HPLC法测定清肺丸中黄芩苷和柚皮苷含量*

张 囡，陈双璐，钱宇坤

(天津市儿童医院，天津 300074)

清肺丸为本院常用医院制剂，由黄芩、橘红、枳实、桔梗、前胡等15味中药制成，具有宣肺解表，化痰止咳的功效，主要用于急性气管炎，风热感冒，咳嗽带有白痰或黄稠痰。原质量标准无含量测定项，文献中也无相关报道，为提高其标准，有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定本品中黄芩苷和柚皮苷的含量，以此作为该制剂的质量控制指标。

1 仪器与材料

仪器：LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津)；LC solution色谱工作站。材料：黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110715-200815)，柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110722-200610)，清肺丸(天津市儿童医院，批号20100301、20100401、20100402、20100501)。甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，乙腈(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，冰醋酸(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，水为去离子水(自制)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Shim-pack VP-ODS(150 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相：2%冰醋酸-乙腈(79∶21)；检测波长283 nm；柱温30 ℃；流速1 ml/min；进样量10 μl。理论板数按黄芩苷峰计算不低于5 000，按柚皮苷计算不低于4 000。色谱见图1。

2.2溶液制备

2.2．1对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品5.2 mg、柚皮苷对照品4.0 mg，分别置50 ml量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，得浓度0.104 mg/ml的黄芩苷对照品溶液和浓度0.08 mg/ml 的柚皮苷对照品溶液。

2.2．2供试品溶液的制备 取清肺丸样品1丸，剪碎，混匀，精密称定约1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 ml，称定重量，超声处理(功率240 W，频率45 kHz)45 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2．3阴性对照溶液的制备 按处方配比，分别制备不含黄芩及不含橘红和枳实的阴性对照，按“2.2.2”项下方法，制得阴性对照溶液。

1.柚皮苷 2.黄芩苷

2.3线性关系考查 分别精密量取浓度0.104 mg/ml的黄芩苷对照品溶液和浓度0.08 mg/ml 的柚皮苷对照品溶液1.0、3.0、5.0、7.0、10.0和15.0 m1置25 ml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积A为纵坐标，进样浓度C(μg/ml)为横坐标绘制标准曲线。黄芩苷和柚皮苷的回归方程分别为：A=32 089.1C+79.17(r=0.999 9，n=6)和A=28 004.5C+184.00(r=0.999 8，n=6)。结果表明，黄芩苷在20.8～156 μg/ml范围内与峰面积呈现良好线性关系；柚皮苷在8.0～120 μg/ml范围内与峰面积呈现良好线性关系。

2.4精密度试验 取浓度0.051 mg/ml黄芩苷和浓度0.040 mg/ml柚皮苷的混合对照品溶液，重复进样5次，测得黄芩苷和柚皮苷峰面积的RSD分别为0.85%和0.76%，表明仪器精密度良好。

2.5稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12和24 h，按“2.1”项下色谱条件测定，测得黄芩苷峰平均含量为3.786 mg/g，RSD为0.68%；柚皮苷平均含量为2.561 mg/g，RSD为0.79%，表明样品溶液24 h内稳定性良好。

2.6重现性试验 取同一批次(批号20100301)样品6份，分别按“2.2.2”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积。测得样品中黄芩苷平均含量为3.729 mg/g，RSD为1.37%；柚皮苷的平均含量为2.529 mg/g，RSD为1.55%，结果表明测定方法重现性良好。

表1 加样回收试验

2.7回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的同一批次(批号20100401)样品约1 g，9份，精密称定，按样品含量的80%、100%、120%加入适量黄芩苷和柚皮苷对照品，按 “2.2.2” 项下制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件测定，计算回收率，结果黄芩苷平均回收率为99.85%，RSD为0.97%；柚皮苷平均回收率为100.1%，RSD为1.29%。结果见表1。2.8样品测定 取清肺丸样品3批(批号 20100401、20100402、20100501)，按 “2.2.2”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，测定样品中黄芩苷和柚皮苷的含量。测得样品中黄芩苷的含量分别为3.748、3.826和3.795 mg/g；柚皮苷的含量分别为2.568、2.657和2.549 mg/g。

3 讨论

3.1黄芩苷为方中黄芩中主要成分[1]，具有抗菌抗炎、清热解毒的作用，柚皮苷为方中橘红[2]、枳壳[3]有效成分之一，具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、改善局部微循环等作用。因此选择对黄芩苷和柚皮苷进行含量测定，可以有效控制黄芩、橘红与枳壳的质量，进而控制清肺丸的质量。

3.2黄芩苷与柚皮苷在《中国药典》测定方法中检测波长分别为280 nm及283 nm[4]，由于样品中柚皮苷的含量较少，为提高柚皮苷的检测灵敏度，故选用283 nm作为检测波长。

3.3本实验对提取溶剂与提取方法进行了筛选，比较了不同比例甲醇、乙醇进行回流、超声的提取效果。最终确定用70%甲醇超声提取45 min，提取成分含量较高，且操作简便。

1 李玉萍，熊向源，刘建涛，等.黄芩活性成分的制备工艺和检测方法研究进展.时珍国医国药，2010，12(4)：972

2 周建红，汪霞，李小曲.HPLC法测定橘红痰咳颗粒中柚皮苷的含量.中国药师，2009，12(2)：214

3 梁远园，冯彪，祝晨蔯，等.HPLC法测定枳实药材中橙皮苷与柚皮苷的含量.中国新药与临床药理，2006，17(5)：359

4 中国药典.一部. 2005：51，211