大黄总提物的大鼠亚急性毒性*

柴宝娟，李 祥，陈建伟

南京中医药大学药学院，南京 210046

大黄为临床常用中药，近年来有文献报道大黄蒽醌类成分主要对肾脏有毒性，对肝脏毒性较小[1-3]。大黄临床上常经过配伍或炮制后给药，本课题组为考察大黄配伍之后能否降低大黄肝肾毒性，预先考察大黄产生明显肝肾毒性的毒性剂量，从而设计本实验，观察大黄总提物对大鼠亚急性毒性影响。为充分暴露大黄的整体毒性，本实验采用醇提与水提相结合的方式，制备大黄总提物，考察不同剂量下给予大黄总提物一个月后对大鼠肝肾的影响，从而为后期大黄配伍减毒时的大黄药理剂量打下基础，并为大黄临床合理用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

大黄购于安徽丰原铜陵中药饮片有限公司，经本文作者陈建伟鉴定为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.的干燥根及根茎。

大黄总提物的制备方法:将大黄粉碎得粗粉，加10倍95%乙醇加热回流3次，每次1h，合并滤液浓缩得醇提液，滤渣挥去乙醇，加10倍量水，加热提取1h，滤液与醇提液合并，减压干燥得总提物。大黄总提物为棕色粉末，得率为49.1%。以0.5%羧甲基纤维素钠(CMCNa)将其研磨配成相应浓度的混悬液供试验用。

1.2 试验动物

实验采用上海斯莱克实验动物有限公司提供的清洁级SD大鼠40只，雌雄各半，体重180～220 g，合格证号:SCXK(沪)2007-0005。

1.3 仪器

Dimension Xpand全自动生化仪 （美国杜邦公司）；ADVIA 120全自动血液分析仪 （Bayer公司）；台式离心机TGL-16B（上海安亭科学仪器厂）等。

1.4 试验方法

经环境适应性饲养1周后，将动物随机分为4组，每组大鼠雌雄各5只。试验按2010版《中华人民共和国药典》规定人用大黄最高剂量（0.25g·kg-1·d-1）[4]的等效量的2倍、4倍、8倍设3个剂量组（人等效量参考文献[5]），分别为 3.0、6.0、12.0 g·kg-1·d-1（生药），同时设正常对照组。大鼠按每100g体重灌胃给药2 mL受试药混悬液，每天1次，连续给药30天。正常对照组给予同体积的0.5%CMC-Na溶液。试验动物每周称体重1次，根据体重变化调整给药量。实验期间动物自由进食饮水，每天观察动物的一般状况。末次给药禁食不禁水24 h后，眼眶静脉取血作血常规及生化指标测定，动物取血后处死，取出脾脏、胸腺、肝、肾组织进行观察和称重。

1.5 观察指标

1.5.1 一般检查 每天观察动物的一般状况:精神状态、反应、行为活动、排便情况、毛色、清洁度等。

1.5.2 血液学检查 末次给药禁食不禁水24 h后，眼眶取血1 mL，加入肝素钠抗凝，测定下列指标:红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、红细胞压积(HCT)；白细胞计数(WBC)、淋巴细胞相对计数(LY)、中性粒细胞相对计数(NE)、单核细胞相对计数(Mon)。

1.5.3 血液生化指标检查 末次给药禁食不禁水24 h后，眼眶取血4 mL，离心分离血清，用全自动生化仪测定天门冬酸转氨酶 (AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)。

1.5.4 病理检查 大鼠解剖观察，对各脏器进行肉眼观察，将脾脏、胸腺取出称重，计算脏器指数（脏器重量/体重）；取肝、肾组织，用10%中性甲醛溶液固定，脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，镜检。

1.6 统计学分析

2 结 果

2.1 一般形态观察

给药组大鼠在给药后即排软便，粪便颜色呈棕褐色，尿液颜色呈微黄。中、高剂量组在给药2周后大鼠活动差，进食少，尿液呈深黄色，排稀便，粪便颜色灰黄色，皮毛竖立无光泽，污秽；低剂量组给药3周后皮毛清洁度较差，活动减少，精神不佳，尿液呈黄色，软便，粪便颜色呈棕黄色。

高剂量对大鼠体重增长有抑制作用，给药30天后雄性大鼠体重与对照组相比有差异，给药1周后低剂量组雌性大鼠体重与对照组相比有显著差异 （P＜0.05），1 周后体重增长与对照组无显著差异（P＞0.05）。

2.2 大黄总提物对大鼠血液学指标的影响

结果见表1。给药30天后高剂量组动物的Mon升高，各剂量组其余所检指标与对照组相比均无显著差异(P＞0.05)。

2.3 大黄总提物对大鼠血液生化指标的影响

结果见表2。给药30天后高剂量组AST、ALT均显著高于对照组 （P＜0.01），Crea与对照组相比略有降低 （P＜0.05），BUN与对照组相比无差异；中、低剂量组与对照组相比，各指标无统计学差异。

表1 大黄总提物给药30天对大鼠血液细胞学指标的影响（，n=10）

表1 大黄总提物给药30天对大鼠血液细胞学指标的影响（，n=10）

注:与对照组比较:*P＜0.05，**P＜0.01

表2 大黄总提物给药30天对大鼠血液生化指标的影响（，n=10）

表2 大黄总提物给药30天对大鼠血液生化指标的影响（，n=10）

注:与对照组比较:*P＜0.05，**P＜0.01

2.4 大黄总提物对脏器指数的影响及病理组织学检查状况

给药30天后，脾脏、胸腺的脏器系数与对照组比较无显著性差异。组织学检查表明，给药30天后，高剂量组出现2例肝脏弥漫性肝细胞重度水肿，胞浆疏松淡染，1例肝脏轻度水肿；中剂量组出现1例肝脏弥漫性肝细胞轻度水肿；低剂量组未见肝脏病变。各组肾脏和对照组相比未见明显的病理改变。结果见图1。物质基础还有待研究。

3 讨 论

目前认为大黄的毒性成分为蒽醌类成分，本课题组前期研究[6]表明，大黄配伍后总蒽醌与结合蒽醌的量均有不同程度的降低，游离蒽醌降低较少，提示大黄配伍后可能会降低肝肾毒性，具体的减毒

图1 大鼠肝组织病理切片图(HE×200)

实验中在测定大黄对血液细胞学指标的影响时，中剂量组有4个样本出现不同程度的血块，从而造成结果低于对照组，可能是由于取血时采用的肝素抗凝效果不佳，取血过程中造成污染引起的。此外，本实验中高中低剂量普遍不呈现剂量关系，可能由于设定的组间差距不够大以及动物间个体差异引起。

实验结果说明大黄低剂量（3 g·kg-1）连续给药30d，对大鼠的肝肾不会产生毒性作用，当剂量达到12 g·kg-1时，大鼠 ALT、AST显著性升高，病理显示肝脏出现弥漫性水肿，对大鼠的肝脏毒性作用较明显。各剂量组肾脏未显示病理病变。张陆勇[7]等对SD大鼠行大黄总蒽醌灌胃13周后，高剂量组即出现肾脏近曲小管上皮细胞不同程度肿胀变性。推测本实验未检测出肾脏毒性，可能是由于实验周期不够长。王伽伯等[8]观察大黄不同炮制品对小鼠肝肾毒性的影响，发现生大黄最大给药量（76 g·kg-1·d-1）给小鼠连续灌胃14天，出现肝肾损伤，炮制品毒性较小。本实验未出现肾毒性，也可能由于大黄剂量不足引起。

当大黄剂量达到 6 g·kg-1·d-1（相当于人最高等效剂量的4倍）时，即对大鼠产生肝毒性，高剂量时测定Crea与对照组相比降低，可能是由于大鼠给予高剂量大黄后活动明显减少，肌肉代谢降低，产生的肌酐量降低引起。本实验提示，临床大黄的最大使用量应不超过30 g·d-1，服药周期不超过一个月。

[1]王青秀，廖明阳，吴纯启.大黄及其主要成分的毒性毒理研究[J]. 毒理学杂志，2007，21(4):301.

[2]笪红远，江振洲，王翠芬，等.大黄酸和大黄素在体外对人肾小管上皮细胞的毒性作用研究[J].中草药，2009，40(1):102-5.

[3]雷 湘，陈 刚，陈科力，等.大黄素对小鼠的急性毒性研究[J]. 中药药理与临床，2008，24(1):29.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:中国医药科技出版社，2010:23.

[5]黄继汉，黄晓晖，陈志扬，等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算 [J].中国临床药理学与治疗学，2004，9(9):1069-72.

[6]秦 云，李 祥，陈建伟，等.大黄中蒽醌类成分配伍前后的量变规律[J].中国实验方剂学杂志，2010，16(5):94-8.

[7]张陆勇，江振洲，濮存海，等.大黄总蒽醌对SD大鼠灌胃给药的长期毒性研究[J].中国生化药物杂志，2004，25(4):206-9.

[8]王伽伯，马永刚，张 萍，等.炮制对大黄化学成分和肝肾毒性的影响及其典型相关分析[J].药学学报，2009，44(8):885-90.