双波长反相高效液相色谱法测定柴辛鼻敏康颗粒中芍药苷和阿魏酸含量

王晓飞，于 玲，葛海生，柴江平

(1.中国人民武装警察部队药品仪器检验所，北京 102613;2.中国中医科学院广安门医院，北京 100053)

柴辛鼻敏康颗粒是由川芎、赤芍等多味中药加工而成的中药颗粒制剂，临床用于过敏性鼻炎，疗效显著。为保证和控制该制剂的质量，笔者采用双波长反相高效液相色谱(RP－HPLC)法同时测定了赤芍中芍药苷和川芎中阿魏酸的含量，报道如下。

1 仪器与试药

HP1050型高效液相色谱仪及其色谱工作站。芍药苷对照品(批号为 110736－200703)，阿魏酸对照品(批号为 110773－200611)，均购于中国药品生物制品检定所;柴辛鼻敏康颗粒(批号为 20100513，20100609，20100711，医院自制);乙腈、甲醇为色谱纯，其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Shiseido ODS 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －0.1%磷酸溶液(20 ∶80);检测波长:λ1=230 nm，λ2=320 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

称取60℃减压干燥5 h的芍药苷对照品约12.5 mg，精密称定，置5 mL棕色量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品贮备液A;称取阿魏酸对照品约8 mg，精密称定，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品贮备液B;分别精密吸取两种对照品贮备液各1 mL，置5 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用滤膜(0.45 μm)滤过，作为对照品溶液(约含芍药苷 0.5 g/L、阿魏酸0.064 g/L)。称取样品约2 g，精密称定，置50 mL锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，称重，置80℃加热回流1 h，放冷，称重，用甲醇补足损失的质量，滤过，续滤液再用滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。依法制备不含赤芍、川芎药材的阴性样品，按供试品溶液制各方法操作，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，注入色谱仪，按2.1项下色谱条件进行测定，记录色谱图，见图1。供试品溶液色谱中，在与芍药苷(230 nm)、阿魏酸(320 nm)对照品溶液色谱相应位置有相同保留时间的色谱峰，保留时间分别为 16.28 min 和 28.76 min、16.38 min 和 28.78 min;阴性对照品溶液色谱相应位置无干扰峰，说明方法专属性良好。

线性关系考察:精密量取对照品溶液(含芍药苷0.512 g/L、阿魏酸 0.065 g/L)1，5，10，15，20，25，30 μL，注入高效液相色谱仪，按拟订的色谱条件测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标(Y)、进样量(μg)为横坐标(X)绘制标准曲线，得回归方程，芍药苷为 Y=1132.5 X+611.21(r=0.9998，n=7)，阿魏酸为 Y=4954.6 X+153.7(r=0.9999，n=7)。结果表明，芍药苷和阿魏酸进样量分别在 0.512 ～15.36 μg和 0.065 ～1.95 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:精密量取对照品溶液(含芍药苷0.512 g/L、阿魏酸0.065 g/mL)，依法连续进样6次。结果芍药苷和阿魏酸峰面积的 RSD分别为0.61%和0.44%(n=6)。

重复性试验:精密称取同一批(批号为20100711)样品6份，依法制成供试品溶液并测定含量。结果芍药苷和阿魏酸含量的 RSD分别为1.17%和0.83%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:精密称取同一供试品溶液，于室温放置0，2，4，6，8，10，12 h时后分别进样测定。结果芍药苷和阿魏酸峰面积的 RSD分别为0.57%和1.04%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验:称取已知含量的样品(批号为20100711，含芍药苷 9.66 mg/g 和阿魏酸 0.91 mg/g)约 1 g，共 6 份，精密称定，分别置50 mL锥形瓶中，分别精密加入对照液(含芍药苷6.22 g/L和阿魏酸1.03 g/mL)1 mL，精密加入甲醇25 mL，按供试品溶液制备方法制成待测液，进样测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3个批次的样品，依法制备供试品溶液，按拟订的色谱条件测定，以外标法计算含量。结果见表2。

3 讨论

试验中，取相同批号的样品，分别用甲醇、乙醇、70%甲醇、70%乙醇为溶剂，考察了加热回流1 h、超声处理1 h等方法。结果由于样品含糖量较高，用70%甲醇、70%乙醇为溶剂时，样品难以过滤;以芍药苷与阿魏酸的测得含量为指标比较，以甲醇加热回流1 h时，提取充分，效果最佳。在色谱条件的选择中，对不同流动相[1－4]和2005年版《中国药典(一部)》赤芍项下芍药苷含量测定所用流动相[5]，以及不同的柱温条件进行了筛选，结果以乙腈－0.1%磷酸溶液(20∶80)为流动相、柱温为30℃时，对照品色谱峰与杂质峰的分离效果理想。方法学考察结果显示，所建立的含量测定方法简单、易于操作，可有效控制柴辛鼻敏康颗粒的质量。

表2 样品含量测定结果(n=3，mg/g)

[1]岳 敏，毛彦杰，谷学新.高效液相色谱法测定千金止带丸中芍药苷的含量 [J].分析科学学报，2005，21(2):167 －169.

[2]毛晓敏，张小波，陈小清，等.HPLC同时测定十二乌鸡白凤丸中芍药苷、阿魏酸和丹皮酚含量 [J].中成药，2008，30(5):678－681.

[3]李福如，缪 婧，顾海琳，等.清脑宁颗粒质量标准研究 [J].中国药业，2010，19(9):27 －28.

[4]朱 伟，王学美.黄芪剂量对补阳还五汤中芍药苷、阿魏酸含量的影响[J].中国实验方剂学杂志，2006，12(3):11－13.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:109.