托拉塞米片溶出度的方法学研究*

赵洪霞

(天津安捷伦药业有限公司，天津 300410)

托拉塞米是新一代高效髓袢利尿剂。多年临床应用证实,托拉塞米适应证广,利尿作用迅速强大且持久,不良反应发生率低,是临床上值得推广的一类高效利尿剂。参照托拉塞米标准(试行)YBH00682004，依照《中国药典》溶出度测定法[1]，为了操作简便，进行了适当改进，采用紫外可见分光光度法(UV)测定本品的溶出度。

1 试验材料

1.1仪器 Waters 2487紫外分光光度计，ZRS-8G智能溶出试验仪(天津大学无线电厂)，日本岛津LC-10A系列高效液相色谱仪，XS204型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2试药 托拉塞米对照品(本公司自制，批号100206，纯度：99.5%)，托拉塞米片(本公司自制，批号100301、100302、100303)。盐酸(天津市申泰科密欧化学试剂有限公司 分析纯)，磷酸二氢钾(天津市医药公司 分析纯)，冰乙酸(天津市赢达稀贵化学试剂厂 分析纯)。

2 试验和结果

2.1溶出介质的选择 取托拉塞米片6片，照溶出度测定法(《中国药典》2010年版二部附录Ⅹ C第二法)分别以0.1 mol/L盐酸溶液 、水、磷酸盐缓冲液(pH=6.8)各900 ml为溶出介质,转速为50 r/min，分别在5、10、15、20、30 min取溶液适量，滤过，取续滤液照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版附录二部Ⅳ A)，在285 nm的波长处测定吸光度；另精密称取托拉塞米对照品适量，加冰乙酸2 ml,振摇使溶解，再加溶出介质制成每1 ml中约含10 μg的溶液，同法测定，计算每片的溶出量，绘制不同溶出介质的溶出曲线，见图1。试验结果表明：溶出介质为0.1 mol/L盐酸溶液、水、磷酸盐缓冲液(pH=6.8)时,托拉塞米片均可达到最大溶出，以0.1 mol/L盐酸溶液为溶出介质溶出曲线较平滑，且参照托拉塞米片进口标准H20030655、H20030656选择标准中使用的盐酸作为溶出介质。

图1 不同溶出介质溶出曲线图

2.2搅拌方式的选择 取托拉塞米片样品6片，照溶出度测定法(《中国药典》2005二部附录Ⅹ C第一法)以0.1 mol/L盐酸溶液900 ml为溶出介质,转速为100 r/min，分别在5、10、15、20、30 min取溶液适量，滤过，取续滤液照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版附录二部Ⅳ A)，在285 nm的波长处测定吸光度；另取托拉塞米对照品适量，加冰乙酸2 ml,振摇使溶解，再加溶出介质稀释成每1 ml中约含10 μg的溶液，同法测定，计算每片溶出量，绘制溶出曲线，见图2。试验结果表明：采用以上两种搅拌方式，溶出均达到最大值，参照托拉塞米片进口标准H20030655、H20030656，故采用标准中的搅拌方式即桨法。

图2 溶出度桨法、篮法溶出曲线图

2.3药物在溶出介质中的线性试验 取托拉塞米原料20 mg, 精密称定，置100 ml量瓶中, 加冰乙酸2 ml,振摇使溶解，再加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液2、4、6、8、10 ml分别置于10 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版附录二部Ⅳ A)，在285 nm的波长处分别测定吸光度，进行线性回归。结果表明：在4～20 μg/ml的浓度范围内，托拉塞米的浓度与吸光度呈良好的线性关系，线性方程为Y=0.032X+0.023(r=0.999 5)。

2.4回收率试验 取托拉塞米原料适量，精密称定，按处方配比加入适量辅料,用溶出介质制成8、10、12 μg/ ml的梯度各3份，摇匀。照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版附录二部Ⅳ A)，在285 nm的波长处分别测定吸光度，记录数据，计算托拉塞米的回收率，结果托拉塞米在该溶出介质中的平均回收率为99.2%,RSD为0.49%。见表1。

表1 托拉塞米片回收率试验的测定结果

2.5托拉塞米片溶出液的稳定性试验 取溶出度测定的同一溶液,于不同时间测定吸收度,RSD为0.6%。结果表明，样品在溶出介质中8 h内稳定。

2.6均一性试验 取100301批样品6片，照溶出度测定法(《中国药典》2005二部附录Ⅹ C第二法)以0.1 mol/L盐酸溶液900 ml为溶出介质,转速为50 r/min，分别在5、10、15、20、30 min取溶液适量，滤过，取续滤液照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版附录二部Ⅳ A)，在285 nm的波长处分别测定吸光度，另取托拉塞米对照品适量，精密称定，加冰乙酸2 ml,振摇使溶解，再加溶出介质稀释成每1 ml中约含10 μg的溶液，同法测定，计算每片的溶出量，见图3。从图3可以看出，本方法测定的溶出度均一性良好。

图3 托拉塞米片100301批样品溶出曲线

2.7样品溶出曲线的测定 试验结果表明，3批样品溶出曲线差异较小，符合规定。见图4。

图4 3批样品溶出曲线

2.8两种方法测定溶出度的结果比较 取本品，照溶出度测定法 (《中国药典》2010年版二部附录Ⅹ C第二法)，以0.1 mol/L盐酸溶液900 ml为溶出介质,转速为50 r/min，依法操作，20 min时，取溶液适量，滤过，取续滤液，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版附录二部Ⅳ A)，在285 nm的波长处测定吸光度；另取托拉塞米对照品适量，精密称定，加冰乙酸2 ml,振摇使溶解，再加溶出介质稀释成每1 ml中约含10 μg的溶液，同法测定，计算每片溶出量，限度为标示量的80%，应符合规定。依照进口标准H20030655.H20030656进行高效液相色谱法测定。结果表明：采用紫外可见分光光度法和依照进口标准H20030655.H20030656高效液相色谱法测定的本品溶出度结果无明显差异。见表2。

表2 紫外法和HPLC法测定结果比较

3 讨论

3.1测定波长的选择 依据托拉塞米标准(试行)YBH00682004，取托拉塞米对照品适量，加适量冰乙酸使溶解，再加0.1 mol/L盐酸溶液制成每1 ml中约含10 μg 的溶液，照紫外-可分光光度法(《中国药典》2010年版二部附录Ⅳ A)测定，该溶液在285、210 nm的波长处有最大吸收，因托拉塞米在285 nm波长处波峰较为平缓，故选择在285 nm的波长处测定。

3.2冰酸的干扰试验 取2 ml冰乙酸，置100 ml量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀；再精密量取5 ml置100 ml量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。取此溶液在200～400 nm的波长范围内进行紫外扫描。结果表明，冰乙酸在285 nm的波长处没有吸收，冰乙酸对托拉塞米吸光度测定干扰为阴性。

3.3滤膜的吸附试验 取托拉塞米约20 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加冰乙酸2 ml,振摇使溶解，再加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取5 ml置100 ml量瓶中,加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀；在285 nm的波长处分别测定其吸光度，照上述方法共称取6份，进行测定，分别用水膜滤过，同法测定，结果显示：托拉塞米过水膜吸光度与未过膜吸光度的比值为0.995 7，RSD为0.52%。试验结果表明，水膜对托拉塞米无明显吸附，可忽略不计。

3.4辅料的干扰性试验 按处方配比,取约相当于1片重量的辅料压片，共六片,取上述空白片，照溶出度测定法(《中国药典》2010二部附录XC第二法)以0.1 mol/L盐酸溶液900 ml为溶出介质,转速为50 r/min，依法操作，在20 min时，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取托拉塞米对照品适量，精密称定，加冰乙酸2 ml,振摇使溶解，再加溶出介质稀释成每1 ml中约含10 μg的溶液，作为对照品溶液。取上述溶液，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版附录二部Ⅳ A)，在285 nm的波长处分别测定吸光度，结果显示辅料干扰率为0.85%小于2.0%。以上试验结果表明：辅料对溶出结果测定影响较小，可忽略不计。

本试验采用紫外-可见分光光度法测定托拉塞米片溶出度，并对所建立的方法进行了方法学的验证，线性范围为4～20 μg/ml(r=0.999 5)，回收率为99.5%,RSD为0.42%；所得结果与高效液相色谱法进行溶出度测定的结果比较没有明显差异，是一种快速，简便，准确的分析方法，可作为托拉塞米片溶出度测定的检测方法。

1 中国药典.二部.2010:附录:85