肿节风总黄酮对阿糖胞苷诱发小鼠S180血小板减少模型的影响

章武强 ，苏 敏 ，陈 奇

1.江西省儿童医院急诊室，江西 南昌 330006；2.陕西宏府怡悦制药有限公司新药部，陕西 西安 710065；3.江西中医学院药理教研室，江西 南昌 330006

肿节风为金粟兰科多年生草本植物草珊瑚Sarcandraglabra（Thunb.）Nakai的地上部分或干燥全草，又名草珊瑚。具有活血化瘀，消肿散结，凉血止血功能，临床用于血热妄行，皮肤紫斑，原发性及继发性血小板减少性紫癜，收载于《中国药典》2010年版。钟立业等[1-2]曾进行了肿节风对大剂量化疗后小鼠血小板减少的防治作用的研究，结果证实肿节风具有对抗大剂量5-氟尿嘧啶所造成的血小板减少的作用，可预防并治疗化疗后血小板减少症的发生。徐国良等[3]曾报道肿节风分离总黄酮部位为抗免疫性血小板减少性紫癜的有效成分。以往研究都是以正常健康小鼠为研究对象，尚未有人以荷瘤小鼠为研究对象，观察其对血小板减少的影响。本文以肿节风浸膏经大孔树脂分离提纯所得的总黄酮[4-5]为实验药品，研究其对阿糖胞苷化疗后小鼠肉瘤S180造成的血小板减少作用。

1 资料与方法

1.1 药品及试剂

碘伏，75%酒精，苦味酸，乙二胺四乙酸钠（Na2-EDTA·2H2O，150g/L），0.9%氯化钠注射液，阿糖胞苷（Ara-C，50 mg/支），临用前用0.9%氯化钠注射液配成10 mg/ml及5 mg/ml，肿节风总黄酮（ZJF，使用前用蒸馏水配制成所需浓度）。

1.2 动物

昆明种小白鼠，5～8周龄，体重20～22 g，雌雄各半，由江西南昌大学医学院提供，小鼠肉瘤S180由浙江医学科学研究院提供。

1.3 器材

超净工作台[SANYOMCV-B161S（T）]，手术刀、手术剪、镊子，注射器，50 ml锥形瓶，酒精灯，灌胃针头，电子天平（上海天平仪器厂），电热恒温真空干燥箱（D2-88，上海跃进医疗器械厂），血球仪（Swellab Autocounter 900+）。

1.4 荷瘤小鼠血小板减少模型的建立[6]

1.4.1 接种 将腹腔接种肉瘤S180细胞后一周的昆明种小白鼠颈椎脱臼处死，用碘伏、75%乙醇腹部局部消毒，在无菌条件下取出腹水，与生理盐水1∶3稀释，给每只小鼠腋窝皮下准确接种瘤液0.2 ml。

1.4.2 分组给药 ①接种后24 h分组，每组11只动物，实验共分3组，阴性对照组（0.2 ml/10 g），阿糖胞苷高剂量组[200 mg/（kg·d）]，阿糖胞苷低剂量组[100 mg/（kg·d）]。 用苦味酸作标记，阿糖胞苷高剂量组腹腔注射200 mg/kg，阿糖胞苷低剂量组腹腔注射 100 mg/kg，1次/d，连续2 d，第3天开始阿糖胞苷高剂量组和低剂量组都改用50 mg/kg作为维持剂量继续腹腔注射，1次/d，连续3 d。诱导时间为5 d，阴性对照组每天注射同体积的生理盐水，以造模组血小板下降了阴性对照组血小板记数的20%～30%为造模成功的标准。②50只接种成功的荷瘤小鼠，24 h后按体重随机分为5组，分别为阴性对照组，阿糖胞苷组，阿糖胞苷+肿节风总黄酮（150 mg/kg），阿糖胞苷+肿节风总黄酮（200 mg/kg），阿糖胞苷+肿节风总黄酮（250 mg/kg）5组。除阴性对照组外，其余每组于分组后腹腔注射给予阿糖胞苷100 mg/kg，连续2 d，第3天改用50 mg/kg作为维持剂量继续腹腔注射，1次/d，连续3 d。诱导时间为5 d。后三组灌胃给肿节风总黄酮，1次/d，连续10 d，于第11天处死。

1.5 观察指标

外周血象检测：以阿糖胞苷为对照组的荷瘤小鼠，在造模后第3、5、7、10天于眼眶后静脉丛取2滴血于加Na2-EDTA·2H2O已干燥的试管中，用手指弹试管，使血尽量与Na2-EDTA·2H2O接触，1 h内用全自动血球仪检测，观察血小板数（PLT）、白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）的变化。

1.6 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件进行处理。实验数据以均数±标准差（）表示，实验组与阴性对照组比较，采用独立样本的t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 阿糖胞苷对外周血白细胞数（WBC）的影响

腹腔阿糖胞苷200 mg/kg×2 d+50 mg/kg×3 d组及阿糖胞苷100 mg/kg×2 d+50 mg/kg×3 d组在给药后第7天白细胞数量均显著降低，且阿糖胞苷200 mg/kg组白细胞降的更低，导致小鼠死亡率也较高。见表1。

表1 给药后各组外周血白细胞数的变化过程（）

表1 给药后各组外周血白细胞数的变化过程（）

注:与阴性对照组比较，△△P<0.01

WBC（×109/L）

2.2 阿糖胞苷对外周血血小板数（PLT）的影响

腹腔注射阿糖胞苷200 mg/kg×2 d+50 mg/kg×3 d组及阿糖胞苷100mg/kg×2 d+50mg/kg×3 d组均能明显的降低血小板，且在实验第7、10天血小板能够明显的降低。见表2。

2.3 阿糖胞苷对外周血红细胞数（RBC）的影响

腹腔注射阿糖胞苷200 mg/kg×2 d+50 mg/kg×3 d组及阿糖胞苷 100mg/kg×2 d+50mg/kg×3 d 组造模后，3、5、7、10 d 外周红细胞的数量均没有发生很大的变化（P＞0.05）。见表3。

2.4 阿糖胞苷对外周血血红蛋白含量（HGB）的影响

注射阿糖胞苷200 mg/kg及100 mg/kg造模后，外周血红蛋白含量没有发生很大的变化，P＞0.05，见表4。

表2 给药后各组外周血血小板数的变化过程（）

表2 给药后各组外周血血小板数的变化过程（）

注：与阴性对照组比较，△△P<0.01

组别 剂量 例数PLT（×109/L）3 d 5 d 7 d 10 d阴性对照组Ara-C 0.2 ml/10g 200 mg/kg 100 mg/kg 11610456.6±63.1390.8±100.5370.0±57.4590.6±134.9386.3±32.9△△533.0±83.9626.6±129.9274.9±141.7△△380.2±112.4△△790.3±194.0483.1±112.1△△497.2 ± 110.1△△

表3 给药后外周血红细胞数的影响（）

表3 给药后外周血红细胞数的影响（）

阴性对照组Ara-C组别 剂量 例数0.2 ml/10 g 200 mg/kg 100 mg/kg RBC（×1012/L）3 d 5 d 7 d 10 d 116108.8±1.08.6±0.98.4±1.29.0±1.39.1±1.28.3±1.18.0±1.27.9±2.08.3±0.56.4±0.86.0±0.76.5±1.1

表4 给药后外周血血红蛋白含量的影响（）

表4 给药后外周血血红蛋白含量的影响（）

阴性对照组Ara-C组别 剂量 例数0.2 ml/10 g 200 mg/kg 100 mg/kg HGB（g/L）3 d 5 d 7 d 10 d 11610160.3±13.1153.5±10.1177.7±24.6126.0±15.2114.3±6.2134.8±42.7157.6±32.0151.1±27.1150.6±17.6132.8±23.4128.9±21.4128.5±19.8

2.5 肿节风总黄酮对阿糖胞苷造成荷瘤小鼠外周血象的影响

阿糖胞苷100 mg/kg×2 d+50 mg/kg×3 d能够明显造成PLT、WBC的降低。肿节风总黄酮在第7天对白细胞有显著的影响，在第10天对血小板有显著的影响。见表5、6。

表5 肿节风总黄酮对阿糖胞苷致荷瘤小鼠外周血象的影响（第7天）（，n=10）

表5 肿节风总黄酮对阿糖胞苷致荷瘤小鼠外周血象的影响（第7天）（，n=10）

注：与阴性对照组比较，△△P<0.01；与 Ara-C 组相比，*P<0.05，**P<0.01

阴性对照组Ara-C Ara-C+ZJF组别 剂量（mg/kg）0.2 ml/10 g 100150200250 PLT（×109/L）626.6±129.9274.9±141.7△△251.0±88.1308.3±60.9257.6±51.1 WBC（×109/L）5.9±2.02.1±0.5△△4.5±0.45.6±1.2**5.2±0.9*RBC（×1012/L）8.0±1.27.9±2.09.0±1.89.1±1.28.4±1.1

3 讨论

阿糖胞苷是引起骨髓再生低下或障碍且伴全血细胞减少的药物，因此实验研究利用其制作血小板减少模型。以往的研究[7-9]限于观察肿节风和阿糖胞苷对正常健康小鼠血小板的影响，但是临床上阿糖胞苷仅限于肿瘤患者，因此本文以荷瘤小鼠为研究对象，观察其对荷瘤小鼠血小板的影响。实验证明，荷瘤小鼠腹腔注射200 mg/kg和100 mg/kg均可造成血小板减少模型，但是由于荷瘤鼠免疫力差，200 mg/kg会导致老鼠死亡率高，100 mg/kg在实验第7～10天内可以造成血小板减少模型，老鼠死亡率低，因此，我们认为100 mg/kg的阿糖胞苷制作血小板减少模型更适合。肿节风总黄酮在实验第7天对该阿糖胞苷造成的血小板减少模型有升高白细胞的作用，在第10天有升高血小板的作用。因此，对临床用药也有提示作用。据文献报道其作用机制可能是肿节风减轻化疗药物对骨髓系统的抑制，加速骨髓的巨核系造血功能的恢复，从而防止化疗后血小板减少的发生。

表6 肿节风总黄酮对阿糖胞苷致荷瘤小鼠外周血象的影响（第10天）（，n=10）

表6 肿节风总黄酮对阿糖胞苷致荷瘤小鼠外周血象的影响（第10天）（，n=10）

注： 与阴性对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01； 与 Ara-C组相比，*P<0.05，**P<0.01

阴性对照组Ara-C Ara-C+ZJF组别 剂量（mg/kg）0.2 ml/10 g 100150200250 PLT（×109/L）790.3±194.0440.0±189.9△△516.1±118.8517.4±159.3588.9±161.1**WBC（×109/L）6.1±2.65.7±1.9△4.1±2.26.1±2.27.8±2.4*RBC（×1012/L）6.4±1.36.0±0.95.5±1.05.8±0.96.6±1.4

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