处不影响葛根黄豆苷元的含量测定。

综上，本法样品处理简便、去除干扰效果好、专属性强，可用于自微乳药物制剂的快速分析。

[1] 王艳梅，吕立勋.黄豆苷元的药理作用及临床应用[J].中国药师，2007，10（9）：910.

[2] 李剑惠，胡 英.HPLC测定槲皮素自微乳中槲皮素的含量[J].华西药学杂志，2006，21（5）：489.

[3] 邵红燕，王封锐.琥乙红霉素颗粒溶出度的测定[J].中国药房，2010，21（25）：2 378.

[4] 叶建新，陈 杰.紫外-可见分光光度法测定豆腐果苷片中间体中豆腐果苷的含量[J].中国药房，2009，20（19）：1 501.

[5] 吕长淮.格列齐特片（Ⅱ）鉴别与含量测定方法改进[J].中国药房，2007，18（25）：1 977.