高效液相色谱法测定嘎日迪五味丸中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱含量

王 岩，刘欣欣

(1.沈阳药科大学药学院，辽宁 沈阳 110016; 2.辽宁普诚医药有限公司，辽宁 沈阳 110014)

嘎日迪五味丸为1998年版《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》收载的方剂，主要由制草乌、诃子、人工麝香、水菖蒲和木香组方，是治疗风湿、头痛、白喉、炭疽、坏血病、瘰疬疮疡、疥癣等的一种蒙药制剂。在文献[1－2]的基础上，笔者采用高效液相色谱法对嘎日迪五味丸中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的含量进行了测定，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－10AT高效液相色谱仪，Anstar工作站;BS124S型电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司);BU3120型超声仪。嘎日迪五味丸(内蒙古库伦蒙药厂，批号为090901);乌头碱、中乌头碱和次乌头碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号为0720－9807，0799－9403，0798－9403);甲醇、氯仿、三乙胺为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Symmetry C18柱(150 mm × 4.6 mm，5μm);流动相:甲醇 －水 －氯仿 －冰醋酸 －三乙胺 (50∶50∶2∶1∶0.6);检测波长:254 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL;柱温:25 ℃。

2.2 溶液制备

精密称取乌头碱、中乌头碱和次乌头碱对照品适量，加水溶解制成每1 mL溶液分别含乌头碱、中乌头碱和次乌头碱90 μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。称取那嘎日迪五味丸剂粉末约25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，滴加5滴氨水，加无水乙醚100 mL，超声振荡30 min，放置3 h，过滤，残渣用无水乙醚25 mL洗涤3次，合并滤液，回收溶剂，残留物用二氯甲烷溶解，定量转移至1 mL量瓶中并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按处方制备不含草乌的样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察[3－4]:准确量取对照品溶液 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mL，分别置1 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，分别取10 μL进样分析。以对照品峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标进行线性回归，乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的回归方程分别为 A1=2.084×106C+3.120 × 104，A2=1.827 × 106C+1.680 × 104，A3=1.618 ×106C －3.970 ×104，相关系数 r分别为 0.9996，0.9998，0.9998。结果表明，乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的质量浓度均在9.0～45.0 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

回收率试验:精密称取样品(批号为090901)粉末9份，每份25 g，分别加入一定量的对照品，按供试品溶液制备方法操作，在上述色谱条件下进样，计算回收率。结果见表1。

表1 乌头碱、中乌头碱和次乌头碱回收率试验结果(n=6)

重现性试验:取同一批样品，依法制备供试品溶液6份并测定含量。结果乌头碱、中乌头碱和次乌头碱含量的 RSD分别为0.82%，0.64% ，0.77%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:吸取同一供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8，12 h 时测定。结果乌头碱、中乌头碱和次乌头碱面积的 RSD分别为0.88%，0.94%，1.02%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定性较好。

2.4 样品含量测定

取批号为090901的样品，照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，依法测定样品中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的含量(mg/g)。结果样品中乌头碱含量为0.00186%，中乌头碱含量为0.00562%，次乌头碱含量为0.00513%。

3 讨论

高效液相色谱法测定制剂中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱含量的研究较多，多以甲醇－氯仿－水和乙腈－氯仿水系统为主，但嘎日迪五味丸药味较多，单纯的上述流动相均难以分离测定。文献[3]报道，流动相中加入三乙胺等碱性调节剂。经试验发现，在选用的色谱条件下加碱性调节剂可以改善色谱峰的对称度，但乌头碱、中乌头碱和次乌头碱保留时间附近色谱峰的分离度不令人满意。为此在流动相系统中加入少量的冰醋酸使形成缓冲盐溶液，结果使嘎日迪五味丸中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的峰形、与其他物质的分离度等均达到了含量测定的要求。

在试验过程中，使用的检测器是紫外－可见光检测仪，由于乌头类生物碱结构中只有1个苯环结构，因此其摩尔吸光系数较小，在制作标准曲线时对照品溶液的质量浓度需较高。在本试验中使用的高效液相色谱仪及反相色谱柱，测定乌头类生物碱的含量时，进样量(体积)对其色谱行为有较大的影响。在进样量较小时，才能得到较好的色谱峰。因此，采用人为控制进样量，通过多次进样(RSD＜2%)，取平均值。文中所用方法简单、可行，重现性好，适用于嘎日迪五味丸中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的含量测定。

[1]韩国忠，白玉霞.蒙药嘎日迪五味丸研究概况[J].内蒙古民族大学学报(自然科学版)，2009，24(5):563 －565.

[2]李丽敏，王欣美，王 柯，等.RP－HPLC测定镇痛活络酊中3种乌头类生物碱含量[J].中成药，2008(12):1785－1789.

[3]陶淑娟，邵太丽，毕开顺.RP－HPLC法测定蒙药那如3味丸中乌头类生物碱含量[J].沈阳药科大学学报，2005，22(3):197－199.

[4]陈晓颖，梁基智，梁松庆，等.高效液相色谱法测定舒络灵酊剂中次乌头碱的含量[J].广东药学院学报，2008(2):106－107，111.