不同炮制方法对远志药效学的比较研究

王光志，陈林，万德光，刘友平，裴瑾

（成都中医药大学药学院，中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 610075）

远志为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志P.sibirica L.的干燥根，系常用中药，具有安神益智、祛痰消肿的功效。临床常用其炮制品。远志的炮制方法较多，经考证，有炒、甘草煮、姜汁炒、酒蒸、米泔水制、甘草水和黑豆煮、猪胆汁煮、炙、炒炭等［1］，因应用目的不同具体的炮制方法有异。《中国药典》2010年版（一部）收有生远志和制远志［2］。《全国中药炮制规范》收有“制远志”、“蜜远志”及“朱远志”等［3］。《中药炮制经验集成》所收炮制方法较多，有“制远志”、“姜制”、“炒远志”、“朱远志”、“蜜远志”、“远志炭”等。万德光教授把通过农艺措施、采收、加工、炮制、用法等人工干预中药品质的过程归纳为“中药品质的多元调控论［4］”。基于炮制是调控中药品质，保证中医临床合理用药的措施之一，我们前期比较了炒、甘草制、蜜炙、姜制以及酒制五种炮制方法对远志酸含量的影响［5］。为了进一步研究不同炮制方法对远志饮片的质量影响，我们对甘草制远志、蜜远志与生远志的药效学进行了比较研究，现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 实验动物、主要试剂和仪器

2月龄体重18～22g昆明种小鼠，由四川医科院实验动物研究所提供，动物合格证号：川实管动物质第15号。五羟色胺（5－HT）硫酸肌酐（中国医药公司上海化学试剂采购站进口分装），去甲肾上腺素（NE）（SERVA公司），标准品多巴胺（DA）（Fluka公司），戊巴比妥钠（中国医药集团上海化学试剂公司），必嗽平（广东汕头金石制药总厂）；BP211D电子天平（万分之一，十万分之一，德国Sartorius公司）；UV－1100紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；CB3201数字描记式小动物活动测定仪（中国川北电子工业公司）；STT－2跳台仪（中国医科院药研所）；960CRT荧光分光光度计；手动玻璃均浆器。

1.2 样品制备

药材为远志的干燥根。生远志、制远志及蜜远志样品制备方法为课题组筛选的方法［2］，三种样品均经过水煎，制成含生药量1g／ml的水煎液，置于4℃冰箱保存。按体重给药，高剂量组为含生药量4g／kg，低剂量组为含生药量1g／kg。

1.3 镇咳化痰试验

参照文献［6］的方法，用小鼠氨水引咳法比较镇咳作用，用小鼠气管段酚红法比较化痰作用。取活动度近似的小鼠80只，随机分为生远志高剂量组、生远志低剂量组、蜜远志高剂量组、蜜远志低剂量组、制远志高剂量组、制远志低剂量组、对照组、磷酸可待因组等8组，每组10只，雌雄各半。对照组给等量生理盐水，磷酸可待因剂量为0.02g／kg，必嗽平组剂量为0.035g／kg。

1.4 镇静催眠试验

参照文献［6］的方法，进行镇静催眠试验。取活动度近似的雄性昆明种小鼠70只，随机分为生远志高剂量组、生远志低剂量组、蜜远志高剂量组、蜜远志低剂量组、制远志高剂量组、制远志低剂量组、对照组等7组，每组10只，雌雄各半。除对照组外其他组均连续灌胃给药7d，对照组给等量生理盐水。末次给药30min后将各组小鼠分别放数字描记式小动物活动测定仪，适应2min，测定5min内的活动次数。以小鼠自主活动次数为指标，观察生远志、蜜远志以及制远志对小鼠自发活动的影响。

取健康昆明种小鼠70只，雌雄各半，分组方法同前，每组10只，按相应剂量连续灌胃给药7d，末次灌胃给药30min后，腹腔注射阈剂量戊巴比妥钠40mg／kg。以翻正反射消失1min为入睡潜伏时间。

1.5 小鼠学习记忆试验

参照文献［6］的方法，取活动度近似的雌性昆明种小鼠80只。随机分为8组，每组10只：生远志高剂量组，生远志低剂量组，蜜远志高剂量组，蜜远志低剂量组，制远志高剂量组，制远志低剂量组，脑复康组，对照组。按相应剂量连续灌胃给药7d，脑复康组给药1.2g／kg，对照组给等量生理盐水。末次给药30min后各组腹腔注射戊巴比妥钠20mg／kg或30%乙醇0.1mL／kg。10min后将小鼠放入电压在36V的跳台仪中，适应2min，通电3min，记录跳台次数。24h后进行测试，测试时将小鼠放在跳台上，同时秒表开始记录，以3min内跳下次数计为错误次数。

1.6 对小鼠脑内单胺类神经递质含量的影响

参照文献［6］的方法，小鼠跳台测试完后，断头处死，迅速打开颅腔，取全脑，放于锡箔纸上称重。将脑组织放入装有3mL预冷的酸性正丁醇溶液中，除去纸重，求得脑组织净重。按1∶30比例补充酸性正丁醇量，制备组织匀浆。将组织匀浆倒入带塞离心管中，振荡5min，在3 000r／min下离心10min，取适量的正丁醇上清液进行提取和测定。NE于480nm／385nm测定，DA 于375nm／325nm 测定，5－HT于480nm／365nm测定。将所测各管吸光度值（A值）带入公式，即可得各管5－HT、DA以及NE的含量：含量＝（样品管A值－空白管A值）／（标准管A值－空白管A值）×0.2×1.5×（1／组织重g）。

1.7 统计学方法

用SPSS11.0统计软件，采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同炮制饮片镇咳化痰作用比较

蜜远志较生远志和制远志镇咳、化痰作用增强（P＜0.05）（表1、2）。

表1 生远志、制远志、蜜远志对小鼠镇咳作用比较Tab.1 Antitussive effect of CRP，GRP and HRP in mice

表2 生远志、制远志、蜜远志对小鼠气管段酚红排泌的影响Tab.2 Phenol red secretion effect of CRP，GRP and HRP in mice trachea

2.2 不同炮制饮片镇静催眠作用比较

对小鼠的自发活动影响，生远志高、低剂量组，蜜远志高、低剂量组，制远志高、低剂量组均有极显著性差异；制远志、蜜远志与远志相同剂量组间无显著性差异，仅有减少的趋势。对戊巴比妥钠协同催眠作用的影响，生远志高、低剂量组，蜜远志高、低剂量组，制远志高、低剂量组均有显著性差异；蜜远志、制远志高剂量组与生远志相同剂量组无显著性差异，但入睡潜伏时间有缩短的趋势。结果见表3。

表3 生远志、制远志、蜜远志对小鼠自发活动与入睡潜伏时间的影响Tab.3 Spontaneous activity and sleep latency effect of CRP，GRP and HRP in mice

2.3 不同炮制饮片对小鼠学习记忆的影响

生远志高、低剂量组，蜜远志高、低剂量组，制远志高、低剂量组间跳台错误次数差异有统计学意义；戊巴比妥钠处理后的制远志、蜜远志与生远志相同剂量组间错误次数差异无统计学意义，而乙醇处理后的制远志高剂量组与生远志低剂量组间错误次数差异有统计学意义（表4）。

表4 生远志、蜜远志对小鼠学习记忆的影响Tab.4 The learning and memory effect of CRP，GRP and HRP in mice

2.4 不同炮制饮片对小鼠脑内单胺类神经递质含量的影响

结果见表5。戊巴比妥钠处理后的生远志、制远志高剂量组5－HT含量间差异有统计学意义，乙醇处理后的蜜远志高剂量组、制远志高剂量组与生远志低剂量组5－HT含量间差异有统计学意义；戊巴比妥钠处理后的生远志高、低剂量组，制远志低剂量组NE含量间差异有统计学意义；戊巴比妥钠处理后的生远志高、低剂量组，制远志低剂量组NE含量间差异有统计学意义；戊巴比妥钠处理后的制远志低剂量组与生远志低剂量组、脑复康组DA含量间差异有统计学意义（表5）。

表5 不同炮制品对小鼠脑内单胺类神经递质含量影响Teb.5 The effect of CRP，HRP and GRP on content of brain monoamine neurotransmitters in mice

3 讨论

明代陈嘉谟在《本草蒙荃》中提出“凡药制造，贵在适中，不及则功效难求，太过则气味反失......酒制升提，姜制发散......”。关于远志的炮制机制，《雷公炮炙论》中认为：“远志，凡使，先需去心……去心了，用熟甘草汤浸宿，漉出，曝干用之也”，并认为“若不去心，服之令人闷［7］”。远志炮制方法自古以来较多，现代研究证明，生远志对动物的消化道有刺激作用［8，9］，这与其含有的皂苷类成分有关，古人已经意识到通过不同炮制可以减轻其对人体的刺激作用。我们前期比较了不同炮制方法对其远志酸含量的影响，发现蜜炙、酒制与甘草制均可提高远志浸出物与远志酸的含量，而炒法则可降低其浸出物与远志酸的含量。通过对不同地区炮制规范的调查，现代以制远志、蜜远志炮制饮片为多，因此，我们在有效成分比较的基础上，进一步研究了其药效学差异。实验结果表明，蜜远志能减少小鼠的咳嗽次数，增加其呼吸道酚红的排泌，而制远志作用仅有增强趋势，可能与蜜远志中炮制辅料蜂蜜味甘滋润的性能有关。而三种炮制饮片对小鼠的自发活动均有影响，但其差异无统计学意义。远志甘草制后，能够减少小鼠跳台的错误次数，且小鼠脑内5－HT、NE及DA含量均升高。

综上可见，不同炮制方法对化学成分、药效作用均可产生影响，表明炮制对远志品质起到了调控作用，这与万德光教授在中药品质的多元调控论中“中药炮制是中药品质调控措施之一”的观点吻合。今后，还需进一步加强远志炮制对其品质调控的机制研究。

［1］万德光，陈林，刘友平，等.远志炮制沿革考［J］.中药材，2005，28（3）：233－235.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：146.

［3］中华人民共和国药政管理局.全国中药炮制规范［M］.北京：人民卫生出版社，1988：57－58.

［4］万德光.中药品质研究——理论、方法与实践［M］.上海：上海科学技术出版社，2008：52.

［5］王光志，万德光.不同炮制方法对远志质量的影响［J］.中成药，2009，31（2）：252－255.

［6］陈奇.中药药理实验方法［M］.北京：人民卫生出版社，1994：136，141.

［7］雷敩原著.尚志均辑校.雷公炮炙论［M］.合肥：安徽科学技术出版社，1991：25－26.

［8］吴晖晖，王建，刘贤武，等.远志及其不同蜜炙品的急性毒性及其对胃肠运动的影响［J］.四川中医，2006，24（11）：16－18.

［9］鲍荟竹，王建，吴晖晖，等.生远志及其皂苷与蜜远志对家兔离体肠平滑肌运动作用机制的实验研究［J］.时珍国医国药，2007，18（2）：29.