HPLC 法同时测定复方阿托伐他汀钙分散片中2组分含量

袁如彩，邵珠民，姬怀雪，王福贵#，邵茜（.徐州医学院附属医院药剂科，徐州市00；.徐州医学院药学院，徐州市 004）

氨氯地平（Amlodipine）系二氢吡啶类钙拮抗药，其选择性抑制钙离子跨膜进入平滑肌细胞和心肌细胞，对平滑肌的作用强于心肌；绝对生物利用度为64%～90%，不受饮食影响，适用于治疗高血压以及心绞痛，尤其是非劳力性心绞痛[1]。在国家药品标准[2]和文献[3，4]报道中，苯磺酸氨氯地平片的含量测定主要采用高效液相色谱（HPLC）法。阿托伐他汀（Atorvastatin）为第2代选择性3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMGCoA）还原酶抑制剂，通过抑制HMG-CoA还原酶和胆固醇在肝脏的生物合成而降低血浆中胆固醇和甘油三酯水平，是目前常用的调脂调血压的药物[5]，用于各型高胆固醇血症和混合性高脂血症治疗以及冠心病和脑卒中的防治。阿托伐他汀钙的含量测定方法已有文献报道[6，7]。复方阿托伐他汀钙分散片是由苯磺酸氨氯地平和阿托伐他汀钙组成的制剂，是首个同时治疗高血压与高血脂2种不同疾病的复方制剂。为控制该复方制剂的质量，笔者根据2种成分的性质及上述文献报道的测定方法，建立了采用HPLC法同时测定2组分含量的方法，结果表明所建立的方法简便、灵敏、准确，可用于复方阿托伐他汀钙分散片的含量测定。

1 仪器与试药

HPLC仪，包括1525二元高压梯度泵、717自动进样器、2487双波长检测器（美国Waters公司）；FA1004B分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；KS-80D型超声波清洗机（宁波海曙科生超声设备有限公司）；XW-80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；UV-2401PC紫外可见分光光度计（日本岛津公司）。

苯磺酸氨氯地平（以下简称氨氯地平）对照品（批号：20090201，纯度：99.8%）、阿托伐他汀钙（以下简称阿托伐他汀）对照品（批号：20091201，纯度：99.6%）、复方阿托伐他汀钙分散片（批号：20090312、20100720、20101201，规格：每片含氨氯地平、阿托伐他汀分别为5、10 mg）均由某药业有限公司提供；其他辅料均为药用级；甲醇、乙腈均为色谱纯，磷酸二氢钾、醋酸均为分析纯；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters XTerra RP18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.03 moL·L－1磷酸二氢钾溶液＝58∶42，流速：1.0 mL·min－1；检测波长：240 nm；灵敏度：2.000 AUFS；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备。精密称取氨氯地平、阿托伐他汀对照品各适量，分别置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；经折算后得二者贮备液浓度分别为0.772 9、1.857 mg·mL－1，混匀。

2.2.2 供试品溶液的制备。取同一批号复方阿托伐他汀钙分散片20片，精密称定，置于干燥洁净的研钵中充分研磨均匀，精密称取（约相当于氨氯地平5 mg）片粉，置于50 mL容量瓶中，加入适量甲醇充分溶解，超声处理10 min，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液即得。

2.2.3 辅料溶液的制备。按复方阿托伐他汀钙分散片处方比例混合各辅料，精密称取相当于复方阿托伐他汀钙分散片1片所用辅料的量置于50 mL容量瓶中，加入适量甲醇充分溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液即得。

2.3 系统适用性试验

分别吸取对照品溶液、供试品溶液和辅料溶液适量，置于10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，结果氨氯地平的保留时间约为3.6 min，阿托伐他汀的保留时间约为5.8 min，辅料对主成分测定无干扰，色谱见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 线性关系考察

准确量取“2.2.1”项下对照品溶液50、100、200、400、800 μL，分别置于不同的10 mL容量瓶中，用流动相稀释，摇匀，得氨氯地平浓度为3.86、7.73、15.46、30.92、61.83 μg·mL－1和阿托伐他汀浓度为9.28、18.57、37.14、74.28、148.56 μg·mL－1的溶液。按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，分别以氨氯地平、阿托伐他汀峰面积（A）为纵坐标，浓度（c）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：A氨氯地平＝ 59 146c+12 031（r＝0.999 9，n＝5）、A阿托伐他汀＝51 975c－21 447（r＝0.999 9，n＝5）。结果，氨氯地平、阿托伐他汀检测浓度线性范围分别为3.86～61.83、9.28～148.56 μg·mL－1。

2.5 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液适量，用流动相稀释成含氨氯地平7.73 μg·mL－1、阿托伐他汀18.57 μg·mL－1的溶液，按“2.1”项下色谱条件分别连续进样5次。结果，氨氯地平峰面积的RSD为0.49%；阿托伐他汀峰面积的RSD为0.31%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液适量，用流动相稀释成适当浓度，在室温下放置，分别于0、2、4、6、8、12 h进样测定。结果，氨氯地平、阿托伐他汀峰面积的RSD分别为0.53%、0.38%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.7 回收率试验

按分散片处方组成精密称取相当于1片量的辅料共6份，每2份1组，每组分别按照氨氯地平/阿托伐他汀（5 mg/10 mg）的低（80%）、中（100%）、高（120%）浓度加入“2.2.1”项下的对照品溶液，置于50 mL容量瓶中，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液；取供试品溶液适量，置于10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，结果见表1（表中“氨”指氨氯地平，“阿”指阿托伐他汀）。

表1 回收率试验结果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（sn＝6）

2.8 样品的含量测定

取3批样品各1份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件分别进样测定氨氯地平、阿托伐他汀的含量。结果，3批样品中以氨氯地平计算，分别为标示量的99.8%、98.7%和98.9%；以阿托伐他汀计算，分别为标示量的102.1%、101.3%和101.5%。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

分别取氨氯地平、阿托伐他汀对照品适量，用甲醇溶解并稀释，进行紫外扫描，结果氨氯地平在238、360 nm波长处均有最大吸收，阿托伐他汀在245 nm波长处有最大吸收；根据紫外吸收峰的高低和分散片中氨氯地平5 mg和阿托伐他汀10 mg的处方组成情况，最终选择240 nm作为检测波长，结果优于文献[4]报道的测定波长237nm。

3.2 流动相的选择

文献[4]选择用磷酸调pH＝2.5的磷酸盐缓冲液组成流动相，文献[6]选择pH为8.5的磷酸盐缓冲液组成流动相，但pH值较低或较高都对色谱柱损害较大。也有文献[7]选择醋酸调pH的醋酸盐缓冲液，但醋酸易挥发使流动相的pH值不稳定，影响色谱峰的位置。最终，笔者选择0.03 moL·L－1磷酸二氢钾溶液为流动相的水相，测得其pH值约为4.8，分离结果较理想。

笔者曾选择甲醇-水、乙腈-0.05%醋酸、乙腈-磷酸盐缓冲液等作为流动相系统进行试验，并调节各成分的不同比例。结果，乙腈-0.03 moL·L－1磷酸二氢钾（58∶42）作为流动相系统，色谱峰形较好，2组分完全分离，且片剂辅料不干扰2组分的分析。

本试验结果表明，所建立的同时测定复方阿托伐他汀钙分散片中2组分含量的方法，可较好地控制该分散片的质量。

[1] 李家泰.临床药理学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2007：1 363.

[2]WS1-（X-010）-2001Z，苯磺酸氨氯地平片国家药品标准[S].2001：869.

[3] 汪正宇.苯磺酸氨氯地平片的HPLC测定[J].安徽医药，2006，10（8）：581.

[4] 李成平，严小平，单伟光.苯磺酸氨氯地平片剂含量的高效液相色谱法测定[J].药物分析杂志，2006，26（12）：1 878.

[5] 杨娇妹，曾德明.阿托伐他汀治疗急性冠状动脉综合症的疗效分析[J].现代生物医学进展，2008，8（2）：317.

[6] 封宇飞，刘志鹤，吴学军，等.毛细管区带电泳法测定阿托伐他汀钙片的含量及降解产物[J].中国药学杂志，2003，38（6）：456.

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