日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡血清生化指标、屠宰性能和盲肠微生物的影响

湖南省畜牧兽医研究所 王向荣 蒋桂韬 张 旭 唐建忠 戴求仲

益生菌因其具有促生长、抗腹泻、增强免疫力等作用（蒋正宇等，2005；陈天游等，2005），近年来被广泛应用于替代畜禽日粮中的饲用抗生素。饲用益生菌的研究应用类也越来越多。目前，我国农业部允许饲用的芽孢杆菌包括地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等12种（李研东等，2008）。有关地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌在畜禽日粮中的应用研究较多，普遍认为芽孢杆菌能促进肠道有益菌的生长，提高养分利用率，从而起到促生长，提高饲料报酬的作用 （郝生宏等，2008；Nayak等，2007；Abdulrahim等，1999），但不同芽孢杆菌在黄羽肉鸡日粮中联合应用的研究并不多见，本试验将枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌混合后，按照不同水平添加至黄羽肉鸡日粮中，考察复合芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡部分血清生化指标、屠宰性能和盲肠微生物的影响，以期为复合芽孢杆菌制剂在黄羽肉鸡生产中的合理应用提供试验基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料 芽孢杆菌制剂由枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌混合而成，孢子含量为2×1010CFU/g，由武汉雄峰科技有限公司提供。

1.2 试验动物与分组 将375羽健康快长型黄羽肉鸡随机分成5组，每组3个重复，每个重复25羽。试验为期49 d，分为7～28 d和29～56 d两个阶段。试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础日粮。试验Ⅱ～Ⅴ组为试验组，分别在基础日粮中添加150、200、250 g/t和 300 g/t芽孢杆菌制剂。

1.3 试验日粮 基础日粮以玉米、豆粕、次粉和油糠等为主要原料，参考NRC（1994）肉鸡营养需要和中国黄鸡营养需要（NY/T33-2004）制成，其原料组成与营养水平见表1。

表1 基础日粮组成及营养水平（风干基础）

1.4 饲养管理 试验肉鸡采用网上平养，鸡舍自然通风，红外灯供暖，相对湿度保持在55%～65%之间，试验期间所有鸡只自由采食（计量不限量）和饮水，采用常规免疫程序免疫。

1.5 测定指标

1.5.1 血清生化指标的测定 试验结束时，从每个重复组随机抽取1羽鸡屠宰取血8 mL，血凝0.5 h后以3000 r/m离心15 min，收集上层血清，于-20℃下保存。

三碘甲腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）和胰岛素（Ins）均采用放射免疫法（RIA）测定；葡萄糖（GLU）、胆固醇（CHO）和碱性磷酸酶（ALP）用CX4Pro全自动生化分析仪（Beckman Coulte公司生产）测定。

1.5.2 屠宰性能的测定 在56日龄早晨，从每处理随机选取6只接近该处理平均体重的鸡 （每重复2只），称活重后颈静脉放血处死，用湿法拔毛，沥干水分后称重，参照全国家禽育种委员会颁布的“家禽生产性能与计算方法”测定肉鸡屠体重、半净膛重、全净膛重，计算全净膛率、腹脂率、胸肌率和腿肌率。

1.5.3 盲肠微生物的测定 测定盲肠微生物中大肠杆菌、沙门氏菌、乳酸杆菌和总需氧菌的含量。

检测方法：取盲肠内容物经匀质后在超净工作台取样0.5 g左右，加入到装有4.5 mL无菌生理盐水的试管中，在震荡器上混匀后取0.5 mL放入第二管混匀，依次稀释至10-6倍。采用平板菌落记数法进行统计，培养基为各细菌的选择性培养基，总需氧菌为营养琼脂培养基。乳酸杆菌采用烛缸法进行厌氧培养，其余均采用需氧培养。选择3个合适的稀释度，由高稀释度开始，用微量取样器吸取100 μL放入各培养基平皿内，每个平皿三个稀释度，每个稀释度做3个重复，置于37℃培养箱中培养24～48 h进行菌落计数，计算每克内容物所含菌数。

1.6 统计分析 试验数据经Excel 2007初步整理后，用SPSS 13.0统计软件进行One-way ANOVA分析，采用LSD方法进行多重比较，结果用平均数±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡血清生化指标的影响 由表2可见，试验组肉鸡血清中葡萄糖含量均低于对照组，碱性磷酸酶含量高于对照组，差异均不显著（P＞0.05）；血清中胆固醇含量表现出随日粮中芽孢杆菌添水平增加而降低的趋势 （P＞0.05），T3和T4表现出随芽孢杆菌添加水平增加而增加的趋势（P＞0.05）；血清中胰岛素含量以试验Ⅴ组最高，为4.65 mmol/L，比对照组的2.53 mmol/L提高了83.79%，差异显著（P＜0.05），也分别比试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的3.88、3.89 mmol/L和 4.63 mmol/L高 19.85%、19.54%和0.43%，但差异不显著（P ＞ 0.05）。

2.2 日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡屠宰性能的影响 由表3可见，日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率和腹脂率均无显著影响。试验Ⅴ组肉鸡的屠宰率达69.93%，为所有组中最高，比对照组的66.94%提高了 4.28%，差异显著（P ＜ 0.05），也高于试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组，但差异不显著（P＞0.05）。

表2 日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡部分血清理化指标的影响mmol/L

表3 日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡屠宰性能的影响

2.3 日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡盲肠微生物的影响 由表4可见，芽孢杆菌制剂可以减少黄羽肉鸡盲肠中有害菌的数量，增加有益菌的数量。与对照组相比，试验组能够降低黄羽肉鸡肓肠中大肠杆菌、沙门氏菌及总需氧菌的数量，分别在添加量为200 g/t和250 g/t及以上时达显著水平（P ＜ 0.05）。 乳酸杆菌的数量增加（P ＜ 0.05）。

表4 日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡肓肠菌群数量的影响 lg CFU/g

3 讨论

3.1 日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡血清生化指标的影响 有关芽孢杆菌对肉鸡血清生化指标影响的研究较多，滑静等（2003）研究认为，日粮添加0.2%枯草芽孢杆菌可显著提高AA肉鸡血清总蛋白、总胆固醇含量和碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶活性；陈家祥等（2010）认为，饲粮中添加不同剂量的地衣芽孢杆菌提高了麻羽肉鸡血清中总蛋白和白蛋白含量，但对肉鸡血清中胆固醇含量和碱性磷酸酶活性均无显著影响；而本研究发现，日粮添加复合芽孢杆菌制剂使血清中胰岛素的含量增加，且添加量为300 g/t时，差异达显著水平，而对血糖和胆固醇含量，以及碱性磷酸酶活性均无显著影响；对T3、T4的影响虽然表现出了随添加剂量的增加而增加的趋势，但差异未达显著水平。由此可见，芽孢杆菌对肉鸡血清生化指标影响的结果并不一致，这可能与芽孢杆菌种类、畜禽品种、持续饲喂时间和添加剂量以及日粮加工方式有很大关系。

3.2 日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉屠宰性能的影响 日粮中添加芽孢杆菌对肉鸡屠宰性能影响的研究并不多见，张仁义等（2010）研究发现，日粮添加50、100、200 mg/kg地衣芽孢杆菌制剂，对麻羽肉鸡屠宰率、全净膛率和半净膛率无显著影响，却能提高胸肌率和腿肌率，各指标与抗生素组均无显著差异。本研究认为，日粮中芽孢杆菌的添加仅影响了黄羽肉鸡屠宰率，对全净膛率、胸肌率和腿肌率等指标无显著影响，这与前人研究出现分歧，具体原因尚不清楚，有待进一步研究。

3.3 日粮添加芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡盲肠微生物的影响 许多研究表明，芽孢杆菌可抑制肠道有害菌的生长，促进有益菌的增殖，郝生宏等（2010）研究认为，枯草芽孢杆菌能显著降低1、3周龄肉仔鸡粪便大肠杆菌数量；闫凤兰等（1996）用枯草芽孢杆菌饲喂AA肉仔鸡，结果表明，添加枯草芽孢杆菌可显著增加3周龄仔鸡肠道中乳酸杆菌的数量，减少沙门氏菌的数量，但对大肠杆菌影响不显著。本研究取得了类似结果，日粮添加复合芽孢杆菌制剂，可减少盲肠大肠杆菌、沙门氏菌和肠道总需氧菌的数量，分别在添加200、250 g/t和250 g/t及以上时芽孢杆菌制剂的试验组与对照组差异达显著水平；所有试验组肉鸡盲肠中乳酸杆菌含量均显著高于对照组。这可能与芽孢杆菌能维持肠道菌群平衡有关，同时，因芽孢杆菌不能在消化道内定植，只有动物不断采食添加芽孢杆菌的饲料才能发挥作用。所以芽孢杆菌的添加量在添加量较大时（250 g/t和300 g/t）能表现出较好的效果。

4 结论

本研究认为，日粮中添加复合芽孢杆菌制剂可提高黄羽肉鸡血清中胰岛素含量，对血清中血糖、胆固醇等无显著影响；可提高黄羽肉鸡的屠宰率；同时，芽孢杆菌在黄羽肉鸡中的长期添加，可抑制盲肠中有害菌的生长，促进有益菌的增殖，且以300 g/t的水平添加较佳。

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