食管黏膜脱落细胞DNA倍体分析在诊断食道良恶性疾病中的价值

孙剑经，逯 海，姚世媛，张 斌

(河北北方学院附属第一医院，河北张家口075000)

DNA倍体的异常与肿瘤发生、发展的生物学特性密切相关，肿瘤细胞的DNA含量异常和DNA异倍体的出现已被作为多种实体肿瘤组织良恶性判断的客观指标。2008年2月～2009年12月，我们采用流式细胞术(FCM)对60例食道癌患者(包括癌前病变)和45例食管良性狭窄或胃食管反流病患者的黏膜脱落细胞行DNA倍体分析，同时将倍体分析、内镜检查、黏膜脱落细胞检查、X线钡餐造影检查结果分别与食道疾病的临床及病理确诊结果进行对比，探讨DNA倍体分析在诊断食道良恶性疾病中的价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择我院消化科住院经临床病理分析诊断为食道癌(包括癌前病变)的患者60例，(男47例、女13例)，其中Barrett食管上皮内瘤变患者11例，食管鳞状细胞癌术后放疗患者28例，晚期食管癌多发肝、肺及纵膈转移行保守治疗者23例。另选择消化科门诊经内镜及上消化道钡餐造影检查确诊为食管良性狭窄性疾病及胃食管反流病(GERD)患者45例(男18例、女27例)，其中食管贲门失弛缓症11例、GERD 29例、食管炎所致食管良性狭窄患者5例，诊断明确后半年内均随访，未见恶性改变。以上所有患者均行内镜检查、黏膜脱落细胞检查、X线钡餐造影检查及食管黏膜脱落细胞DNA倍体分析。

1.2 主要试剂及仪器 DNA-Preg Regents试剂盒(Beckman Coulter)、流式细胞仪(Epics XL型)为美国BECKMAN-COULTER公司产品，日本奥林巴斯EVIS-240型电子胃镜，双腔塑料管线套网气囊细胞采集器。

1.3 检查方法 ①所有患者行内镜检查及X线钡餐造影，内镜检查疑恶者作活组织病理检查以明确诊断。②食管黏膜脱落细胞采集:应用线网气囊双腔管细胞采集器吞入食管内，通过病变段后充气膨胀气囊，然后缓缓将气囊拉出。取套网擦取物涂片作细胞学检查。③在胃镜下直接刷取食管可疑病灶黏膜处脱落细胞，先送流式细胞仪进行DNA倍体分析检查，严格按照操作说明书对细胞进行染色，用CellQuest软件自动获取5×103细胞/样品，再用ModFit LT2.0软件进行分析，同时以正常人外周血淋巴细胞作为正常二倍体标准。

1.4 FCM DNA倍体分析诊断标准 依据Klein等提出的FCM诊断肿瘤细胞的标准:①出现DNA细胞峰为恶性肿瘤细胞。②如无明显的非整倍体细胞峰，但有一突出的四倍体细胞峰和大于15%的超二倍体细胞峰(S期细胞)，并伴有G0/G1期的CV值大于9%为恶性肿瘤细胞。③无明显的非整倍体细胞峰，但G0/G1期的CV值增大，并伴有大于10% ～5%的超二倍体细胞峰和1个突出的四倍体细胞峰，诊断为可疑癌。

1.5 FCM DNA倍体分析结果判断 DNA指数(DI)系样本G0/G1期细胞与正常二倍体G0/G1期细胞DNA含量峰均值之比。参照国内外文献［1］对脱落细胞DNA倍体作分类:DI=1.0±0.1为二倍体，其余DI值均为异倍体。标本1次以上者，其DI值取数次结果中最异常值。

1.6 统计学方法 分别计算各检查方法对食道恶性疾病的阳性预测值、阴性预测值、敏感性、特异性;最后计算各诊断方法的尤登指数［2］，尤登指数:YI=敏感性 +特异性 －1'。采用 SPSS 11.0统计软件，计数资料采用χ2检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

内镜检查、黏膜脱落细胞检查、X线钡餐造影检查及DNA倍体分析检查结果见表1，其在食道良恶性疾病中的尤登指数 YI分别为 0.373、0.555、0.112、0.806，前三者之间比较差异无统计学意义，而DNA倍体分析与前三者比较，差异均有统计学意义(P ＜0.01)。

表1 2组各检查方法结果比较

3 讨论

食道癌是危害人类健康的主要肿瘤之一，其早期诊断较为困难，多数患者确诊时已失去根治性切除机会，普通检查手段如内镜检查、黏膜脱落细胞检查、X线钡餐造影检查对食道癌的早期诊断，尤其是对Barrett食管上皮内瘤变即食管癌前病变患者诊断阳性率较低。而异倍体可能是癌前病变向食管癌转变的重要标志。普通检查手段对食道良恶性疾病诊断的正确性、阳性预测值、阴性预测值结果相似，而与DNA倍体分析值却有明显差异。尤登指数是综合反映诊断价值的指标，常用于比较不同的诊断试验，值越大，诊断价值越高。本研究结果显示DNA倍体分析值高达0.806，与普通检查手段相比差异均有显著意义。DNA倍体分析对于评价恶性程度、判断预后、评价疗效是一项重要指标，资料表明实体恶性肿瘤的DNA倍体大多为非整倍体，所有的良性病变都是二倍体［3］。异常的DNA含量不但可作为恶性肿瘤的标志之一，且可反应肿瘤的恶性程度及生物学行［4］，倍体肿瘤恶性度低，异倍体肿瘤与肿瘤的低分化或浸润性有关。由于FCM的逐渐普及，通过DNA倍体分析对食管鳞状细胞癌进行诊断、指导治疗和判断预后已成为可能。应用食管拉网或内镜等方法进行脱落细胞DNA倍体分析，可早期发现食管癌或癌前病变，以阻止病情进展，达到二级预防目的，改善食管癌患者的预后;其对检查食管鳞状细胞癌术后患者有无复发也有一定应用前景。

［1］李朋军，夏潮涌.肿瘤细胞DNA干系倍体分析及其临床应用［J］.中国体视学与图像分析，2005，10(2):72-76.

［2］钟征翔，丁韧烨，孙建良，等.胆胰液脱落细胞DNA倍体分析在诊断胆道和胰腺良恶性疾病中的价值［J］.中华检验医学杂志，2004，27(8):511-513.

［3］Auer G，Eriksson E，Azavedo E，et al.Prognostic significance of nuclear DNA content in mammary adenocarcinomas in humans［J］.Cancer Res，1984，44(1):394-396.

［4］陈献国，余国伟，郑昭璟，等.食管脱落细胞DNA分析对食管癌诊断价值的探讨［J］.中华肿瘤防治杂志，2009，16(10):758-760.